2012年, 第32卷, 第12期　
刊出日期：2012-12-25

  

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生物检定
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  人细胞色素P450_CYP2C19与CYPOR、CYPb5共表达模型的构建及其抑制剂筛选

  孔丽敏, 胡海红, 曾苏

  药物分析杂志. 2012, 32(12): 2099-2107.

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  目的: 获得人细胞色素P450 2C19(CYP2C19)蛋白重组酶,用特征性底物表征重组酶活性,并将该重组酶用于天然产物CYP2C19抑制剂的筛选。 方法: 构建含人CYP2C19基因的重组杆状病毒穿梭质粒,使用昆虫细胞-杆状病毒表达系统共表达人CYP2C19、细胞色素氧化还原酶(CYPOR)和细胞色素b5(CYPb5);用蛋白印迹分析(Western Blot)鉴定重组酶的表达;以奥美拉唑为底物进行代谢孵育,HPLC分析鉴定酶的活性;并使用该重组蛋白对70种天然产物进行抑制能力的筛选。 结果: Western Blot结果显示重组人CYP2C19蛋白在Sf 9细胞中成功表达,该重组酶代谢经典底物奥美拉唑的酶动力学参数分别为:米氏常数K_m为(4.99±0.22) μmol·L^-1,最大反应速率V_max为(0.2539±0.0024) μmol·min^-1·mg^-1蛋白,表观清除率CL_int值为0.0509 L·min^-1·mg^-1蛋白。对70种天然产物的抑制筛选实验显示白藜芦醇、大黄素、异土木香内酯、莪术醇、薄荷脑、鬼臼毒素、补骨脂素、五味子甲素、五味子乙素、新狼毒素B等对人CYP2C19有比较明显的抑制能力。 结论: 利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统,可获得代谢活性良好的重组人CYP2C19蛋白,该重组酶可进一步用于其他底物的Ⅰ相代谢研究以及各种抑制剂的筛选。
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  重组人脑利钠肽活性参考品制备及动脉条法生物学活性标定

  史新昌, 丁有学, 毕华, 李响, 刘兰, 韩春梅, 饶春明

  药物分析杂志. 2012, 32(12): 2108-2111.

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  目的: 建立重组人脑利钠肽(rhBNP)活性参考品,用于rhBNP生物学活性测定。 方法: 优化冻干配方,分装冻干rhBNP原液并检测分装精度,拉丝封口后,按中国药典2010年版三部方法,检测无菌检查、pH、水分、外观。用兔动脉条法由2个实验室协作标定其生物学活性。用热加速法对该批rhBNP参考品的稳定性做了初步评价。 结果: 分装冻干,拉丝封口等工艺制得rhBNP参考品458支,经测定分装精度小于1%,水分为0.6%,生物学活性经2个实验室共计10次标定,均值为107 RU·支^-1,95%的可信范围为97~118 RU·支^-1,经热动力学分析,该rhBNP参考品活性降低1%,需要10年以上的时间,说明稳定性较好,其他检测项目均符合标准品一般制备要求。 结论: 冻干人脑利钠肽活性参考品符合中国药典关于标准品制备要求,可用于rhBNP生物学活性测定。
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  一种基于人体发热机理设计的新热原检测方法研究

  贺庆, 谭德讲, 李冠民, 黄清泉, 高华

  药物分析杂志. 2012, 32(12): 2112-2117.

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  目的: 针对现有热原检测法存在的问题,研究建立体外混合新鲜人全血热原检测法。 方法: 本试验用来源于5个不同个体的混合新鲜人全血模拟人体,将其分别与热原标准品(细菌内毒素)、受试品溶液进行孵育,通过酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测并比较其孵育体系中相关内热原(主要为细胞因子,如IL-1β、IL-6、TNF-α)的含量,从而反映受试品的致热活性及热原污染情况。 结果: ①本试验热原刺激全血分泌的细胞因子中,IL-1β、IL-6较TNF-α更灵敏,更适用于检测热原;②新鲜人全血—IL-1β、IL-6法可检测多种热原 ,其对上述热原的反应总体较家兔法灵敏;③新鲜人全血—IL-1β、IL-6法的最佳孵育时间为17~24 h,所用全血应37 ℃保存,2 h内使用;④新鲜人全血—IL-1β、IL-6法对细菌内毒素最低检测限分别为0.05 EU·mL^-1和0.1 EU·mL^-1,两检测指标分别在LPS(0.05~1.6,0.1~1.6 EU·mL^-1)范围内与LPS浓度间均有较好的量效关系;⑤初步结果表明全血法可应用于生物制品 、中药注射液(如双黄莲注射液)及化药注射剂(如注射用甲氨蝶呤)的热原检测中。 结论: 体外混合新鲜人全血热原检测法具有对热原的检测谱宽、灵敏度高、应用范围较广等特点,可将该方法作为现有热原检测法(家兔法、细菌内毒素法)的补充方法对其做进一步论证研究。
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  毛细管电泳法测定重组人乳头瘤病毒原液的纯度

  周朝明

  药物分析杂志. 2012, 32(12): 2118-2121.

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  目的: 建立毛细管电泳法测定重组人乳头瘤病毒原液的纯度。 方法: 采用50 μm×57 cm(有效长度50 cm)无涂层毛细管。进样时方法设置为:进样5 kV,20 s;分离电压为15 kV,维持30 min,两端加压138 kPa;温度:25 ℃;检测波长:220 nm。 结果: 毛细管电泳法测定重组人乳头瘤病毒(HPV)16型、18型原液主峰分离度分别为2.4和3.0,HPV 16L1和HPV 18L1原液在浓度为0.125~0.750 mg·mL^-1时线性关系良好(HPV 16L1,r=0.9836;HPV 18L1,r=0.9931)。HPV 16L1和HPV 18L1原液的精密度和稳定性试验的RSD均<2.0%。 结论: 本文建立的方法可用于重组人乳头瘤病毒原液的纯度检测。
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  一种荧光PCR方法用于高危型HPV基因分型检测

  曲守方, 黄杰, 孙彬裕, 王菲菲, 徐超, 高尚先

  药物分析杂志. 2012, 32(12): 2122-2125.

