2015年, 第35卷, 第5期　
刊出日期：2015-05-25

  

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生物类似药评价
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  中国生物类似药研发与评价技术指导原则评析

  Shein-chung Chow¹, Fu-yu Song², Laszlo Endrenyi³

  药物分析杂志. 2015, 35(5): 762-767.

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  中国国家食品药品监督管理总局(CFDA)组织药品审评中心(CDE)等技术部门,起草《生物类似药研发与评价技术指导原则(征求意见稿)》(以下简称"征求意见稿"),并于2014年10月29日公开向社会征求意见。尽管本征求意见稿与美国食品药品监督管理局(FDA)于2012年2月9日颁布的指南草案非常相近,但是我们认为本征求意见稿个别条款甚至比FDA的草案更加严谨。例如,CFDA的征求意见稿要求在候选药与参照药之间证明相似性时需考虑批内和批间的相似性。CFDA的征求意见稿甫一出台即吸引了制药企业、生物科技产业、监管机构以及学术界的广泛关注。本文拟对参照药的异质性,非劣效性试验在评估生物等效性中的应用,比例标化的平均生物等效性准则(SABE)的潜在应用,批内和批间变异性在生物等效性评估中的考虑等几项关键问题做一讨论。
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  美国生物类似药的注册审批政策

  Jia Liu¹, Shein-chung Chow²

  药物分析杂志. 2015, 35(5): 768-776.

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  生物类似药是继原研生物制品之后进入市场,在安全性、纯度和效价上与原研生物制品具有高度相似性的新药物。欧洲药品管理局(EMA)在生物类似物制品注册审批政策的制定中发挥了引领作用,与此同时世界卫生组织(WHO)为促进全球的协调一致也发布了生物类似药审评指导原则。最近,美国食品药品管理局(FDA)依据美国国会2009年通过的"生物制品价格竞争与创新(Biologics Price Competition and Innovation,BPCI)法案"也被授权审批生物类似药。BPCI法案随后于2010年3月23日生效。为了听取民众对于生物类似药注册审批政策的意见,FDA于2010年11月2—3日举行了一场公众听证会。随后,FDA为了生物类似药的审批,成立了生物类似药审查委员会(BRC)专门负责生物类似药开发相关的科学问题,以及注册审批相关指南的制定。FDA于2012年2月9日颁布了3项生物类似药的指导原则草案(科学目的、关键质量指标、以及问题与解答),这些草案的颁布有2个目的:(1)首先,帮助开发商证明仿制生物类似药的生物相似性,并依据公共健康服务(PHS)法案第351(k)款提交上市申请;(2)其次,充分表达FDA在生物类似药开发与注册审批指导原则制定方面的立场。
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  美国和欧洲生物类似药的发展

  Richard Markus¹, Victor Fung¹, Sundar Ramanan², Diana Landa¹, Jennifer Liu¹, Primal Kaur¹

  药物分析杂志. 2015, 35(5): 777-787.

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  生物类似药(biosimilars)是与已批准上市的生物制品高度相似的药物,与小分子仿制药物(generics)不同,生物类似药并不是他们参比制品的精确复制品。尽管高度相似,生物类似药在某些方面仍然可能与参比制品不同,生物类似药间也会互不相同。生物制品不仅由于其复杂的性质和生产过程,还由于存在独特的免疫原性和活性的安全隐患,给研发和监管带来了相当大的挑战。欧洲药品管理局和美国食品药品管理局的指导原则建议采用"证据链完备性"(totality-of-evidence)的方法全面覆盖生物类似药物开发的各个步骤,包括分析表征化、结构相似性和功能等效性等的证据。这种"证据链完备性"是生物类似药整个研发过程中其余工作的基石,包括必须的动物试验研究、人体药代动力学/药效学研究,以及至少1个临床研究,以证实生物类似药功效等效,并且免疫原性或安全性风险没有增加。临床研究应选择敏感人群来进行试验,以便发现任何有临床意义的差异。工艺稳定质量恒定的生物类似药的研发需要丰富的经验和专业技能,只有这样才能够确保患者得到良好治疗。
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  巴西生物制品的监管

  Leonardo Fábio Costa Filho¹, Marcelo Mário Matos Moreira¹, Chang Chiann², Leonardo de Souza Teixeira³, Silvia Storpirtis⁴

  药物分析杂志. 2015, 35(5): 788-792.

