2016年, 第36卷, 第4期　
刊出日期：2016-04-25

  

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综述专论
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  LC-MS/MS生物分析中试验样品再分析失败后的调查和解决方案

  张人杰^1,2, 柴逸峰¹, 朱臻宇¹, 沈晓航²

  药物分析杂志. 2016, 36(4): 559-564. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2016.04.01

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  试验样品再分析(ISR)如今已普遍用于法规依从的生物分析实验室,是评估生物分析方法的重现性、可靠性和准确度的基本措施之一。虽然统计数据显示,LC-MS/MS生物分析中95%以上的ISR符合接受标准,然而失败时依然值得进行充分的科学调查与评估,以发现其根本原因。本文从稳定性问题、人为因素、样品处理过程、方法固有缺陷等方面对小分子化学药物的ISR失败原因进行分类分析,并举例讨论ISR影响因素及改进措施,列出ISR失败后需查根溯源,重测ISR,撰写调查报告并分享讨论等调查流程,并就如何降低ISR失败率提出法规依从,充分了解化合物特性,使用真实样品考察稳定性的解决方案,最后对其前景进行展望。
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  食品中四环素类药物残留检测前处理及分析方法研究进展

  张元^1,2, 张峰², 周昱¹, 周伟娥², 李绍辉², 郑阳², 李伟青², 冯雪松¹, 袁明美¹

  药物分析杂志. 2016, 36(4): 565-571. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2016.04.02

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  四环素类兽药残留是目前重要的动物源性食品安全问题,检测食品中四环素类残留对人体健康具有重要的意义。检测食物基质中痕量兽药残留依赖于有效的前处理方法和精密的分析仪器。本文阐述了四环素类兽药的研究背景和现状,并对国内外食品中四环素类兽药残留的传统提取技术和新型提取技术等前处理方法及检测方法进行了综述,为动物源性食品中四环素类药物的残留监控提供参考。
过程控制
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  载汉防己甲素PLGA磁性纳米粒的制备分离及理化性质研究

  史琛², 傅德皓¹, 赵瑛², 陈春生²

  药物分析杂志. 2016, 36(4): 572-578. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2016.04.03

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  目的:制备复合型核-壳磁性纳米粒,将其与药物汉防己甲素共同包载于聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)中,运用磁珠分选(MACS)技术分离纯化载药PLGA磁性纳米粒,研究其理化性质及药物包封率。方法:采用钴铁纳米颗粒的合成及核壳结构的生长两步法制备CoFe₂O₄ NPs@MnFe₂O₄纳米粒,采用乳化分散法制备载汉防己甲素PLGA磁性纳米粒;采用MACS技术分离未被包载的药物及无磁性的PLGA纳米粒;利用激光粒径仪DLS、扫描电镜SEM、透射电镜TEM、振动样品磁强计VSM对纳米粒的理化性质及磁性能进行考察;采用RP-HPLC法测定药物载药量、包封率。结果:经MACS磁分离的载汉防己甲素PLGA磁性纳米粒平均粒径195.9 nm,其中CoFe₂O₄ NPs@MnFe₂O₄纳米粒为13.6 nm;载药PLGA磁性纳米粒呈表面光滑圆球形,磁性材料均匀分散在纳米粒内部;VSM结果显示载汉防己甲素磁性PLGA纳米粒具有良好的超顺磁性;RP-HPLC法测定载汉防己甲素磁性PLGA纳米粒包封率和载药量分别为(60.57±2.81)%及(1.83±0.27)%。结论:采用MACS分离纯化的载汉防己甲素PLGA磁纳米粒大小均一,具超顺磁性,有较高的包封率和载药量,有进一步研究的价值。
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  银杏内酯K晶型物质的制备与表征

  张译文^1,2, 张国顺³, 萧伟^1,2, 吕扬³, 王振中^1,2

  药物分析杂志. 2016, 36(4): 579-586. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2016.04.04

