目的: 对合成大麻素类新精神活性物质在电子轰击模式下质谱(EI-MS)的裂解规律进行探讨。方法: 采用气相色谱-质谱(GC-MS)对40种合成大麻素类进行系统研究,电子轰击电离源,电子能量70 eV;扫描范围m/z 50~600。结果: 依据“头部基团”和“连接基团”结构的不同,将40种合成大麻素分为6类,分别为苯基异丙基-酰胺类、金刚烷-酰胺类、氨甲酰基/丁酸甲酯-酰胺类、萘甲酰类、苯甲/乙酰类和四甲基环丙烷-酰类。通过对合成大麻素EI-MS质谱图的解析,给出了不同种类合成大麻素的EI-MS裂解规律以及特征离子。合成大麻素主要的EI-MS裂解规律为“连接基团”中羰基的两侧极易发生α断裂,以及吲哚/吲唑母核上的N原子易发生γ-H重排,并失去一分子R₁。此外,碎片离子m/z 116、130、144为吲唑母核的特征碎片,而碎片离子m/z 117、131、145为吲哚母核的特征碎片离子,可用于确定合成大麻素母核。结论: 该类化合物有着较强的裂解规律,在缺少标准物质或商业化的质谱库难以获取时,所提出的合成大麻素EI-MS裂解规律可以帮助对未知的合成大麻素进行快速结构鉴定。

治疗性寡核苷酸(oligonucleotides,OGNs)药物是人工化学合成的短单链或双链核酸,长度通常为15~30个碱基对。OGNs作为一种新的治疗药物正在迅速发展,并在各种疾病领域的药物发现和开发中受到越来越多的关注。与欧美相比,除Spinraza (nusinersen)作为孤儿药在中国获批上市外,暂无其他OGNs药物在国内上市。国内OGNs药物开发起步较晚,仍然处于发展初期,但由于国内患者群体基数较大,需求较多,未来伴随OGNs药物开发的持续推进,以及国内企业相应技术的逐步成熟,我国OGNs药物市场有望迎来快速发展。OGNs药物由于其独特的理化性质,生物分析方法开发难度大,目前,国内关于OGNs药物定量分析方法的报道还很少。开发一种灵敏可靠的方法来表征生物样品中的OGNs是研究其药代动力学和药效学性质的关键。相对于传统的ELISA法,LC-MS法可以同时定量完整OGNs及其代谢物,特别是高分辨质谱的广泛应用不仅可以提供目标OGNs的定量信息,还可以对代谢物进行鉴定,提供碱基组成、序列结构等信息,目前已成为OGNs定量分析的首选方法。本文主要描述了LC-MS在治疗性OGNs药物检测中的应用,并阐述了其优点和局限性,最后探讨了LC-MS用于检测OGNs的发展趋势,即更低的检测水平和潜在的通用方法。

促甲状腺激素(thyroid-stimulating hormone,TSH)是由垂体前叶产生的糖蛋白激素。可调节甲状腺滤泡细胞中甲状腺激素的合成和分泌,具有重要生理学意义,作为药物具有重要应用价值,生物学活性检测是评价其质量的有效和必要手段,本文就促甲状腺激素的信号转导作用机理、促甲状腺激素的临床诊断与治疗、生物学活性测定方法进行论述。

目的: 气相色谱-质谱联用(GC-MS)法结合保留指数比较不同方法提取羊红膻挥发油成分异同。方法: 采用水蒸气蒸馏法、盐析辅助水蒸气蒸馏法、酶解辅助水蒸气蒸馏法提取羊红膻挥发油,通过GC-MS结合保留指数分析上述不同方法提取挥发油的化学成分,并采用峰面积归一化法计算挥发油成分相对含量。结果: 3种提取方法的挥发油提取率大小顺序为酶解辅助水蒸气蒸馏法、盐析辅助水蒸气蒸馏法、水蒸气蒸馏法。盐析辅助水蒸气蒸馏法提取的挥发油种类最多,其次为酶解辅助水蒸气蒸馏法,最后为水蒸气蒸馏法。不同方法提取的羊红膻挥发油主成分种类基本不变,但各类化合物的相对含量有变化。3种方法提取出的挥发油共鉴定出47个化合物,共有化合物35个,主要包括萜烯类、萜醚类、萜醇类、芳香族类和脂肪族类,其中含量较高的化合物有β-红没药烯(17.25%~19.42%)、石竹素(12.90%~15.70%)、1-(3-甲基-2-丁烯氧基)-4-(1-丙烯基)苯(5.02%~9.36%)和β-蒎烯(5.31%~6.62%)。结论: 不同方法提取的羊红膻挥发油的化学成分种类及相对含量有一定的差异,但差异不大。研究结果可为提取羊红膻挥发油选择适宜提取方法及进一步的开发利用提供参考。