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  创新和原研的生物治疗药品价格昂贵,限制了这些药品在病人中的广泛使用。由于一些生物治疗药品的专利已经或即将到期,巴西制药行业对于生产生物治疗类似药物的兴趣也在不断增长。生物治疗类似药物(SBP)开发的主要目的是确保患者以更实惠的价格获得治疗作用等效的生物治疗药品。生物制品和生物技术产品在巴西占用政府卫生预算的比例较大,所以巴西政府一直致力于在生物治疗药物的质量、安全和有效性得以保障的前提下,向市场中投入更多价格实惠的生物治疗类似药物,并加强其生产与供应,降低政府支出,从而惠及更多患者。本文介绍巴西SBP监管的现况。
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  生物类似药的稳定性研究设计与分析

  Annpey Pong¹, Shein-chung Chow²

  药物分析杂志. 2015, 35(5): 793-802.

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  生物制品对光线和温度等环境因素高度敏感,这些因素可能影响药物的质量和有效性。由于制造过程的各种差异,生物类似药只能与参比制品相类似。因此,为了确保生物类似药的活性在有效期内符合批准的标准规定,对其进行严格的稳定性测试至关重要。本文介绍使用阵列式设计(matrix designs)与统计分析研究生物制品的长期稳定性特征。研究基于1/3和2/3的按时设计构建了阵列式设计,考察了强度、批次和包装等多种因素。阵列数据既可经检验进行合并性(poolability)分析,也可不经检验直接进行合并性分析。这些方法将有助于降低生物制品开发注册过程中稳定性和保质期研究的成本。
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  高个体差异药物的生物等效性和生物类似性评价

  Laszlo Endrenyi^1,2, Eric Chi³, Shein-chung Chow⁴, Laszlo Tothfalusi⁵

  药物分析杂志. 2015, 35(5): 803-811.

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  对于具有较高受试者个体间差异的药物进行生物等效性(BE)和生物类似性评价时,使用通常的双单侧检验(TOST)法既十分困难,甚至也不可能;除非不考虑伦理规范,而进行大样本的人体试验。因此,美国食品药品管理局(FDA)和欧盟药品管理局(EMA)等监管机构对高个体差异药品的生物等效性评价分别颁布了替代方法。这2个监管机构的替代方法依据相同的原理,但是关键细节略有不同。FDA建议当受试者个体间差异超过30%时,使用"标化均值生物等效性"(scaled-average BE,SABE)评价;该方式使用已有计算机软件通过线性转换来计算等效性的95%上限;并要求采用第2级标准评价:两产品间相关参数的几何均值之比的点评估(point estimate)在0.80到1.25之间。而EMA则建议采用"带扩展限度的平均生物等效性"(average BE with expanding limits,ABEL)进行高个体差异药品的评价;该方式与SABE方式相关,但可以使用简单的双单侧检验方法进行评估;EMA也要求采用相同的第,2级标准评价,且要求这2个标准仅适用于受试者个体间差异不超过50%的情形。这2个机构采用了不同的监管常数(等效性评价指标)。FDA建议的计算指标会使生物等效限不连续,且所需样本量大,并且在CV=30%附近有很高的I型误差。而EMA的评价指标不会产生这种不连续性,I型误差也很低。总之,EMA的评价方法更好。
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  生物类似药研究中相似性的主成分分析评价

  Zhi-yun Ge^1,2, Shih-ting Chiu¹, Pei-shien Wu¹, Shein-chung Chow¹

  药物分析杂志. 2015, 35(5): 812-821.

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  为了评价仿制生物制品(follow-on biologics)的生物类似性,美国食品药品监督管理局(FDA)在2012年2月颁布了3个指导原则草案。在有关"科学考量"(scientific consideration)的指导原则草案中,FDA要求产品的相似性必须在安全性、纯度和有效性等各特征区中具有"证据链完备性"(totality-of-the-evidence)。然而,即使在同一特征区内 ,也会有各种因素对生物类似性的确证产生不同程度影响。为在生物类似药物的特征区内提供类似性的证据,本研究采用了包括主成分分析(PCA)在内的不同加权分析法进行了类似性的试验分析和比较。并在2×2交叉设计基础上进行了广泛的模拟研究,以对所提出的方法在有限样本条件下的评价性能进行研究。由于在特征区域内也存在不同变量间的相关性,权重主成分分析(PCA -weight)评价的把握度最高。该方法可进一步拓展应用于生物类似药物各种特征区域间的生物类似性的"证据链完备性"评价。
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  相对差异基础上的生物相似性评估标准

  Ying Lu^1,3, Shein-chung Chow², Zhong-zhan Zhang³

  药物分析杂志. 2015, 35(5): 822-831.