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  目的:研究银杏内酯K的多晶型现象,确定银杏内酯K不同晶型物质的制备及鉴定方法,为银杏内酯K的纯化及晶型物质质量控制提供依据。方法:选用适当的溶剂,采用缓慢溶剂挥发法、快速溶剂去除法、反溶剂沉淀法及高温转晶法等多晶型筛查方法,发现并制备获得了7种不同的银杏内酯K溶剂合物、1种银杏内酯K的水合物及1种无溶剂合物;利用晶型物质常用表征方法如粉末X射线衍射法(PXRD)、差示扫描量热法(DSC),热重法(TG)及红外光谱法(IR)等检测方法对上述所获物质均进行了表征分析。结果:确定了银杏内酯K各晶型物质的组成;得到了各晶型物质的DSC、TG、PXRD及IR图谱,且各图谱间存在显著差异,因此使用DSC、PXRD及IR法可对各晶型物质进行鉴别。结论:发现并制备获得了7种不同的银杏内酯K溶剂合物,获得了新型银杏内酯K的固体存在状态,并实现了对不同固体存在状态的鉴别分析,为银杏内酯K晶型物质的开发及质量控制提供依据。
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  猪肺组织糖胺聚糖的分离纯化及其结构鉴定

  张晓^1,2, 凡飞^1,2, 赵小亮^1,2, 郎银芝^1,2, 刘潇潇^1,2, 蔡超^1,2, 李国云^1,2, 于广利^1,2

  药物分析杂志. 2016, 36(4): 587-593. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2016.04.05

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  目的:从猪肺组织(去除气管)中提取分离糖胺聚糖并确定其种类和结构特点。方法:采用胰蛋白酶和木瓜蛋白酶联合酶解提取糖胺聚糖,利用Q-Sepharose Fast Flow强阴离子交换柱层析进行分离纯化。采用醋酸纤维素薄膜电泳分析多糖的种类,高效凝胶渗透色谱与十八角激光散射仪联用法测定其绝对分子质量,采用SAX-HPLC法对酶解二糖进行细微结构分析。结果:从猪肺组织中获得透明质酸(HA)、硫酸乙酰肝素(HS)、硫酸软骨素B(CSB)和硫酸软骨素A(CSA)4种糖胺聚糖,其含量分别为690、490、480和370 mg·kg^-1,绝对分子质量分别为40.7、64.3、28.6和26.5 kDa。其中,CSA组分与标准品CSA(牛气管来源)相比,4-硫酸化二糖和6-硫酸化二糖的摩尔比更大,电荷密度更高;而HS中含有结构新颖的△己糖醛酸-氨基葡萄糖(IV-H,△ UA-GlcN)二糖,且其绝对分子质量(64.3 kDa)远高于标准品HS(17.3 kDa)。结论:猪肺组织中糖胺聚糖主要含有HA、HS、CSA和CSB,是糖胺聚糖开发的良好资源;其中HS含有高含量的自由氨基葡萄糖(GlcNH₂),结构较为新颖,有可能开发成为一种新的药物。
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  响应面法优化超临界CO₂萃取决明子挥发油工艺及其抑菌活性研究

  王立英, 王艳珍, 吴丽艳, 秦书芝, 金元宝

  药物分析杂志. 2016, 36(4): 594-601. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2016.04.06

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  目的:采用响应面法对超临界CO₂萃取决明子挥发油的工艺进行优化,同时对提取所得决明子挥发油的抑制活性进行研究,对挥发油成分进行初步分析。方法:在单因素实验基础上,采用中心组合(Box-Behnken)实验设计,考察萃取压力、温度、时间对挥发油提取率的影响,采用响应面分析法对实验结果进行分析,同时采用纸片扩散法对提取所得挥发油抑菌效果进行考察,采用GC-MS法对挥发油成分进行分析。结果:超临界CO₂萃取决明子挥发油的最优提取工艺:萃取温度51℃,萃取压力25 MPa,萃取时间3.22 h;在最优条件下,萃取率可达2.34%;抑菌活性研究结果表明,决明子挥发油对几种常见的细菌和真菌具有较好的抑菌活性,最低抑菌浓度(MIC)在2.5~5 mg·mL^-1范围内。结论:超临界CO₂萃取决明子挥发油工艺稳定,提取率较高,决明子挥发油具有明显的抑菌活性,为其在抑菌制剂中的应用提供了一定的理论依据。
成分分析
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  高效液相色谱法同时测定森登-4有效部位中7种成分的含量