目的: 分析不同采收期辛夷挥发油的组分和相对含量,探讨5个采收期辛夷化学成分的动态变化规律,并评价其抗氧化、抗菌活性。方法: 采用水蒸气蒸馏法对5个采收期辛夷药材进行挥发油提取,利用气相色谱-质谱联用技术分析其化学成分,并计算各成分的相对含量;对5个采收期辛夷的成分进行偏最小二乘法判别分析,筛选出差异性化合物;采用铁离子还原/抗氧化能力法测定辛夷挥发油的抗氧化活性,96孔板法研究其体外抗菌活性。结果: 第4采收期(2023年2月10日)辛夷药材总挥发油平均含量最高;从辛夷挥发油中鉴定出38个成分,筛选得到12个差异性化合物,包括γ-衣兰油烯、榄香烯、δ-杜松烯、α-松油醇等,其中γ-衣兰油烯、别香橙烯、2-茨醇、樟脑和顺式-4-侧柏醇在第4采收期相对含量最大,与挥发油含量变化趋势基本一致;5个采收期辛夷挥发油均表现出一定的抗氧化、抗菌活性,第4采收期抗氧化能力最强,且对五种菌的抑制作用均较强。结论: 5个采收期辛夷挥发油化学成分基本相同,但在各采收阶段其挥发性成分相对含量有明显差异,推测2月初为辛夷最佳采收期。

目的: 建立超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)同时测定蔗糖中47种农药残留量的方法。方法: 蔗糖样品经酸性乙腈提取,氮气吹干浓缩,采用LC-MS/MS 进行分析检测,在多反应检测模式(MRM)下,用空白基质标准曲线-内标法进行定量。结果: 各待测物质在一定浓度范围内线性良好(r>0.995),检测限为0.01~2.00 μg·kg^-1。分别在蔗糖样品中添加47 种农药标准溶液10、25、50 μg·kg^-1,进行标准添加回收试验,方法回收率为71.0%~106.0%,重复性RSD为0.90%~8.5%。15批蔗糖样品中2批检出噻虫嗪、噻虫胺,其余均未检出。结论: 该方法具有前处理简单快捷、灵敏、准确等优点,符合农药残留检测要求,满足蔗糖中农药残留检测需要,可用于蔗糖的质量控制。

目的: 构建人脐静脉细胞膜色谱(HUVEC/CMC)模型,并将其应用于莱菔子中抗血管性疾病活性成分的快速筛选。方法: 采用HUVEC/CMC模型二维在线联用HPLC-ESI IT TOF MS系统对莱菔子活性成分进行分离、筛选和鉴定,并将筛选的活性成分进一步作用于氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的HUVEC,验证其保护作用。结果: 利用所建立的方法从莱菔子中共筛选出2个保留组分,通过与对照品比对,鉴定出1个成分为芥子酸。与模型组比较,芥子酸低、中、高预处理组细胞存活率显著增加,细胞中ICAM-1和VCAM-1的含量下降,并呈剂量依赖性;Bcl-2蛋白表达水平下降、Bax蛋白表达升高,具有统计学意义(P<0.05)。结论: 构建的HUVEC/CMC在线联用HPLC-ESI IT TOF MS系统可用于快速筛选复杂中药体系中活性成分,为细胞膜色谱的应用和莱菔子的开发提供了参考。