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  目的: 建立一种可以检测高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)的荧光PCR方法,为临床宫颈癌的筛查提供新的检测试剂盒。 方法: 选择高危型HPV的L1区基因序列作为靶序列,应用Primer Premier 5.0软件在选取的序列区域设计引物和探针,建立和优化该检测方法。通过评价其准确性、灵敏度和特异性,建立一种荧光PCR方法,用于高危型HPV基因分型的检测。 结果: 用HPV L1基因型质控品进行检测时,该试剂盒针对高危型HPV L1基因质控品均具有较好的阳性结果;检测灵敏度约为10~100 拷贝·反应体系^-1;低危型HPV L1基因质控品则为阴性结果,用正常人白细胞全基因组DNA进行检测时,没有HPV特异性扩增信号出现。 结论: 建立的高危型HPV基因分型荧光PCR检测方法具有良好的准确性、检测灵敏度和特异性,可以用于临床宫颈癌的筛查。
代谢分析
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  超高效液相色谱-串联质谱法研究荭草提取物中4个黄酮类成分的大鼠组织分布

  黄勇, 张治蓉, 郑林, 何峰, 石凌云, 兰燕宇

  药物分析杂志. 2012, 32(12): 2126-2131.

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  目的: 建立同时测定大鼠静脉注射荭草提取物后组织器官中荭草素、牡荆素、木犀草苷和槲皮苷含量的UPLC-MS/MS方法,研究荭草提取物在大鼠体内心、肝、脾、肺、肾等9个组织器官的分布特征。 方法: 色谱柱为BEH C₁₈柱(2.1 mm×50 mm,1.7 μm),流动相:0.1%甲酸乙腈-0.1%甲酸水,梯度洗脱,流速0.35 mL·min^-1。组织样品机械匀浆后甲醇沉淀供测定。 结果: 在线性范围内4个成分的线性关系良好,准确度、日内和日间精密度、提取回收率均符合生物样品的分析要求。大鼠静脉注射荭草提取物后的组织分布试验结果表明:4个成分在肾脏等9种组织器官中均能检测到。4个成分主要分布在肾、肺等组织中,在脑中分布最少。 结论: 本文方法可用于荭草花提取物在大鼠体内的组织分布研究。
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  HPLC法测定大鼠血浆中乙醛的含量

  王蒙蒙, 徐涛, 王双虎, 陈连国, 胡国新, 林丹

  药物分析杂志. 2012, 32(12): 2132-2136.

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  目的: 建立检测大鼠血浆中乙醛(ACH)浓度的HPLC方法。 方法: 选择正丁醛-2,4-二硝基苯肼(DNPH)为内标,采用ZORBAX Eclipse XDB-C₁₈(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱,以甲醇-乙腈-水(25:35:40,v/v/v)为流动相,流速1.0 mL·min^-1,在紫外波长为360 nm处检测。血浆样品需经乙腈沉淀蛋白,离心后取上清与DNPH发生衍生化反应,正己烷-乙酸乙酯(5:1,v/v)萃取衍生化产物ACH-DNPH,进行高效液相色谱测定。 结果: 乙醛在0.05~10.00 μg·mL^-1浓度范围内线性关系良好(r=0.9999),检测限为0.01 μg·mL^-1,定量限为0.05 μg·mL^-1;高、中、低3个浓度的相对回收率为102.7%~109.0%;日内RSD为1.6%~4.3%,日间RSD为3.3%~6.3%。 结论: 本法可用于大鼠体内乙醇代谢动力学研究。
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  LC-MS/MS法同时测定人血浆和尿液中_对乙酰氨基酚及其结合物的浓度

  谭亲友^1,2,3, 陈根姩³, 李焕德¹, 朱荣华¹, 方平飞¹, 颜苗¹, 王峰¹

  药物分析杂志. 2012, 32(12): 2137-2143.

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  目的: 建立同时测定人血浆及尿液中对乙酰氨基酚(APAP)和其葡糖醛酸结合物(PG)的LC-MS/MS法。 方法: 血浆经10%丙二醇乙腈溶液沉淀蛋白处理,尿样则采取直接稀释进样,以茶碱(THE)为内标,采用高效液相色谱串联质谱法,Utilmate C₁₈(100 mm×2.1 mm,3.0 μm)色谱柱,流动相为乙腈-甲醇-水(含0.0875%甲酸)(4:4:92),流速0.3 mL·min^-1,柱温40 ℃;采用电喷雾电离(ESI⁺),多反应离子检测(MRM)方式进行定量分析:APAP m/z 151.6→109.4,PG m/z 349.9→173.8,THE m/z 180.9→123.4。 结果: 经10%丙二醇乙腈溶液处理后,血浆内源性物质无干扰,APAP和PG血浆平均萃取回收率分别为93.1%和93.7%,在10~30000 ng·mL^-1(APAP)和20~15000 ng·mL^-1(PG)范围内线性良好。质控(QC)样品APAP的日内、日间RSD分别为3.2%~10.8%和8.3%~10.6%,PG的日内、日间RSD分别为2.1%~9.3%和6.2%~11.2%。在血浆中APAP和PG的LLOQ均分别为10 ng·mL^-1和20 ng·mL^-1。尿样采取直接稀释进样,在100~6000 ng·mL^-1(APAP)和500~60000 ng·mL^-1(PG)范围内线性良好,APAP和PG的尿样平均萃取回收率分别为89.1%和92.3%,准确度在85%~115%之间。 结论: 本方法具有灵敏度高,操作简便等特点,可同时测定对乙酰氨基酚及其葡萄糖醛酸结合物在生物样品中的药物浓度,用于药物代谢动力学的研究。
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  超高效液相色谱-串联质谱法研究亚硫酸氢钠穿心莲内酯在不同种属血浆中的稳定性

  于敏, 张双庆, 孙旭, 李佐刚

  药物分析杂志. 2012, 32(12): 2144-2149.