  白埔, 萨础拉, 董玉

  药物分析杂志. 2016, 36(4): 602-606. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2016.04.07

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  目的:建立HPLC法同时测定森登-4有效部位中7种成分的含量。方法:采用Extend-C₁₈(250mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈(A)-0.6%磷酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱,流速0.5 mL·min^-1,柱温27℃,检测波长为254 nm和292 nm,进样量10μL。结果:没食子酸、京尼平-1-β-D-龙胆二糖苷、栀子苷、(2R,3R)-双氢杨梅素、芦丁、杨梅素、槲皮素的质量浓度与其峰面积具有良好的线性关系(r=0.9999);平均回收率为97.30%~103.9%,RSD为0.08%~1.00%。没食子酸、京尼平-1-β-D-龙胆二糖苷、栀子苷、(2R,3R)-双氢杨梅素、芦丁、杨梅素、槲皮素平均含量分别为0.379%、0.447%、2.740%、3.965%、0.253%、0.878%、0.044%。结论:经方法学验证,本法可用于森登-4有效部位的化学成分含量测定。
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  HPLC法测定不同产地通关藤中通关藤苷G和I的含量

  徐凯, 乔佳, 韩丽, 于思慧, 冯宏玲, 张慧, 翟延君

  药物分析杂志. 2016, 36(4): 607-610. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2016.04.08

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  目的:建立通关藤中通关藤苷G和I的含量测定方法,并比较不同产地通关藤中两者的含量。方法:应用HPLC法,采用Ecosil C₁₈(4.6 mm×150 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-水(48:52)为流动相,流速1.0 mL·min^-1,检测波长230 nm,柱温30℃。结果:通关藤中通关藤苷G和I分别在0.4124~4.1240μg(r=0.9995)和0.1596~1.5960μg(r=0.9997)范围内线性关系良好,平均回收率分别为99.5%(RSD=2.4%)和100.0%(RSD=2.4%),不同产地药材中通关藤苷G和I含量范围分别为0.472%~0.882%和0.118%~0.362%。结论:本法准确度,重复性好,专属性强,可控制药材的质量;且不同产地药材中通关藤苷G和I 2种成分含量有一定差异性,其中云南丽江含量最高,可指导临床用药。
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  HPLC法同时测定维药古丽娜中3个主要活性成分的含量

  李丽蓉, 金晨, 廖辉, 黄斌, 何玉琴, 张凌

  药物分析杂志. 2016, 36(4): 611-616. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2016.04.09

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  目的:建立高效液相色谱法同时测定维药古丽娜中没食子酸、柯里拉京和鞣花酸的含量。方法:采用Venusil XBP C₁₈色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈(A)和0.4%磷酸溶液(B)为流动相,梯度洗脱,流速1 mL·min^-1,柱温25℃,检测波长254 nm,进样量10μL。结果:没食子酸,柯里拉京和鞣花酸的线性范围分别为0.585~9.360(r=0.9997)、0.537~8.592(r=0.9996)和0.393~6.288μg(r=0.9990),平均回收率分别为100.8%(RSD=2.8%)、102.3%(RSD=2.0%)和98.16%(RSD=2.0%);不同产地中古丽娜药材没食子酸,柯里拉京和鞣花酸含量存在差异。结论:该方法简单快捷,重复性和稳定性较好,可用于维药古丽娜中没食子酸、柯里拉京和鞣花酸的测定,为古丽娜的质量控制提供参考。
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  苹果花粉中异鼠李素和绿原酸鉴别及总黄酮测定

  张敏捷¹, 朱萍¹, 李玎¹, 陈萍²

  药物分析杂志. 2016, 36(4): 617-623. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2016.04.10

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  目的:建立苹果花粉的定性定量分析方法以应用于质量研究。方法:采用电镜鉴别观察花粉形态;采用薄层色谱法,以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5:4:0.2)为展开剂,鉴别异鼠李素;以乙酸丁酯-甲酸-水(7:2.5:2.5)上层溶液为展开剂,鉴别绿原酸。以芦丁为对照,采用紫外-可见分光光度法测定总黄酮含量,以NaNO₂-Al(NO₃)₃-NaOH体系显色,在500 nm波长处测定。结果:苹果花粉电镜特征明显;薄层鉴别斑点清晰、易于识别、专属性强;芦丁的质量浓度在0.004~0.048 mg·mL^-1范围内与吸光度线性关系良好,r=0.9993,平均回收率(n=9)为100.4%,苹果花粉总黄酮含量在13.56~46.96 mg·g^-1之间。结论:建立的定性、定量分析方法经方法学验证,可有效评价苹果花粉的质量。
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  山萸肉炮制前后11种成分的变化