目的: 建立环孢素眼用乳剂体外释放方法。方法: 采用Franz扩散池,聚偏氟乙烯膜滤膜,以缓冲盐-无水乙醇(40∶60)为接收液,时间点为60、125、190、255、320、385 min。结果: 方法学验证表明,体外释放方法的滤膜惰性、专属性、灵敏度、选择性均符合规定。测定方法的定量限为0.07 μg·mL^-1,在0.07~44.62 μg·mL^-1范围呈现良好的线性关系,回收率为98.9%。依据FDA的判定原则,自研制剂与参比制剂体外释放行为一致。结论: 本法适合环孢素眼用乳剂的体外释放度评价。

目的: 建立液液萃取液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)同时测定人血浆中甘草酸、甘草次酸的浓度。方法: 在0.1 mL人空白血浆中加入甘草酸、甘草次酸及内标物Apixaban-13C-d₃(IS),离子化试剂(20%甲酸溶液)50 μL,以乙酸乙酯490 μL、甲基叔丁基醚210 μL为萃取剂,萃取后上清液氮气吹干,再用含0.2%甲酸的[乙腈-水(1∶1)]溶液200 μL复溶,进行LC-MS/MS分析。色谱条件:采用Boston Mni C₁₈(50 mm×2.1 mm,3 μm)色谱柱,流动相为0.2%甲酸水溶液-0.2%甲酸乙腈溶液,梯度洗脱,流速0.6 mL·min^-1,柱温40 ℃,进样体积5 μL,进样器温度4 ℃;质谱条件:采用电喷雾离子源(ESI⁺),选择多反应监测模式(MRM)进行定量分析,检测离子对分别为m/z 823.4→453.3(甘草酸)、m/z 471.4→189.0(甘草次酸)和m/z 464.3→447.1(IS)。结果: 血浆中甘草酸和甘草次酸质量浓度分别在0.5~80 ng·mL^-1和2~800 ng·mL^-1范围内线性关系良好(r＞0.99),最低定量浓度分别为0.5 ng·mL^-1和2 ng·mL^-1。批内、批间精密度(RSD)均＜6.8%,准确度在92.3%~104.2%;甘草酸和甘草次酸的提取回收率分别约为28.0%和40.0%,IS的提取回收率约为65%,RSD均小于7.9%;甘草酸和甘草次酸的内标归一化基质因子均约为1,RSD均小于7.3%。结论: 该方法灵敏、准确、简便、快速,可用于人血浆中甘草酸及甘草次酸的同时测定。

目的: 优化并建立一种快速检验血液和尿液中12个苯二氮䓬类药物的实时直接分析串联质谱(direct analysis of real time,DART-MS/MS)方法,使其能够用于法医毒物检验工作。方法: 使用DART离子源与API4000 Q Trap质谱仪联用;装载DART 12Dip-It^TM自动进样模块,模块移动速度为0.6 mm·s^-1,进样量为5 μL,栅极电压为200 V;质谱部分在正离子模式下使用多反应监测(MRM)模式扫描监测。进一步优化DART-MS/MS条件后建立的方法经过方法学验证,并应用于实际案例检材。结果: 选用乙酸乙酯为萃取剂进行液液萃取,优化载气加热器温度;该方法选择性良好,无延迟效应;线性关系良好,血液和尿液中目标物检测限分别在0.5~10 ng·mL^-1和0.2~2 ng·mL^-1,定量限分别在1~50 ng·mL^-1和 0.5~5 ng·mL^-1;回收率在78.8%~119.0%,基质效应在-17.5%~18.5%;高、中浓度的日内、日间精密度与重复性不大于14.4%,定量限不大于18.1%。结论: 该方法快速简便,灵敏度良好,可应用于毒物快速检验研究与工作,提高检验效率。

