目的：通过对游离氨基进行荧光胺衍生化，测定3种不同结构聚乙二醇化重组人生长激素（PEG-rhGH）的平均修饰率。方法：采用基质辅助激光解吸附飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）测定PEG-rhGH的相对分子质量，求得理论平均修饰率。通过激发波长与发射波长的选取、正交试验、游离PEG干扰试验、反应稳定性考察等方法学考察，建立荧光胺衍生法测定PEG-rhGH平均修饰率。结果：从质谱法可知PEG-rhGH的理论修饰度为10%。方法学考察结果显示，激发波长与发射波长分别为390 nm与480 nm，溶液pH对试验结果的影响最大，低浓度的PEG对试验结果无干扰，在反应开始8 min之内荧光强度稳定。荧光胺法测得3种不同结构PEG-rhGH的修饰度分别为8.8%、9.8%及9.5%，与理论值接近。结论：荧光胺法可作为测定PEG-rhGH平均修饰率的方法，3种PEG化重组人生长激素的平均修饰率为10%。