  王丽灵¹, 庞会明^1,2, 郑啸², 姜誉弘¹, 陈慧¹, 余江毅², 刘志辉²

  药物分析杂志. 2016, 36(4): 624-631. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2016.04.11

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  目的:以山萸肉中的11种化合物为指标,系统评价炮制工艺对其主要成分含量的影响。方法:以3批山萸肉为原料,分别依法进行酒蒸、酒炖或加压酒蒸炮制。采用Diamonsil(钻石)C₁₈色谱柱(200 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈(A)-0.1%甲酸水(B)溶液为流动相,梯度洗脱(0~6 min,20%A;6~7 min,20%A→22%A;7~10 min,22%A;10~13 min,22%A→80%A;13~16 min,80%A;16~17 min,80%A→20%A;17~18 min,20%A),流速1.0 mL·min^-1,柱温30℃;采用电喷雾离子源(ESI),多反应监测模式(MRM)检测,在同一周期内进行正负离子切换扫描,运用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)技术同步测定并比较各样品中目标化合物成分的含量。结果:本文方法具有良好的专属性、线性(r > 0.9953)、重复性(RSD<5.31%)和回收率(93.2%~109.7%)。山萸肉中11种目标化合物的检测限和定量限范围分别为0.01~0.20和0.04~0.59μg·mL^-1。11种化合物的日内和日间精密度分别小于7.32%和9.33%。3批山萸肉生品中没食子酸、5-羟甲基糠醛、獐芽菜苷、山茱萸苷、莫诺苷、马钱苷、7α-O-甲基莫诺苷、7β-O-甲基莫诺苷、7α-O-乙基莫诺苷、7β-O-乙基莫诺苷、山茱萸新苷的含量均值分别为0.26、0、0.54、0.28、7.26、6.67、0.048、0.068、0、0.012和2.09 mg·g^-1,酒蒸品中对应的含量的均值分别为1.77、11.40、0.86、0.33、8.70、6.26、0.04、0.071、0.075、0.087和1.36 mg·g^-1,酒炖品中对应含量的均值分别为1.94、11.38、0.89、0.25、10.39、9.26、0.04、0.061、0.083、0.096和1.19 mg·g^-1,加压酒蒸品中对应含量的均值分别为2.10、16.87、0.90、0.22、9.37、8.31、0.039、0.068、0.052、0.056和1.08 mg·g^-1。结论:与山萸肉生品相比,炮制后除了7α-O-甲基莫诺苷、山茱萸新苷含量下降外,其他活性成分含量均呈显著增加趋势;此外,7α-O-乙基莫诺苷和5-羟甲基糠醛为炮制后新增加的成分。
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  凌霄花HPLC-ELSD指纹图谱的研究

  李洁¹, 杨玉兰², 任爱农³, 武洁³, 张梅¹, 赵妍¹, 钟荣玲³

  药物分析杂志. 2016, 36(4): 632-638. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2016.04.12

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  目的:采用HPLC-ELSD法构建凌霄花药材的指纹图谱,并对其主要成分进行鉴定。方法:采用Thermo C₁₈(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以甲醇(A)-0.1%甲酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱,流速0.8 mL·min^-1,柱温30℃,ELSD漂移管温度105℃,氮气流速3.5 L·min^-1。结果:对不同产地的10批凌霄花药材进行分析,建立了凌霄花药材HPLC-ELSD指纹图谱,标定共有峰12个。通过对照品指认及HPLC-TQ-MS进一步分析,鉴定出了其中6个色谱峰,分别为麦角甾苷、顺式麦角甾苷或异麦角甾苷、芹菜素、科罗索酸、齐墩果酸和熊果酸。结论:该方法准确可靠、重复性好,可用于凌霄花药材的整体质量评价。
代谢分析
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  庆大霉素诱导的大鼠急性肾损伤模型中尿液生物标志物NGAL的研究