目的: 建立检测柴胡及藏柴胡中柴胡皂苷K成分的液相色谱-质谱法(LC-MS)检查方法,用以快速鉴别北柴胡是否为藏柴胡或混有藏柴胡。同时对16批藏柴胡和157批柴胡饮片中的柴胡皂苷K进行检测。方法: 采用超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱(UPLC-QqQ-MS)对柴胡及藏柴胡中柴胡皂苷K进行检测,色谱柱为Phenomenex Kinetex C₁₈(100 mm×2.1 mm,1.7 μm),流动相为乙腈(A)-水(B),梯度洗脱(0~5 min,15%A→25%A;5~30 min,25%A→30%A;30~35 min,30%A→90%A;35~36 min,90%A→15%A;36~40 min,15%A),流速0.3 mL·min^-1,柱温25 ℃,进样量5 μL;采用电喷雾离子源(ESI^-),负离子模式扫描,多反应监测(MRM)模式检测,选择柴胡皂苷K特征分子离子峰m/z 943.5→797.3、m/z 943.5→635.3和m/z 943.5→781.3作为检测离子对。结果: 16批藏柴胡中柴胡皂苷K的量远高于限度要求,157批柴胡饮片中有8批样品中均检出藏柴胡类成分柴胡皂苷K。结论: 所建立的方法经方法学验证,专属性强,以期制定柴胡中藏柴胡成分检查项补充检验方法,提升柴胡饮片质量控制标准及真伪鉴别研究,可进一步有效控制其质量,保障临床疗效。

目的:采用超高效液相色谱法同时测定炎可宁片中黄柏碱、黄连碱、黄芩苷、巴马汀、小檗碱、汉黄芩苷、黄芩素、芦荟大黄素、大黄酸、汉黄芩素、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚13个成分含量。方法:采用Agilent Eclipse Plus-C₁₈(100 mm×2.1 mm,1.8 μm)色谱柱,以乙腈-0.1%磷酸水为流动相,梯度洗脱,流速0.3 mL·min^-1,测定波长210、254 nm,柱温40 ℃。结果:盐酸黄柏碱、盐酸黄连碱、黄芩苷、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱、汉黄芩苷、黄芩素、芦荟大黄素、大黄酸、汉黄芩素、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的的线性范围分别为0.97~48.63、0.95~47.52、0.86~43.15、0.86~43.19、0.89~44.37、1.00~49.84、1.02~51.01、0.97~48.31、0.99~49.50、1.04~51.80、1.00~50.04、1.00~49.80、1.01~50.64 μg·mL^-1;平均回收率(n=6)分别为95.2%、96.7%、98.3%、94.1%、95.9%、97.6%、99.2%、96.6%、95.5%、97.2%、97.0%、97.8%、98.7%,RSD均<2.0%。3批样品中上述13个成分的含量分别为1.367~1.488(以盐酸黄柏碱计)、0.378~0.412(以盐酸黄连碱计)、4.611~5.505、0.324~0.407(以盐酸巴马汀计)、3.665~3.878(以盐酸小檗碱计)、1.107~1.682、0.392~0.941、0.076~0.105、0.097~0.116、1.059~1.213、0.149~0.167、0.213~0.239、0.047~0.059 mg·g^-1。结论:该方法准确,分析效率高,重复性好,适用于炎可宁片的质量控制。

目的:建立栝楼桂枝汤(Gualou Guizhi decoction)物质基准指纹图谱和多成分含量测定方法,探究饮片-物质基准关键质量属性的量值传递规律。方法:制备15批栝楼桂枝汤物质基准,采用ChromCore 120 C₁₈ (250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱,以乙腈(A)-0.1%甲酸水(B)为流动相,进行梯度洗脱,流速0.8 mL·min^-1,柱温30 ℃,检测波长254 nm,采用中药色谱指纹图谱相似度评价软件(2012年版)建立指纹图谱,结合层次聚类分析(hierarchical cluster analysis, HCA)、主成分分析(principal component an alysis, PCA)与正交偏最小二乘法-判别分析(orthogonal partial least squares-discriminant analysis, OPLS-DA),筛选不同批次栝楼桂枝汤物质基准质量差异的主要化学成分。建立HPLC法测定主要差异性成分含量,以含量、出膏率和转移率分析栝楼桂枝汤的量值传递规律。结果:建立了栝楼桂枝汤物质基准HPLC指纹图谱,确定30个共有峰,与对照品比对共指认出其中9个成分,分别为没食子酸、芍药内酯苷、芍药苷、甘草苷、芒柄花苷、甘草素、肉桂酸、异甘草素、甘草酸。15批栝楼桂枝汤物质基准指纹图谱相似度均>0.920。3种化学识别模式均将样品分为2类,造成主要差异化学成分共5个,分别为甘草酸、甘草素、芍药苷、甘草苷、芒柄花苷。建立了多成分HPLC含量测定方法,符合方法学要求。饮片-物质基准之间5个差异成分的平均转移率分别为51.65%、40.46%、74.74%、60.06%、34.54%,平均出膏率为14.20%。结论:栝楼桂枝汤物质基准的关键质量属性在饮片-物质基准间稳定传递。建立的栝楼桂枝汤指纹图谱和含量测定方法准确、可靠,可为栝楼桂枝制剂的质量控制提供技术参考。