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  为了检测仿制生物制品与其原研生物制品的相似性,目前主要采用基于相对差异指标的统计方法进行评价。常用的统计推断主要基于双序列(two-sequence)、双周期(two-period)的交叉设计,或者在忽略原研药批次间变异情况下的双臂平行设计。本文采用三臂平行设计(three-arm parallel design),分别测定仿制生物制品与原研生物制品的绝对差异,原研生物制品不同批次间的绝对差异,并通过该两绝对差异之比来评价仿制生物制品与原研生物制品的生物相似性概率(biosimilar probability)。这种基于生物相似性概率的评价标准,在大样本下具有渐进正态的性质,给出了检验的功效和临床试验中样本量的计算公式。本文通过模拟研究和样本量估算,证明了生物相似性概率的统计检验法具有良好的检验效能。
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  生物类似药证据链完备性的合成P值法评估

  Zhi-ying Pan¹, Nan Zhang¹, Yao Yu¹, Eric Chi¹, Shein-chung Chow²

  药物分析杂志. 2015, 35(5): 832-836.

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  最近几年,许多生物制药/生物技术公司对研发生物类似药物的兴趣越来越强。根据生物类似药物的研发需求,美国药监局(FDA)在2012年颁布了3个相关指导原则草案。FDA在这3个指导原则中表示,对于生物类似药物的注册申请的全部提交资料采用"证据链完备性(totality-of-the-evidence)"的方法来审查,并鼓励研发企业使用"逐步递进法stepwise"来找出与原研产品相比,仿制生物制品在每一工艺步骤中的残余不确定度,进而在后续的研发步骤中设法解决这些残余不确定度。尽管要获得"具有较小不确定度的充足证据链完备性"这样的概念可以理解,但是,如何根据提交的所有注册申请信息客观地评价"证据链完备性",以及如何基于已有信息确定下一步研发步骤的程度和范围仍然是需解决的具体操作问题。本研究探索了费舍尔合成P值的概念(Fisher,1932)在等效性检验设置中的应用,更具体地说,在一个生物类似药物的临床研究中,根据"逐步递进法"和"临床证据完备性"的概念,用它来设计和分析2个生物类似药物的临床相似性。
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  生物类似药证据链完备性的随机系数回归分析法评估

  Tsung-cheng Hsieh¹, Shein-chung Chow²

  药物分析杂志. 2015, 35(5): 837-843.

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  由于生物制品具有复杂的特征和性质,为评估申请者的生物相似性证据,美国FDA建议使用"基于风险"和"证据链完备性"(totality-of-the-evidence)的方式来评估已递交的全部特征域间的所有可用数据和信息。因此,需要建立一个生物类似性指数,使该指数能将各个具体特征域中的生物相似性整合成为一个跨指标领域的总体指数(global index)。Shein-Chung Chow等人已经在2010年根据受试品-参考品(T-R)与参考品-参考品(R-R)比较研究中重现性概率(reproducibility probability)的概念,提出了一个评估相似性通用的方法,该方法可用于"证据链完备性"的评估。本文提出另外一个生物相似性评价指数,该指数基于配对随机设计下随机系数的线性回归模型,并提供了相应的统计检测步骤。文中用一个数值型实例对所提出的方法进行了证明。
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  药品可互换性评价的新标化转换准则

  Shein-chung Chow¹, Hao-lin Xu¹, Laszlo Endrenyi², Fu-yu Song³

  药物分析杂志. 2015, 35(5): 844-848.

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  本文对仿制药的生物等效性和相似性评价的现有准则进行了综述。这些准则包括平均生物等效性、总群体生物等效性和个体生物等效性(IBE),以及近期提出的关于高个体差异药品的"标化转换均值生物等效性(SABE)"等。除此之外,随着对个体生物等效性(IBE)的扩展和标化转换均值生物等效性(SABE)评价法的建立,本文也提出了药品可互换性的新的评价准则。本文采用数值型研究对该新准则的应用进行了论证。该评价准则除用于仿制药品的可互换性评价外,也可用于评价生物类似制品可互换性评价。
综述专论
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  琥珀胆碱的体内过程及其法医毒物分析研究

  竺凌¹, 闻俊^1,2, 周婷婷^1,2, 范国荣^1,2

  药物分析杂志. 2015, 35(5): 849-855.

