目的：探索和建立地特胰岛素的纯度分析测定方法，并对主要杂质进行鉴别。方法：采用RP-HPLC方法分离分析地特胰岛素的有关物质，使用Protronavi C₄色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm，300 Â；），流动相A为0.2 mol·L^-1硫酸钠缓冲液（pH 2.3）-乙腈（82：18），流动相B为水-乙腈（40：60），洗脱梯度（0 min，35%B；45 min，67%B；65 min，67%B；66 min，35%B；80 min，35%B），流速1.0 mL·min^-1，检测波长214 nm，柱温45 ℃。同时收集该色谱条件下的最大杂质组分，利用LC-MS/MS方法进行鉴别。液质条件为：液相色谱分离采用Acquity UPLC BEH300 C₁₈柱（2.1 mm×100 mm，1.7 μm），流动相A为含0.1%甲酸的水溶液，流动相B为含0.1%甲酸的乙腈溶液，30 min内B相由5%升至30%，流速为300 nL·min^-1，洗脱时间为30 min。质谱离子源为纳升级电喷雾离子源，采用正离子模式检测。结果：建立的RP-HPLC纯度分析方法具有良好的方法学验证结果，能准确测定样品中的有关物质；LC-MS/MS鉴定了地特胰岛素中的最大杂质为A链第21位天冬酰胺的脱氨产物。结论：建立的RP-HPLC和LC-MS/MS方法可准确有效地对地特胰岛素有关物质进行定量测定和鉴别分析，可作为地特胰岛素的质量研究和质控分析方法。