  周晓冰, 朱聪, 屈哲, 林志, 王超, 霍艳, 汪巨峰, 李波

  药物分析杂志. 2016, 36(4): 639-644. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2016.04.13

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  目的:评价尿液中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(NGAL)作为药物肾毒性生物标志物的实用性。方法:通过对Wistar大鼠腹腔注射60和120 mg·kg^-1庆大霉素,每天给药1次,连续给药10 d,建立了大鼠急性肾损伤模型。应用ELISA和Luminex液相芯片方法检测分析各组动物尿液NGAL浓度,并与传统血清肾功能指标进行比较。结果:与对照组相比较,庆大霉素给药组动物肾脏重量的变化与给药时间及剂量具有一定相关性。组织病理学分析结果证实随着给药剂量及给药时间的增加,庆大霉素给药组动物出现肾小管细胞坏死损伤的动物数增加,且病变程度也随之加重。尿液生物标志物分析结果表明ELISA和Luminex液相芯片方法检测结果一致性较好,低、高剂量组动物给药后第4天,尿液中NGAL浓度开始大幅度升高,自第8天起,具有明显时间和剂量效应关系。受试者操作特性曲线(ROC)结果也表明NGAL的曲线下面积(AUC)明显高于肌酐(Cr),具有更高的灵敏度和特异性。结论:研究结果表明尿液NGAL可作为一种药物肾毒性的候选生物标志物,在药物的大鼠临床前安全性研究中将具有良好的应用前景。
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  气相色谱质谱联用法对运动员尿液中内源性类固醇水平特征的研究

  高照, 官凌菊, 赵君军, 张援, 陈颖, 孙娟

  药物分析杂志. 2016, 36(4): 645-654. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2016.04.14

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  目的:建立气相色谱-质谱联用(GC-MS)同时测定尿液中6种内源性类固醇激素水平的方法,对广东省运动员体内的类固醇激素代谢特征进行统计归纳和比较分析,为广东省运动员尿液中类固醇激素的生物护照的建立提供数据支持。方法:选取1474名广东省运动员(包括814名男队员,660名女队员)在赛前训练期间的尿样,并对其中主要的6种内源性类固醇进行酶解、提取及衍生化后采用气质联用(GC-MS)方法定量分析。分析采用HP-1MS色谱柱(17 m×0.2 mm,0.11μm),恒流模式,使用氦气为载气,流量为1 mL·min^-1,进样量:1μL;分流比:10:1;进样口温度和EI离子源温度分别为280℃和200℃;质谱SCAN模式定性确证,扫描范围m/z 40~460;选择离子模式(SIM)下定量分析。结果:广东省女运动员尿液中6种类固醇激素浓度及睾酮/表睾酮比值平均值均显著低于国外女运动员(P < 0.05),其中睾酮浓度平均值仅为国外女运动员的12.2%;广东省男运动员尿液中雄酮、本胆烷醇酮、睾酮、5β-雄烷-3α,17β-二醇4种类固醇激素浓度及睾酮/表睾酮比值平均值均显著低于国外男运动员(P < 0.05),而表睾酮浓度平均值明显高于国外男运动员(P < 0.05),5α-雄烷-3α,17β-二醇浓度平均值与国外男运动员基本持平(P > 0.05)。广东省男、女运动员尿液中类固醇5α-雄烷-3α,17β-二醇/5β-雄烷-3α,17β-二醇浓度比值则均显著高于国外男、女运动员的水平(P < 0.05),雄酮/本胆烷醇酮浓度比值与国外运动员基本持平。结论:本研究选取6种内源性类固醇激素进行气质联用分析,并通过与国内外运动员相关代谢指标的对比分析,对广东运动员训练期间的尿液中类固醇代谢特征进行归纳,为广东省运动员尿液内源性类固醇指标生物护照的建立提供数据支持。
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  UPLC-MS/MS法测定人血浆中左乙拉西坦浓度及其药代动力学研究

  胡岚岚, 徐颖, 周娟, 邹欢, 张玥, 汤建林

  药物分析杂志. 2016, 36(4): 655-661. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2016.04.15