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  琥珀胆碱是临床常用的去极化型肌松药,主要作为手术麻醉诱导剂。近年来该药被非法制成毒针,用来从事违法活动,造成人员琥珀胆碱中毒而死亡。本文综述了琥珀胆碱与代谢产物琥珀单酰胆碱的药代动力学过程,生物样品中琥珀胆碱和琥珀单酰胆碱的前处理以及定性、定量分析方法,对该药法医毒物分析过程中的分析靶标确定、生物检材确定、样品处理与保存等关键问题进行了探讨,对今后琥珀胆碱中毒的司法实践进行了展望。
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  离子液体在色谱分析天然产物中的应用

  肖文, 杨丰庆, 夏之宁

  药物分析杂志. 2015, 35(5): 856-866.

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  离子液体在室温下通常为液态,是完全由有机阳离子与各种阴离子组成的盐。离子液体具有不易挥发,粘度可调,溶解力强,导电性好等特点,在分析化学领域具有广泛的应用。本文综述了离子液体在色谱法分析天然产物中的应用研究进展。通过查阅相关中英文文献,按照不同色谱方法对内容进行归结整理。表明离子液体在毛细管电泳(CE)、高效液相色谱(HPLC)、气相色谱(GC)及高速逆流色谱法(HSCCC)分离分析天然产物中均得到了应用。其中在CE中的应用最为广泛,包括毛细管区带电泳(CZE)、毛细管胶束电泳(MEKC)、毛细管微乳电动色谱(MEEKC)及非水毛细管电泳(NACE)。离子液体的应用有助于提高色谱法分析天然产物的分离分析效率,因此值得进一步推广离子液体的相关应用。
代谢分析·生物检定
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  银荷降脂方中5种活性成分在大鼠体内的药代动力学研究

  黄婧, 钱大玮, 段金廒, 朱振华, 席骏钻, 梁春, 郭建明, 宿树兰

  药物分析杂志. 2015, 35(5): 867-873.

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  目的: 建立液相色谱质谱联用定量分析方法,测定大鼠血浆中荷叶碱、去甲氧基姜黄素、金丝桃苷、芹菜素及槲皮素的含量,并用于银荷降脂方中主要活性成分经口服给药后大鼠体内药代动力学研究。方法: 采集SD大鼠灌胃银荷降脂方后不同时间点的血浆样本,采用LC-MS/MS以多反应离子监测(MRM)模式,电喷雾离子源(ESI)正、负离子检测,测定血浆中荷叶碱、去甲氧基姜黄素、金丝桃苷、芹菜素及槲皮素5种成分的浓度,应用DAS3.2软件进行药动学参数计算。结果: 荷叶碱、去甲氧基姜黄素、金丝桃苷、芹菜素、槲皮素T_max分别为(1.10±0.22)、(0.19±0.04)、(0.20±0.05)、(0.17±0.00)、(0.17±0.00)h,C_max分别为(52.10±7.42)、(1.61±0.50)、(106.02±49.59)、(28.07±9.76)、(186.79±60.99)ng · mL^-1,t_1/2分别为(2.82±0.69)、(6.46±0.63)、(16.04±9.65)、(5.16±2.12)、(8.27±7.04)h,AUC_0-t分别为(167.33±42.61)、(5.86±4.42)、(261.73±34.72)、(78.99±18.20)、(683.04±173.96)ng · h · mL^-1,MRT_0-t分别为(4.59±0.51)、(7.87±1.66)、(8.43±1.22)、(8.32±1.23)、(7.43±1.26)h。结论: 本文建立的LC-MS/MS法符合方法验证要求,可用于银荷降脂方中荷叶碱、去甲氧基姜黄素、金丝桃苷、芹菜素、槲皮素在大鼠体内的药动学研究,为临床应用及新药开发提供依据。
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  微波消解-电感耦合等离子体质谱法测定大鼠全血中纳米银

  贾志立¹, 孙明波², 余洋², 佟晓波³, 邸欣¹

  药物分析杂志. 2015, 35(5): 874-878.