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  目的: 建立超高效液相色谱-串联质谱的方法,测定血浆中亚硫酸氢钠穿心莲内酯(ASB)的含量,并用于研究ASB在不同种属血浆中的稳定性。 方法: ASB血浆样品用甲醇进行提取,以脱水穿心莲内酯(DAG)为内标进行定量。采用Hypersil Gold C₁₈(50 mm×2.1 mm,1.9 μm)色谱柱,柱温35 ℃;流动相为水-甲醇梯度洗脱,流速0.2 mL·min^-1;分析时间6 min。采用负离子电喷雾离子化电离源和选择反应监测(SRM)模式,进行串联质谱分析;用于定量分析的离子反应分别为m/z 413.2→287.2(ASB)和m/z 331.2→303.3(DAG)。浓度为1 μg·mL^-1 的ASB大鼠、犬、人血浆液37 ℃孵育,于不同时间点测定ASB含量,计算血浆中ASB剩余百分含量。 结果: ASB标准血浆样品的线性范围在10~1000 ng·mL^-1,定量下限为10 ng·mL^-1。方法的日内和日间准确度分别在96.4%~103.2% 和93.7%~98.0%,精密度(RSD)分别小于6.9%和10.8%,基质效应为88.9%~99.9%,提取回收率为71.2%~98.9%。大鼠、犬和人血浆中ASB剩余百分含量均明显下降,在犬血浆中5 min血药浓度降至70%的较高水平,在大鼠和人血浆中5 min降至30%左右,之后趋于平稳。 结论: 本方法适用于血浆中ASB的含量测定,ASB在不同种属血浆中下降均很快,但表现出明显的种属差异。
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  固相萃取结合HPLC-荧光法测定人血浆中维生素B₂_含量

  田兰¹, 孔彬¹, 杜晨松², 居来提·安尼瓦尔³, 买买提艾力·乌马尔², 巴吐尔·买买提明¹

  药物分析杂志. 2012, 32(12): 2150-2153.

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  目的: 建立固相萃取结合HPLC-荧光法测定人血浆中维生素B₂含量的方法。 方法: 采用Sirocco^TM96孔蛋白沉淀板和正压固相萃取装置处理样品,采用Symmetryshield^TM RP-C₁₈(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱,流动相为甲醇-5 mmol·L^-1乙酸铵(35∶ 65),流速为0.6 mL·min^-1,荧光检测器检测(激发波长:450 nm,发射波长:520 nm)。 结果: 维生素B₂线性范围为0.2~10 ng·mL^-1(r=0.9937)。定量下限为0.17 ng·mL¹,日内精密度(RSD)为2.0%~4.8%,日间精密度(RSD)为 3.8%,方法回收率为101.5%~116.0%(n=3 ),提取回收率为91.8%~115.1%。 结论: 所建方法采用96孔蛋白沉淀装置自动处理样品,高效液相色谱-荧光法测定,可用于临床血浆样品中维生素B₂含量的测定。
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  沙棘粗多糖对α-葡萄糖苷酶活性影响及酶动力学的研究

  曾阳^1,2, 郭凤霞^1,2, 陈振宁¹, 马继雄¹

  药物分析杂志. 2012, 32(12): 2154-2157.

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  目的: 探讨中国沙棘粗多糖中α-葡萄糖苷酶抑制剂的体外酶动力学的特性。 方法: 利用酶-抑制剂筛选模型,选择沙棘粗多糖,通过改变其浓度、反应时间、pH条件、温度等进行体外酶学动力学研究。 结果: 沙棘粗多糖浓度在0.0098~0.625 g·L^-1之间时,酶的抑制率随着浓度的增大而升高,IC₅₀为0.031 g·L^-1;浓度为0.625 g·L^-1时抑制率达92.52%,且与酶结合迅速,酸碱范围广,热稳定性好。 结论: 沙棘粗多糖是一种高活性的竞争可逆性α-葡萄糖苷酶抑制剂,抑制常数K_i=5.26 g·L^-1。
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  生物样品中苯乙醛酸和苯乙醇酸的HPLC测定方法

  李小妮^1,3, 孔令钰², 李楠², 黄美菊¹, 姚波¹, 王倩²

  药物分析杂志. 2012, 32(12): 2158-2161.