目的: 建立测定人血浆中FCN-437c药物浓度的HPLC-MS/MS方法,并用于FCN-437c的 Ⅰ 期临床研究。方法: 血浆经蛋白沉淀处理后,采用HPLC-MS/MS法进样测定。色谱柱为YMC Triart PFP柱(50 mm×2.1 mm, 5 μm),以0.5%甲酸水溶液(含5 mmol·L^-1乙酸铵,A)-乙腈(B)为流动相,梯度洗脱,流速为0.5 mL·min^-1,柱温为35 ℃,进样量为2 μL,进样器温度为10 ℃。质谱采用ESI⁺,MRM模式。检测离子反应对为m/z 549.4→449.5(FCN-437c)和m/z 552.5→449.0(FCN-437-D3,氘代内标),雾化气压力276 kPa,辅助气压力207 kPa,去簇电压100 V,碰撞室出口电压25 V。结果: 人血浆中FCN-437c的线性范围为5~1 000 ng·mL^-1(r=0.999 0),定量限为5 ng·mL^-1,批内、批间精密度分别小于2.0%和4.1%,平均回收率为104.0%(FCN-437c)、78.6%(FCN-437-D3),内标归一化基质因子为100%~102%。FCN-437c储备液4 ℃放置202 d,FCN-437c及FCN-437-D3工作液室温放置24 h,血浆样品室温放置20 h、冻融四循环、-20 ℃放置134 d、-80 ℃放置662 d,样品处理后自动进样器放置24 h,全血样品室温放置4 h均稳定。应用此方法检测了受试者口服FCN-437c后血浆药物浓度,ISR样品测试结果为97.0%与初测值的偏差在±20%以内。血浆样本稀释10倍后准确度为102.0%~108.0%。FCN-437c连续给药与单次给药相比,R_AUC0-24和R_Cmax的累积比为1.33倍与1.59倍。结论: 本方法简便、准确、耐用、专属性强,可满足人血浆中FCN-437c的定量分析的要求。

目的: 建立一种双衍生法-结合串联质谱技术同时检测人血清中18种类固醇激素的方法。方法: 血清样本采用羟胺和1,2-二甲基咪唑-5-磺酰氯对进行衍生处理,采用液相色谱-串联质谱法正离子选择离子监测模式(SRM)下检测,色谱柱为Kinetex^®C₈(100 mm×2.1 mm,2.6 μm),以0.1%甲酸水溶液为流动相A, 0.1%甲酸甲醇溶液为流动相B,梯度洗脱(0~0.5 min,35%B;0.5~5 min,35%B→100%B;5.0~5.1 min,100%B→35%B;5.1~7 min,35%B),柱温40 ℃,流速0.4 mL·min^-1,进样量20 μL,采集时间为6 min。结果: 18种类固醇激素的线性相关系数均>0.99,回收率均在85%~115%,精密度RSD均＜15%。用该方法成功地检测了156份健康人群受试者血清样本(男性75例,女性61例)并制定了参考区间。结论: 该方法可用非固相萃取法同时检测孕烯醇酮、17-羟孕烯醇酮、孕酮、17-羟孕酮、皮质酮、皮质醇、11-脱氧皮质醇、21-脱氧皮质醇、醛固酮、睾酮、雄烯二酮、脱氢表雄酮、硫酸脱氢表雄酮、皮质素、18-羟皮质酮、雌酮、雌二醇、雌三醇等18种类固醇激素。