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  目的: 建立和确证一种简便、准确的测定大鼠全血中银浓度的分析方法。方法: 选取铟(¹¹⁵In)为内标,先用硝酸对全血样品进行微波消解处理,再采用电感耦合等离子体质谱法测定消化液中银离子的浓度。结果: 内源性物质不干扰银和内标的测定,全血中银的浓度在5.0~1 000 μg · L^-1范围内线性关系良好,日内精密度RSD≤3.3%,日间精密度RSD≤3.8%;提取回收率为97.5%~101.9%,基质效应为97.4%~99.4%。应用该法研究了大鼠静脉注射纳米银后银的体内经时变化,结果表明,给药(40 nm)后,大鼠血液中银浓度先迅速下降而后上升,之后再缓慢消除。结论: 该方法可为纳米银在生物机体内的评价研究提供分析方法参考。
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  重组人血管内皮生长因子抑制剂中异天门冬氨酸含量检测

  毕华, 韩春梅, 丁有学, 李永红, 史新昌, 刘兰, 饶春明

  药物分析杂志. 2015, 35(5): 879-883.

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  目的: 建立对重组人血管内皮生长因子抑制剂进行异天门冬氨酸(Isoasp)含量检测的方法。方法: 利用ISOQUANT异天门冬氨酸检测试剂盒并结合HPLC的方法检测重组人血管内皮生长因子抑制剂原液和成品中的Isoasp含量,并对该方法进行加标回收率试验、精密度和准确性的验证。结果: 40、25、6.25 pmol · L^-1的3种浓度对照品的加标回收率均在80%~120%的范围内。对1批原液和1批成品的各3个样品分别进行测定,原液和成品中每摩尔蛋白的Isoasp含量平均值分别为(0.066±0.010)、(0.093±0.008)mol,RSD分别为15.2%和8.6%,原液和成品中各1个样品的25 pmol · L^-1对照品的加标回收率分别为90.2%和108.1%。结论: 经方法学验证,本文所建立的方法可作为该产品的Isoasp含量的常规检测方法,也为融合蛋白及单抗类制品的Isoasp含量检测提供借鉴。
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  苄达赖氨酸滴眼液中抑菌剂的检测与评价

  李珏, 王知坚, 相露婷

  药物分析杂志. 2015, 35(5): 884-888.

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  目的: 评价苄达赖氨酸滴眼液抑菌剂使用的合理性,并对国内外药典收载的抑菌剂效力检查法中2种不同0时定义的合理性进行探讨。方法: 选取6批有代表性的实验样品参照2010年版中国药典抑菌剂效力检查法指导原则,采用铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、黑曲霉共5种试验菌株对硫柳汞、苯扎氯铵、羟苯乙酯3种抑菌剂成分进行抑菌剂效力测定,同时对2种不同0时定义进行了实验比较。结果: 按照中国药典结果判断的规定,6批样品中有2批抑菌剂效力不符合规定,其余4批虽符合规定,但菌数lg下降值远高于药典的规定值;对于苄达赖氨酸滴眼液,统计分析结果表明,2种不同0时定义的测定结果并无显著性差异。结论: 2010年版中国药典抑菌剂效力检查法指导原则中对0时的定义合理性有待进一步商榷。目前抑菌剂的使用存在抑菌效力不够或抑菌剂含量过高的现象,需重视处方中抑菌剂种类和含量的筛选以及抑菌剂稳定性的考察,以确保用药安全。
成分分析
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  HPLC法同时测定不同产地车前子生品及盐炙品中3个主要活性成分的含量

  俞燕^1,2, 钟瑞建², 丁剑虹², 万林春², 廖圆月², 袁铭铭², 周国平²

  药物分析杂志. 2015, 35(5): 889-892.

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  目的: 建立高效液相色谱法同时测定不同产地车前子生品及盐炙品中车前素、毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷3个主要活性成分的含量。方法: 采用CAPCELL PAK C₁₈ MG Ⅱ S5色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),以甲醇(A)-水(B)为流动相,梯度洗脱(0~45 min,25%A→42%A),流速1.0 mL · min^-1,检测波长210 nm,柱温30 ℃。结果: 车前素、毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷进样量分别在0.045~0.898 μg(r=0.999 9)、0.212~4.234 μg(r=0.999 9)和0.017~0.338 μg(r=1.000 0)范围内与峰面积呈现良好的线性关系;平均回收率(n=6)分别为99.3%、100.0%和99.1%,RSD分别为0.52%、0.18%和1.9%。结论: 该方法分离效率高,重复性好,经方法学验证,可用于车前子药材的质量控制。
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  栀子主要有效成分与微量元素间的量变规律研究

  刘芳¹, 唐灿¹, 郑海芳², 周娅¹, 黄治华¹, 蒋龙波¹, 黄易¹

  药物分析杂志. 2015, 35(5): 893-899.