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  目的: 测定尿液中苯乙醛酸和苯乙醇酸含量。 方法: 采用Kromasil C₁₈ 柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相为乙腈-混合酸(冰醋酸0.5 mL+磷酸0.5 mL+水1000 mL)(5∶ 95),流速为1 mL·min^-1,柱温为25 ℃,检测波长为225 nm。 结果: 本实验对190个样品进行测定,PGA含量为0~0.384 mg·mL^-1,平均含量为0.071 mg·mL^-1;MA含量为0.007~0.497 mg·mL^-1,平均含量为0.121 mg·mL^-1。本方法苯乙醛酸在0.03298~0.4122 mg·mL^-1 (r=0.9991)范围内峰面积与浓度线性关系良好,定量限为17.2 ng;样品的加标回收率为95.2%~104.3%;批内精密度RSD为4.3%~6.8%,批间精密度RSD为4.5%~8.7%。苯乙醇酸在0.08158~1.0198 mg·mL^-1 (r=0.9994)范围内峰面积与浓度线性关系良好,定量限为20.4 ng;样品的加标回收率为99.3%~104.2%,批内精密度RSD为3.0%~5.1%,批间精密度RSD为5.7%~9.8%。 结论: 本方法操作简便,适用于尿中苯乙醛酸和苯乙醇酸的含量测定。
成分分析
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  马来酸罗格列酮与盐酸吡咯列酮在纳米银表面共吸附的表面增强拉曼光谱研究

  张雁^1,2, 尹利辉¹, 金少鸿¹

  药物分析杂志. 2012, 32(12): 2162-2167.

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  目的: 研究马来酸罗格列酮及其同类药物盐酸吡咯列酮在不同激发光波长下的酸碱度条件共存时的表面增强拉曼光谱,对两者在酸碱条件下的共存情况进行讨论。 方法: 用2种不同的激发光波长对不同酸碱条件下马来酸罗格列酮及盐酸吡咯列酮共存体系的表面增强拉曼散射进行考察。 结果: 研究表明,在532 nm和785 nm激发下,中性和碱性条件都不能鉴别两者,而偏酸性的pH条件有利于两者的鉴别。 结论: 偏酸性的条件有利于马来酸罗格列酮-盐酸吡咯列酮共存体系表面增强拉曼散射的同时检测。
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  高效液相色谱法测定四逆泡腾片中甘草黄酮含量

  王跃生¹, 李欣晴², 饶毅¹, 魏惠珍¹, 胡景婷³, 刘玲³

  药物分析杂志. 2012, 32(12): 2168-2171.

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  目的: 建立四逆泡腾片中甘草黄酮的高效液相色谱定量方法。 方法: 采用四逆泡腾片提取物酸水解方法制备甘草黄酮主要苷元—甘草素与异甘草素,采用Hypersil ODS2 C₁₈(4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱,以乙腈-水为流动相,梯度洗脱,流速0.8 mL·min^-1,检测波长230 nm,柱温40 ℃。 结果: 甘草素、异甘草素线性范围分别为0.0219~0.656 μg、0.0216~0.647 μg,r均为0.9999;平均加样回收率以甘草素与异甘草素的量之和计为100.6%,RSD为1.5%(n=6)。 结论: 该方法专属,分离效果好,灵敏度高,可用于四逆泡腾片的质量控制。
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  亲水作用色谱-质谱联用测定盐酸甲砜霉素甘氨酸酯中游离甘氨酸

  罗忠华, 彭玉薇

  药物分析杂志. 2012, 32(12): 2172-2175.

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  目的: 建立一种直接测定盐酸甲砜霉素甘氨酸酯(TGH)中游离甘氨酸的亲水作用色谱-质谱联用(HILIC-ESI/MS)方法。 方法: 选用丙氨酸为内标化合物;色谱柱为Waters Atlantic Hilic(150 mm×4.6 mm,5 μm),以0.1%甲酸溶液-0.1%甲酸乙腈溶液(25:75)为流动相;在电喷雾正离子模式下,对m/z 76与m/z90离子进行选择离子监测。 结果: 本法线性范围为0.05~6 μg·mL^-1(r=0.9998);检测限与定量限分别为0.2 ng·mL^-1与0.5 ng·mL^-1;低、中、高3个水平加标回收率分别为108.5%,105.3%,99.2%。 结论: 本法操作简便,重复性好,可用于TGH中游离甘氨酸的测定。
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  傅立叶变换红外吸收光谱法测定_改性聚丙烯材料中苯乙烯-乙烯-丁烯-苯乙烯含量

  蔡荣, 徐俊

  药物分析杂志. 2012, 32(12): 2176-2179.

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  目的: 建立改性聚丙烯材料中苯乙烯-乙烯-丁烯-苯乙烯(SEBS)含量的测定方法。 方法: 将实验材料热压成膜,记录红外吸收光谱图,根据朗伯-比尔定律,用苯乙烯与聚丙烯对应特征吸收校正峰高的相对比值直接测定改性聚丙烯材料中SEBS含量。 结果: SEBS含量在2%~20%范围内与吸收峰高的线性关系良好,r＝0.9996;SEBS的LOD和LOQ分别为0.3%和1.0%;平均回收率为103.1%。 结论: 傅立叶变换红外吸收光谱法可用于改性聚丙烯材料中SEBS含量的测定。
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  富马酸替诺福韦二吡呋酯的质谱分析及NMR测定富马酸相对含量

  周海云, 陈晓红, 李玮, 关山越

  药物分析杂志. 2012, 32(12): 2180-2183.

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  目的: 利用电子轰击(EI)质谱进行分析,得到富马酸替诺福韦二吡呋酯(TDF)的质谱特征;建立核磁共振氢谱(¹H-NMR)的方法分析富马酸与替诺福韦二吡呋酯的结合比例。 方法: 采用EI质谱对富马酸替诺福韦二吡呋酯进行分析,对质谱主要碎片峰进行归属;在对药物进行结构分析的基础上利用¹H-NMR信号强度与质子数成正比的特点,对化合物中富马酸的相对含量进行定量分析。 结果: EI质谱特征证明所检测化合物所结合的有机酸为富马酸,高分辨质谱检测得到的精确质量数和元素组成结果与替诺福韦二吡呋酯的分子式相符,主要质谱碎片峰归属得到合理解释。从¹H-NMR特征定量峰可以计算出富马酸与替诺福韦二吡呋酯结合比例。 结论: 本方法测定结果准确,为富马酸替诺福韦二吡呋酯的生产和鉴定提供可靠的数据。
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  活血化瘀药龙船花全草挥发油的GC-MS分析

  任赛赛, 潘为高, 李勇, 朱小勇, 朱意麟, 罗彭

  药物分析杂志. 2012, 32(12): 2184-2189.