目的: 研究淫羊藿醇提物的香味成分以及对淫羊藿醇提物进行热裂解产物分析。方法: 采用电子鼻对淫羊藿醇提物挥发性成分进行分析;通过正交试验优化淫羊藿醇提工艺;采用热重-气质联用分析仪(TG-GC-MS),模拟卷烟燃烧过程,分析淫羊藿醇提物浸膏在氮气环境中的裂解产物,并对其裂解机制进行推测。结果: 各浓度乙醇提取的淫羊藿醇提物共检测出22个挥发性成分,60%浓度的乙醇提取的淫羊藿优于其他浓度;淫羊藿浸膏裂解产物在150、300、450 ℃共鉴定出78个化合物,包括醛、酮、醇、酚、呋喃类化合物及芳香族化合物等香气成分。结论: 淫羊藿醇提物本身含有许多香味挥发性成分,在热裂解后产生大量酮、醇、酚、呋喃类等挥发性香气化合物。

目的:建立固相萃取-高效液相色谱法(SPE-HPLC法)快速检测维生素D滴剂(软胶囊)中维生素D₃有关物质反式维生素D₃(杂质A)、7-去氢胆固醇(杂质B)、光甾醇3(杂质C)、异速甾醇3(杂质D)。方法:取内容物约1.2 g(约相当于维生素D₃ 1 548 IU),精密称定,置于试管中,加入异辛烷4 mL,涡旋混匀,采用固相萃取小柱进行净化,以正己烷-乙酸乙酯(85∶15)为洗脱剂,无水乙醇为解吸剂;采用Luna Silica(2)100 Å硅胶柱(150 mm×4.6 mm,3 μm),以正己烷-正戊醇(996.5∶3.5)为流动相,采用加校正因子主成分自身对照法计算维生素D₃各杂质的含量。结果:前维生素D₃与植物油分离度＞1.5。维生素D₃的线性范围为0.02~0.80 μg·mL^-1,r=0.999 5;杂质A的线性范围为0.02~0.80 μg·mL^-1,r=0.999 9;杂质B的线性范围为0.02~0.80 μg·mL^-1,r=0.999 9;杂质C的线性范围为0.02~0.80 μg·mL^-1,r=0.999 9;杂质D的线性范围为0.02~0.80 μg·mL^-1,r=0.999 9。维生素D₃杂质A~D的平均回收率(n=9)为93.2%~102.9%。对3批维生素D滴剂(软胶囊)样品进行检测,结果已知杂质及其他最大单个杂质含量均≤0.5%,杂质总含量≤1.0%。结论:本方法经系统方法学验证,适用于维生素D滴剂(软胶囊)中维生素D₃有关物质的检测,且具有操作简便、快速、准确的优势,为脂溶性维生素D₃制剂的质量控制提供了技术保证。

目的: 分析陕产黄精根茎和叶中化学成分的差异。方法: 采用超高效液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC-Q-Orbitrap HRMS)法检测陕产黄精根茎和叶的化学成分,所得数据采用主成分分析(PCA)法与正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)处理,陕产黄精根茎和叶的差异指标成分,通过精准的一级质谱质荷比和二级质谱碎片离子,同对照品图谱和软件数据库搜索,以及相关文献报道成分进行判别分析。结果: 共鉴定得到45个成分,通过OPLS-DA,筛选出根茎和叶之间差异性化学成分26个,包括氨基酸类10个,黄酮类6个,有机酸类3个,糖类2个,香豆素类1个,生物碱类4个。结论: 陕产黄精氨基酸类、有机酸类、生物碱类差异成分主要分布于根茎部,而黄酮类差异成分主要集中于叶部,为陕产黄精资源的综合利用提供了理论依据。