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  目的:探索栀子主要有效成分与微量元素间的量变规律,建立有效成分与微量元素相关数学模型。方法: 应用高效液相色谱仪对栀子成熟果实主要有效成分栀子苷、西红花苷Ⅰ、熊果酸进行含量测定;用火焰原子吸收光谱法和原子荧光光谱法测定栀子叶中微量元素Fe、Mn、Zn、Se的含量,分别与栀子成熟果实有效成分的含量建立相关性。结果: 栀子苷的含量(Y₁)、西红花苷Ⅰ的含量(Y₂)、熊果酸的含量(Y₃)与微量元素Fe的含量(X₁)、Mn的含量(X₂)、Zn的含量(X₃)、Se的含量(X₄)的四元线性回归方程为Y₁=0.004 388X₁+0.502 989X₂-2.932 43X₃+238.002 7X₄+111.652 6(r=0.999 9),Y₂=0.012 063X₁+0.188 205X₂-0.276 15X₃-1 264.26X₄+115.646 8 (r=0.999 9),Y₃=0.000 109X₁+0.006 743X₂-0.015 75 X₃-5.895 72X₄+0.942 369(r=0.999 9);Fe质量浓度在343.2~1 246.9 mg · L^-1,Mn质量浓度在35.70~99.80 mg · L^-1,Zn质量浓度在18.30~40.95 mg · L^-1和Se质量浓度在0.09~0.10 mg · L^-1范围内,线性关系良好。结论: 所建立的数学模型可靠,根据栀子叶中微量元素Fe、Mn、Zn、Se的含量可较准确计算出栀子成熟果实主要效成分栀子苷、西红花苷Ⅰ、熊果酸的含量,为科学预测引种栽培栀子的品质提供了依据。
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  高效液相色谱法测定氨基葡萄糖中的乙酰氨基葡萄糖

  刘升涛¹, 李师², 尹鸿萍², 姜红玲³, 张军³, 李博^1,4, 王岁楼¹

  药物分析杂志. 2015, 35(5): 900-905.

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  目的:建立高效液相色谱法测定氨基葡萄糖(GlcN)样品中乙酰氨基葡萄糖(GlcNAc)。方法: 采用氨基柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),以乙腈-磷酸盐缓冲液(65:35,pH 7.5)为流动相,流速1.0 mL · min^-1,柱温30 ℃,检测波长195 nm,进样体积20 μL。结果: 方法专属性强,GlcNAc与GlcN 及各杂质分离良好;GlcNAc在1.94~14.70 μg · mL^-1浓度范围内线性良好(r=0.999 9),准确度高(回收率99.0%~104.2%,n=3),溶液在24 h内稳定(RSD为0.69%),精密度(RSD为1.5%~2.2%)和耐用性(RSD为1.6%~8.1%)均良好,灵敏度高(定量限0.98 μg · mL^-1)。经过测定,盐酸氨基葡萄糖粗品中GlcNAc含量为0.09%~0.18%,盐酸氨基葡萄糖成品和硫酸氨基葡萄糖氯化钾成品中未检出GlcNAc(含量<0.0049%)。结论: 本法经方法学验证,能够快速、准确地测定出GlcN中GlcNAc的含量。
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  ¹H_NMR定量测D₃-吗啡对照品的含量

  周晓力, 陈华, 南楠

  药物分析杂志. 2015, 35(5): 906-909.

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  目的: 采用 ¹H NMR法建立了D₃-吗啡绝对含量的测定方法。方法: 以对苯二甲酸二甲酯基准试剂为内标,以氘代甲醇为溶剂,采用Bruker Avance Ⅲ 500型核磁共振谱仪,zg30脉冲序列在恒温25 ℃下获取¹H NMR谱,测定D₃-吗啡的含量,驰豫延迟时间为20 s。结果: 以D₃-吗啡的峰(δ 5.62)及对苯二甲酸甲酯(δ8.12)峰作为定量峰,测得精密度RSD为0.09%(n=5),重复性RSD为0.69%(n=6)。将样品与内标的NMR峰面积比对其质量比绘制标准曲线,相关系数为0.999 9,氘代吗啡的线性范围为5~17 mg;定量限为0.872 mg。核磁共振法测得样品的含量为93.9%,与质量平衡法结果93.3%及HPLC外标法结果94.1%一致。结论: 采用核磁共振定量的方法可测定D₃-吗啡的绝对含量,此方法准确快捷,简单易行,是对标准物质绝对含量测定的一种良好的补充方法。
安全监测·活性分析
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  双氯芬酸缓释胶囊与片剂的杂质谱研究

  王铁松¹, 车宝泉¹, 冯文化², 施捷¹, 纪菁¹, 金鑫¹, 王威¹, 胡琴¹

  药物分析杂志. 2015, 35(5): 910-914.