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  目的: 研究龙船花全草挥发油的化学成分组成。 方法: 分别采用水蒸气蒸馏法和超临界CO₂萃取法提取制备2组挥发油;通过GC-MS和检索所用质谱库(NIST08.L,Wiley 275.L)检索研究其化学成分组成,用面积归一化法确定各成分的相对百分含量。 结果: 水蒸气蒸馏法挥发油中分离出27个色谱峰,鉴定了其中12个化合物,占挥发油总量的79.57%;超临界CO₂萃取法挥发油中分离出107个色谱峰,鉴定了其中73个化合物,占挥发油总量的78.37%。 结论: 龙船花全株含挥发油种类丰富,涵盖脂肪族及其含氧和含氮衍生物,芳香族和萜及其含氧衍生物。超临界CO₂萃取法得到的化学成分数目比水蒸气蒸馏法丰富。超临界CO₂萃取物化学成分种类的阐述为龙船花多种药理活性的物质基础研究提供了借鉴。
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  pH、温度和光照等因素对胸腺肽α₁稳定性的影响

  戴杰, 程亮, 程丽芳, 陈大为

  药物分析杂志. 2012, 32(12): 2190-2193.

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  目的: 考察pH、温度、光照等因素对胸腺肽α₁稳定性的影响。 方法: 采用HPLC法分析胸腺肽α₁在不同条件下的含量变化,将浓度变化与时间作线性回归,求得药物在不同pH条件下的降解曲线方程,利用降解速率常数反映出胸腺肽α₁在恒温条件下的最适pH。 结果: 酸、碱、光照及高温均能促进胸腺肽α₁的降解,药物的最稳定pH在5~6之间,且在醋酸盐缓冲液中较稳定。 结论: 温度、pH、光照等因素对胸腺肽α₁的稳定性有显著影响。
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  RP-HPLC法同时测定黄秋葵中3个黄酮苷的含量

  廖海兵¹, 施湘君², 刘婷³, 刘华亮¹, 袁珂¹

  药物分析杂志. 2012, 32(12): 2194-2197.

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  目的: 建立RP-HPLC法同时测定黄秋葵不同部位3个黄酮苷 -α-D-葡萄糖苷(HQK-2),槲皮素-4″-O-甲基-3-O-β-D-葡萄糖苷(HQK-3)\]的含量。 方法: 采用SunFire C₁₈(4.6 mm×250 mm,5.4 μm)色谱柱,流动相为甲醇-0.1%磷酸水溶液(47:53),流速0.8 mL·min^-1,检测波长255.6 nm,柱温28 ℃。 结果: 本方法可在15 min内完成对HQK-1、HQK-2、HQK-3的色谱分析,且各成分色谱峰之间均达到基线分离;各测定成分的线性范围分别为0.632~9.48 μg(r=0.9992),0.065~0.975 μg(r=0.9995)和0.102~1.53 μg(r=0.9990);平均加样回收率(n=9)分别为100.9%,98.4%,101.8%。以黄秋葵不同部位的3个黄酮苷类成分为研究对象,测定了黄秋葵种子、花、果实、叶、皮中各黄酮苷的含量。 结论: 结果表明黄秋葵花、种子、果实中黄酮含量较丰富,叶、皮中含量相对较少。本研究所建立的含量测定方法为黄秋葵的入药及资源利用提供了参考依据,可用于黄秋葵中黄酮类成分的定量分析。
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  知柏地黄丸中盐酸小檗碱和盐酸巴马汀的含量测定

  陈庆辉, 唐元军

  药物分析杂志. 2012, 32(12): 2198-2202.

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  目的: 建立知柏地黄丸中盐酸小檗碱和盐酸巴马汀的含量测定,控制知柏地黄丸的质量。 方法: 采用高效液相色谱法,在Welch Materials XB-C₁₈(5 μm,250 mm×4.6 mm)色谱柱上,以乙腈为流动相A,以0.1%三氟乙酸为流动相B,梯度洗脱,检测波长为345 nm,柱温25 ℃。 结果: 盐酸小檗碱在3.78~37.8 μg·mL^-1的浓度范围内具有良好的线性关系,盐酸巴马汀在2.65~26.5 μg·mL^-1的浓度范围内具有良好的线性关系。盐酸小檗碱和盐酸巴马汀的平均回收率(n=6)分别为97.6% (RSD=1.1%)和99.5% (RSD=0.2%)。 结论: 用本文方法检验了268批知柏地黄丸样品,发现41批混淆使用了关黄柏。
安全监测
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  HPLC柱后光衍生荧光法测定中药饮片中黄曲霉毒素残留量

  郝爱鱼¹, 赵丽元¹, 刘英慧¹, 王戈¹, 金红宇², 毕秀玲¹, 门启鸣¹

  药物分析杂志. 2012, 32(12): 2203-2207.

