目的：建立采用¹H NMR法测定奥沙西泮杂质Ⅰ的绝对含量。方法：以对苯二甲酸二甲酯基准试剂为内标，以氘代氯仿为溶剂，采用Bruker Avance Ⅲ 500型核磁共振谱仪，noesyigld1d脉冲序列在恒温25 ℃下获取¹H NMR谱，测定奥沙西泮杂质Ⅰ的含量，驰豫延迟时间为25 s。结果：以奥沙西泮杂质Ⅰ的峰（δ 5.97）及对苯二甲酸二甲酯（δ 8.10）峰作为定量峰，将样品与内标的NMR峰面积比对其质量比绘制标准曲线，奥沙西泮杂质Ⅰ的线性范围为8~24 mg，相关系数为0.999 9，精密度RSD为0.08%（n=5），重复性RSD为0.43%（n=6），定量限为0.338 mg；核磁共振法测得奥沙西泮杂质Ⅰ的含量为99.8%，与质量平衡法测得结果99.6%基本一致。结论：采用核磁共振定量的方法可测定奥沙西泮杂质Ⅰ的绝对含量，此方法准确快捷，简单易行，是对标准物质绝对含量测定的一种良好的补充方法。