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  目的:研究双氯芬酸钠缓释胶囊剂和双氯芬酸钾片剂的杂质谱。方法: 用液相色谱进行杂质检测分析,根据液质分析和定向合成确证杂质结构,采用质量平衡法标化杂质对照品,并进行IC₅₀细胞毒性评价和基因毒性预测;通过对19家企业170批样品的进一步实验与综合分析推断杂质的来源,并根据杂质形成的原因提出针对性防控措施。结果: 双氯芬酸钠和双氯芬酸钾制剂易降解,其中杂质B、C毒性高,需重点检测和控制。结论: 双氯芬酸制剂易受水分和光照等因素影响而降解,不同企业药品的杂质水平存在较大差异,可通过一系列措施提高药品质量。
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  不同来源龙齿药材中4种重金属含量的分析

  李肖肖, 郭琼琼, 李云兰, 高建平

  药物分析杂志. 2015, 35(5): 915-919.

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  目的:测定不同来源龙齿药材中铅(Pb)、镉(Cd)、汞(Hg)、砷(As)4种重金属的含量。方法: 对龙齿样品进行湿法消解后,采用石墨炉原子吸收光谱法(GFAAS)测定龙齿样品中Pb、Cd、As含量,以1%磷酸二氢铵＋0.06%硝酸镁作为基体改性剂,Pb、Cd、As的测定波长分别为283.3、228.8、193.7 nm,灯电流分别为10、8、130 mA,狭缝均为0.7 nm。以硼氢化钠作为还原剂的冷蒸气原子吸收光谱法(CVAAS)测定Hg含量,测定波长253.7 nm,灯电流140 mA,狭缝0.7 nm,延迟时间5 s。结果: Pb、Cd、Hg、As元素测定方法线性关系分别为Y=0.001 9X+0.008 8(r=0.999 0)、Y=0.025 3X+0.014 6(r=0.998 5)、Y=0.012 8X+0.001 6(r=0.999 7)、Y=13.01X+0.813 2(r=0.999 4),RSD均小于3%,回收率为90.7%~112.7%;含量测定结果分别为0.58~6.27、0.04~2.89、0.26~1.16、0.09~0.88 mg·kg^-1。结论: 不同来源的龙齿药材中4种重金属含量不同,其中Pb含量是4种重金属中最高的。经方法学验证,本法为制定龙齿重金属限度质量标准提供了参考。
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  高效液相色谱-离子肼质谱串联技术在线鉴定氨氯地平原料药中未知杂质的结构

  彭玉薇¹, 姚美村², 罗忠华¹, 刘国柱¹

  药物分析杂志. 2015, 35(5): 920-926.

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  目的: 基于高效液相色谱-离子阱质谱串联技术(HPLC-MS/MS)对原料药氨氯地平中未知杂质进行在线结构鉴定。方法: 以甲酸铵水溶液-甲醇为流动相,经Waters X-Bridge C₁₈柱(150 mm ×4.6 mm,5 μm)分离,通过ESI离子阱质谱获得相关色谱与一级与二级质谱谱图。结果: 首先通过对氨氯地平主化合物及已知杂质的质谱裂解行为进行研究,提出了以二氢吡啶环为中心的retro-Diels-Alder(RDA)裂解机理。在此基础上,将未知杂质的质谱裂解谱图与已知化合物的相应谱图比较,基于质谱裂解的异同判断结构的异同,从而鉴定各未知杂质的结构。3个未知杂质分别为二甲酯式氨氯地平、甲酯异丙酯式氨氯地平、异丙酯乙酯式氨氯地平。结论: 本研究提出了一条基于HPLC-MS/MS在线鉴定药物中未知杂质的研究思路与策略,对其他药物中杂质的研究同样具有借鉴作用。
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  盐酸厄洛替尼及其片剂中5种有关物质的定性及定量分析

  梁晓东^1,2, 李泉妙², 范国涛¹, 余振喜³

  药物分析杂志. 2015, 35(5): 927-933.