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  目的: 采用免疫亲和净化HPLC柱后紫外光化学衍生荧光检测法研究中药饮片中黄曲霉毒素测定的加样回收率,考察该方法在中药饮片黄曲霉毒素残留测定中的可行性,评价120批中药饮片的污染状况,总结污染规律。 方法: 样品经溶剂提取、免疫亲和柱净化后由HPLC柱后光衍生荧光检测法测定其中黄曲霉毒素残留量,对每种饮片进行4 μg·kg^-1(以黄曲霉毒素B₁计)的加样回收率考察。 结果: 黄曲霉毒素B₁、B₂、G₁、G₂的最低检测限分别为0.44,0.12,0.41,0.16 pg;线性范围分别为1.74~218.0,0.50~62.17,1.63~203.1,0.62~61.94 pg(r﹥0.9999)。所考察饮片中黄曲霉毒素B₁、 B₂、 G₁、 G₂总回收率和B₁回收率均在60%~120%之间的占87%;被污染的批次占9.2%,其中污染程度超过目前中国药典限度的占6.7%。 结论: 免疫亲和净化HPLC柱后光衍生荧光检测法具有方法简便,衍生反应稳定,灵敏度高,重现性好,反应系统污染少的优点,适合于大多数中药饮片的黄曲霉毒素检测;种子类被污染的程度严重,应扩大该类中药的监测范围。
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  梯度洗脱HPLC法测定盐酸氨溴索口服溶液中甜味剂含量

  李薇, 金薇, 乐健, 杨永健

  药物分析杂志. 2012, 32(12): 2208-2212.

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  目的: 建立高效液相色谱法测定盐酸氨溴索口服溶液中4种甜味剂(安赛蜜、糖精钠、阿司帕坦、甜菊糖/甜菊素)的方法,并在2011年度国家药品质量评价性抽验工作中,按照所建方法对盐酸氨溴索口服溶液中的4种甜味剂进行测定和评价。 方法: 采用Agilent SB-C₁₈(4.6 mm×150 mm,5 μm)柱,流动相A为0.02 mol·L^-1磷酸二氢铵缓冲液(pH 4.4),流动相B为乙腈,流速1.0 mL·min^-1,线性梯度洗脱,检测波长为200 nm(糖精钠、阿司帕坦、甜菊糖/甜菊素)和226 nm(安赛蜜)。 结果: 安赛蜜、糖精钠、阿司帕坦和甜菊糖/甜菊素分离完全,各辅料均无干扰,线性范围分别为0.00561~0.225 mg·mL^-1(r=1.0000)、0.00106~0.106 mg·mL^-1(r=1.0000)、0.00522~0.209 mg·mL^-1(r=0.9999)和0.00517~0.296 mg·mL^-1(r=1.0000);检测限分别为0.4 ng,0.4 ng,1.6 ng和15.5 ng;定量限分别为1.3 ng,1.5 ng,5.2 ng和51.7 ng;平均加样回收率(n=6)分别为98.8%(RSD=0.5%),99.5%(RSD=0.3%),100.6%(RSD=0.2%),99.1%(RSD=1.1%)。 结论: 本法具有较高的选择性,结果稳定,通过测定甜味剂的含量可监控制剂生产过程中辅料投料是否与处方一致。
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  HPLC-ESI-MSⁿ法分离和鉴定盐酸克林霉素棕榈酸酯原料药中的10种杂质

  王建¹, 王红波², 洪利娅¹

  药物分析杂志. 2012, 32(12): 2213-2220.

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  目的: 用HPLC-ESI-MSⁿ法分离和鉴定国产盐酸克林霉素棕榈酸酯原料药中的10种杂质,并探讨这些杂质的质谱裂解规律。 方法: 采用Agilent ZORBAX SB-C₈色谱柱(150 mm×3.0 mm,3.5 μm),流动相为5 mmol·L^-1醋酸铵溶液-乙腈(25:75),在正离子检测方式下,AB SCIEX 4000 Q TRAP LC/MS/MS仪对盐酸克林霉素棕榈酸酯中的杂质进行在线多级质谱分析。 结果: 通过多级质谱裂解推断盐酸克林霉素棕榈酸酯原料药中10种杂质分别为克林霉素、丙叉克林霉素、亚砜克林霉素棕榈酸酯、克林霉素十二酸酯、棕榈酸乙酯、克林霉素十四酸酯、克林霉素B棕榈酸酯、表克林霉素棕榈酸酯、克林霉素十八酸酯、丙叉克林霉素棕榈酸酯。 结论: 鉴定了盐酸克林霉素棕榈酸酯原料药中10个杂质的结构,其中3个杂质为新的杂质。
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  口服固体制剂中20种邻苯二甲酸酯类化合物的GC-MS法测定

  郭毅, 王雪芹

  药物分析杂志. 2012, 32(12): 2221-2225.

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  目的: 建立口服固体制剂中邻苯二甲酸酯类化合物的测定方法。 方法: 采用甲醇提取,过滤,DB-5MS色谱柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm),氦气为载气,流速1.0 mL·min^-1,GC-MS联用法检测,检测方式为SCAN和SIR。 结果: 实验条件下,20种邻苯二甲酸酯类能很好分离检测,各组分的检出限均大于2 μg·g^-1,线性范围均在2~40 μg·mL^-1之间,相关系数均大于0.99,RSD均小于10%,加标回收率在79%~99%之间。 结论: 本法对色谱柱和仪器污染小,进样残留少,可同时测定口服固体制剂中的20种邻苯二甲酸酯类化合物。
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  电感耦合等离子体发射光谱法测定盐酸奈必洛尔原料药中催化剂钯的残留量

  陈阳, 金薇, 杨永健

  药物分析杂志. 2012, 32(12): 2226-2228.