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  目的: 建立盐酸厄洛替尼及其片剂中5种有关物质的定性及定量分析方法。方法: 采用高效液相色谱法,使用Waters Symmetry C₈色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),以0.05 mol · L^-1醋酸铵溶液为流动相A,甲醇为流动相B,进行梯度洗脱,流速1.0 mL · min^-1,检测波长247 nm,柱温30 ℃,进样量20 μL。分别采用标准曲线法、不加校正因子的主成分自身对照法及加校正因子的主成分自身对照法对有关物质进行定量分析。结果: 分别测得了5种杂质对照品的标准曲线及校正因子,杂质A、B、C、D和E的质量浓度分别在0.03~6.10 μg · mL^-1(r=0.999 7)、0.05~7.62 μg · mL^-1(r=0.999 8)、0.04~5.80 μg · mL^-1 (r=0.999 8)、0.01~6.00 μg · mL^-1(r=0.999 7)和0.01~6.41 μg · mL^-1(r=0.999 9)范围内呈良好的线性关系;各杂质的平均回收率均在98%以上,RSD在2%以下;5种杂质相对于盐酸厄洛替尼的校正因子分别为1.0、1.1、1.1、0.7和0.9。结论: 本文采用加校正因子的主成分自身对照法对各已知杂质进行定量,既可以解决杂质对照品提供困难的问题,又可以计算出产品中各杂质的真实含量,可用于盐酸厄洛替尼及其制剂中有关物质的测定。
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  复方角菜酸酯乳膏中抑菌剂效力测试

  贺聪莹¹, 王卫卫¹, 杨晓莉², 绳金房²

  药物分析杂志. 2015, 35(5): 934-937.

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  目的: 探索复方角菜酸酯乳膏中抑菌剂的合理添加剂量。方法: 对不同浓度抑菌剂的抑菌效果进行考察,筛选出抑菌剂的合理添加量。选择有代表性的挑战微生物加入供试品中进行挑战试验,测试微生物在不同时间段的存活情况。结果: 0.10%羟苯甲酯与0.05%山梨酸复合使用对铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌和黑曲霉5种代表试验菌均有良好的抑制作用,为最低有效剂量。结论: 0.10%羟苯甲酯与0.05%山梨酸复合使用可作为复方角菜酸酯乳膏的抑菌剂,且抑菌效力安全有效。
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  8-(N,N-二甲基-胺甲基)-黄芩苷的结构修饰与抑菌作用研究

  欧阳俊杰^1,2, 喻钢³, 傅颖媛¹

  药物分析杂志. 2015, 35(5): 938-944.

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  目的: 对黄芩苷进行化学修饰得到8-(N,N-二甲基-胺甲基)-黄芩苷,对其结构进行初步分析并探讨其抑菌作用,为拓展其应用范围进行初步研究。方法: 通过Mannich反应制备8-(N,N-二甲基-胺甲基)-黄芩苷,采用HPLC检测其纯度,质谱碳谱对其结构进行初步分析。选用8种标准菌株和其中2种细菌的临床菌株为受试菌株,以8-(N,N-二甲基-胺甲基)-黄芩苷为实验组,黄芩苷为对照组,检测8-(N,N-二甲基-胺甲基)-黄芩苷和黄芩苷对受试菌株的最低抑菌浓度(MIC)、MIC₅₀、MIC₉₀和最低杀菌浓度(MBC)。结果: HPLC检测8-(N,N-二甲基-胺甲基)-黄芩苷的纯度为91.4%,质谱鉴定其相对分子质量为504.1501,并经碳谱检测对其结构进行了初步确认。抑菌实验结果显示,8-(N,N-二甲基-胺甲基)-黄芩苷和黄芩苷对受试菌株均有一定的抑菌效果。8-(N,N-二甲基-胺甲基)-黄芩苷对大肠埃希氏菌、肺炎克雷伯氏菌、福氏志贺氏菌、铜绿假单胞菌标准菌株的MIC、MIC₅₀、MIC₉₀、MBC明显小于黄芩苷,有显著性差异(P<0.05)。结论: 8-(N,N-二甲基-胺甲基)-黄芩苷对大肠埃希氏菌、肺炎克雷伯氏菌、福氏志贺氏菌、铜绿假单胞菌标准菌株的抑菌效果优于黄芩苷。