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  目的: 考察盐酸奈必洛尔原料药中催化剂钯的残留量。 方法: 采用电感耦合等离子体发射光谱法,测定波长为340.458 nm,以微波消解法进行样品前处理,并将测定结果与石墨炉原子吸收光谱法比较。 结果: 在10~100 ng·mL^-1的浓度范围内,钯的发射强度与浓度呈良好的线性关系,重复性试验的RSD为1.6%,加样回收率为94.2%,检测限为0.5 μg·g^-1。 结论: 该法可作为石墨炉原子吸收法的替代或补充,可用于原料药中催化剂钯的残留量测定。
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  呋喃妥因肠溶片中有关物质检测及结构分析

  徐长根¹, 柳小秦¹, 吴少平¹, 刘海静¹, 丁丽霞², 杜冠华³

  药物分析杂志. 2012, 32(12): 2229-2233.

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  目的: 分别建立呋喃妥因肠溶片中硝基糠醛二乙酯和呋喃西林、水解产物杂质A的HPLC测定方法,并采用液质联用技术对共性未知杂质进行结构分析。 方法: Phenomenex C₁₈色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),测定硝基糠醛二乙酯的流动相为:磷酸盐缓冲液(取KH₂PO₄ 6.8 g,加水500 mL,用磷酸调pH至4.5)-乙腈(50:50),检测波长306 nm;测定呋喃西林、水解产物杂质A的流动相为:磷酸盐缓冲液(取KH₂PO₄ 6.8g,加水500 mL,用磷酸调pH至4.5)-乙腈(90:10),检测波长为365 nm。 结果: 样品中各成分的分离度及检出灵敏度能满足有关物质限度的要求。硝基糠醛二乙酯的检出限为1.5 ng,呋喃西林和杂质A的检出限分别为0.08 ng、0.14 ng。 结论: 建立的HPLC测定方法灵敏、准确、专属性强,适用于呋喃妥因片中有关物质的测定;采用液质联用技术初步推测出了未知杂质1的结构。
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  注射用头孢他啶杂质研究

  孙雪奇¹, 王野¹, 刘峥¹, 刘华¹, 罗慧萍¹, 袁军¹, 胡昌勤²

  药物分析杂志. 2012, 32(12): 2234-2239.

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  目的: 对国产注射用头孢他啶与原研厂产品的杂质进行分析,对其中的主要杂质进行初步研究。 方法: HPLC法,采用菲罗门Gemini C₁₈柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相A为磷酸盐缓冲液(磷酸氢二钠3.6 g与磷酸二氢钾1.4 g加水至1000 mL,用10%磷酸调pH 3.4),流动相B为乙腈,梯度洗脱,流速:1.3 mL·min^-1,柱温:40 ℃,紫外检测器:检测波长254 nm;TOF质谱检测器。 结果: 国产样品共检出37个杂质,其中,杂质2、12、24(即BP中的杂质F 、A、H)是主要杂质,平均含量分别为0.23%,0.17%,0.48%;来自合成的杂质24为85%,属样品中的最大杂质;杂质总量平均为1.43%。原研产品主要含杂质2、12,含量分别为0.20%和0.18%;最大杂质为杂质2;杂质总量为0.85%。原研产品与国产头孢他啶杂质谱不同;两者可能具有不同合成路线。 结论: 国产注射用头孢他啶中杂质24含量高,应优化生产工艺,控制其含量。
过程控制
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  热毒宁注射液中绿原酸的降解动力学研究

  邱喜龙¹, 任晓亮¹, 张慧杰¹, 萧伟^2,3, 戚爱棣¹

  药物分析杂志. 2012, 32(12): 2240-2245.

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  目的: 研究热毒宁注射液中绿原酸(chlorogenic acid,CHA)在不同pH和温度条件下降解反应的动力学特征。 方法: 采用高效液相色谱法(HPLC)考察不同pH和温度下绿原酸对照品水溶液及热毒宁注射液中绿原酸的含量变化,利用化学反应动力学的方法计算绿原酸在不同环境下的降解反应动力学参数,用阿仑尼乌斯公式预测其有效期(t_0.9)、半衰期(t_0.5)和活化能(energy of activation,Ea)。 结果: 绿原酸在不同pH和温度下的降解反应均遵循一级动力学规律,在pH7水溶液中绿原酸的t_0.9=22 d、t_0.5=104 d、Ea=90.89 kJ·mol^-1;在热毒宁注射液中绿原酸的t_0.9=31 d、t_0.5=203 d、Ea=140.49 kJ·mol^-1。 结论: 绿原酸在水溶液及热毒宁注射液中均在酸性、低温条件下较稳定。同样条件下,绿原酸在热毒宁注射液中的稳定性都要高于绿原酸水溶液。可根据绿原酸降解动力学模型,用于热毒宁注射液有效性和稳定性的评价。
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  星点设计-效应面法优化壮药千斤拔提取工艺

  陈鹏¹, 秦海洸², 岳桂华³, 李少旦⁴, 殷虎⁵, 覃洪含¹, 沈树虎^1,6

  药物分析杂志. 2012, 32(12): 2246-2252.

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  目的: 采用星点设计-效应面法优化千斤拔的回流提取工艺。方法: 以乙醇浓度、提取时间和溶媒比为自变量,以染料木苷、染料木素和浸膏等的收率为因变量,通过对自变量的总评归一值进行多元线性回归和二项式拟合,采用效应面优化最佳的工艺条件。 结果: 各指标的二项式拟合方程均优于多元线性回归方程,确定回流提取工艺条件为乙醇浓度(X₁)为60%~80%,溶媒比(X₂)为24~26倍,提取时间(X₃)为180~240 min,提取次数是2次。工艺验证的总评归一预测值与实际值的偏差为-7.2%,二项式拟合的复相关系数R=0.9343。 结论: 采用星点设计-效应面法优选方法优化的染料木苷和染料木素提取工艺,方法简便、预测性良好。
标准研讨
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  HPLC同时测定补肾益寿片中朝藿定A、B、C和淫羊藿苷的含量

  高静, 周文, 刘然, 杨建雄

  药物分析杂志. 2012, 32(12): 2253-2256.

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  目的: 建立高效液相色谱法同时测定补肾益寿片中朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C和淫羊藿苷的含量。 方法: 采用Elite Kromasil C₁₈(4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱,流动相为乙腈(A)-水(B),梯度洗脱(0~24 min,25%A→27%A;24~30 min,27%A→100%A),流速1 mL·min^-1,检测波长270 nm,柱温20 ℃。 结果: 朝藿定A进样量在0.096~0.768 μg,朝藿定B在0.200~1.60 μg,朝藿定C在0.276~2.21 μg,淫羊藿苷在0.416~3.33 μg范围内呈良好线性关系;相关系数分别为0.9991,0.9986,1.0000,0.9997。朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C和淫羊藿苷的平均回收率(n=5)分别为97.8%,99.5%,99.2%,100.2%;RSD分别为2.4%,3.9%,3.1%,3.5%。 结论: 本文方法可作为补肾益寿片中多指标成分检测的方法,为补肾益寿片的质量控制提供依据。
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  大黄不同品种不同产地加工品的蒽醌含量比较

  李芸¹, 苗小楼², 吴平安¹, 米哲仁³, 魏舒畅¹, 李越峰¹, 刘峰林¹

  药物分析杂志. 2012, 32(12): 2257-2261.

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  目的: 比较大黄不同品种、不同产地加工品蛋吉、苏吉和水根的蒽醌含量。 方法: 采用RP-HPLC法测定大黄不同种类不同产地加工品中蒽醌的含量。色谱柱:Hypersil ODS-2 C₁₈(4.6 mm×250 mm,5 μm);Kromasil ODS保护柱(4.6 mm×10 mm,5 μm);流动相:甲醇-0.1%磷酸(85:15);流速:0.8 mL·min^-1;检测波长:435 nm;柱温:25 ℃。 结果: 大黄不同品种、不同规格的产地加工品,其蒽醌含量存在很大差异。无论是蛋吉、苏吉和水根,以四川药用大黄蒽醌含量为最高,甘肃礼县掌叶大黄次之,再次为青海和四川若尔盖唐古特大黄,甘肃渭源和陇西掌叶大黄为差;对同一品种、不同规格的产地加工品的蒽醌含量,蛋吉≥苏吉>水根。 结论: 大黄不同品种、不同规格的产地加工品,其蒽醌含量存在很大差异。不同品种大黄其蒽醌含量:药用大黄>掌叶大黄>唐古特大黄;不同规格加工品:蛋吉≥苏吉>水根。主根明显优于支根。
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  麦冬药材TLC及HPLC特征图谱研究

  车晓彦, 伍丕娥, 周娟, 秦薇

  药物分析杂志. 2012, 32(12): 2262-2266.

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  目的: 建立麦冬药材的TLC及HPLC特征图谱,为科学评价和有效控制其质量提供可靠方法。 方法: 采用3种TLC法建立麦冬薄层特征图谱;采用HPLC法建立麦冬液相特征图谱:色谱柱为Welch AQ C₁₈色谱柱(200 mm×4.6 mm,5 μm),乙腈-水为流动相,梯度洗脱,柱温30 ℃,流速为1.0 mL·min^-1,检测波长205 nm,进样量10 μL。 结果: 麦冬TLC鉴别分离良好;麦冬HPLC特征图谱有6个共有峰,不同来源的川麦冬相似度大于0.94,3批浙麦冬相似度低,HPLC方法的精密度、稳定性和重现性良好。 结论: 所建方法可行,可用于麦冬药材的质量控制。
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  Petrifilm测试片法在药品微生物检验中的应用研究

  王鲁华, 刘婷婷, 卢京光, 孙振平

  药物分析杂志. 2012, 32(12): 2267-2269.

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  目的: 讨论Petrifilm测试片在药品微生物检查中的应用。 方法: 通过人工接种试验菌株,比较平皿法和Petrifilm测试片法在20个药品品种微生物检验中的应用。 结果: 平皿法与Petrifilm测试片法用于药品检验,结果无显著性差异。 结论: Petrifilm测试片法操作简单方便,可以用于某些药品品种的微生物检查。
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  抗A、抗B血型定型试剂(单克隆抗体)国家参考品的制备与协作标定

  马秋平, 吕秀华, 侯继锋

  药物分析杂志. 2012, 32(12): 2270-2273.

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  目的: 制备并标定抗A、抗B血型定型试剂(单克隆抗体)国家参考品。 方法: 按2010版年版中国药典三部和2000年版《中国生物制品规程》的有关要求,制备了抗A、抗B血型定型试剂(单克隆抗体),并分装冻干、进行质量检测,复溶后对效价开展协作标定,并进行稳定性检测。 结果: 抗A、抗B血型定型试剂的装量、外观、复溶时间、特异性、亲和力、效价、冷凝集素和不规则抗体检测、水分测定均符合2000年版《中国生物制品规程》中的规定。不同实验室的标定结果差异较大,计算效价的几何均数,抗A血型定型试剂结果为对A₁ 1:256~1:512之间,对A₂ 1:128~1:256之间,对A₂B 1:128~1:256之间;抗B试剂结果对B 1:256~1:512之间。稳定性检测符合要求。 结论: 该抗A、抗B血型定型试剂各项指标均符合要求,可作为国家参考品使用;经标准物质委员会讨论,将该参考品稀释1倍后可作为抗A、抗B血型定型试剂产品的最低效价标准。