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  目的:建立专属、快速的超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)的分析方法测定人血浆中左乙拉西坦的浓度,进行药代动力学研究。方法:以3-氨基-2-萘甲酸为内标,0.2 mL血浆样品加入280μL甲醇除蛋白后,涡旋提取,取上清液3μL进样。色谱柱:Acquity UPLC BEH C₁₈(2.1 mm×50 mm,1.7μm),流动相:乙腈和0.01 mol·L^-1甲酸铵(pH 3.6),梯度洗脱,流速0.3 mL·min^-1,分析时间4 min;采用电喷雾MS检测,正离子检测模式。结果:左乙拉西坦质量浓度在0.5~128.0μg·mL^-1范围内呈线性,日内、日间精密度分别小于13.1%和11.7%,基质效应影响较小,相对回收率在95.9%~106.8%之间。口服左乙拉西坦片剂后达峰浓度和达峰时间分别为18.23μg·mL^-1和1.31 h。结论:该方法可用于微量血浆测定,并可应用于成人或新生儿癫痫发作,给予左乙拉西坦后对其临床药动学的研究。
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  UPLC-MS/MS法测定人血浆中苯达莫司汀的浓度

  徐辉, 包汉梅, 阎昭

  药物分析杂志. 2016, 36(4): 662-667. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2016.04.16

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  目的:建立超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS法)测定人血浆中苯达莫司汀浓度。方法:血浆经甲醇乙腈沉淀蛋白后,以含5 mmol·L^-1甲酸铵、0.1%甲酸水(A)-乙腈(B)为流动相,梯度洗脱(0~1.4 min,70%A→0%A;1.4~2.4 min,0%A;2.4~2.6 min,0%A→70%A;2.6~4.0 min,70%A),进样器内温度8℃,流速0.3 mL·min^-1,采用Waters Acquity-UPLC BEH^® C₁₈(2.1 mm×50 mm,1.7μm)色谱柱作为分析柱,柱温40℃;电喷雾离子化(ESI+)串联质谱检测,毛细管电压3 kV,锥孔电压50 V;苯达莫司汀和苯丁酸氮芥(内标)的多反应监测(MRM)扫描离子对分别为m/z 358.1→228.1和m/z 304.1→192.1。B细胞惰性淋巴瘤患者按照120 mg·m^-2·d^-1静脉滴注盐酸苯达莫司汀,采集血样进行药代动力学分析。结果:血浆苯达莫司汀质量浓度在5~1000 ng·mL^-1范围内线性关系良好(r=0.9981),日内和日间精密度(RSD)均小于15%,相对误差为-0.40%~-8.61%,提取回收率为102.8%~104.8%;基质效应为84.8%~92.0%。完成2例受试者静脉滴注给药(120 mg·m^-2·d^-1,滴注120 min)药代动力学分析,达峰浓度(C_max)为(4578±200)ng·mL^-1,半衰期(T_1/2)为(0.582±0.356)h,血药浓度-时间曲线下面积(AUC_0-t)为(6821±2179)ng·h·mL^-1。结论:该方法简便、准确,灵敏度高,检测时间短,适用于苯达莫司汀的药代动力学研究以及临床上对血浆中苯达莫司汀浓度监测。
生物检定
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  多重PCR方法同时鉴别人参、西洋参、三七

  刘丽^1,2, 肖炳燚², 罗晖明², 聂平², 李文莉^1,2, 丁野², 孙辉², 李玲^1,2

  药物分析杂志. 2016, 36(4): 668-677. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2016.04.17

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  目的:建立一种能同时鉴别人参属人参、西洋参、三七3种药材的多重聚合酶链反应(PCR)方法。方法:通过分析人参、西洋参、三七psbA-trnH基因序列的差异设计了特异性引物对1,利用随机扩增多态性DNA(RAPD)分子标记技术筛选获得的特异性片段的基因序列,设计了特异性引物对2;优化了多重PCR鉴别体系并验证其耐受性和实用性。结果:构建的多重PCR鉴别体系能够成功地鉴别人参、西洋参、三七,人参样本可扩增出片段大小约为150 bp的特异性条带,西洋参样本可扩增片段大小出约为150 bp和400bp 2条特异性片段,三七样本可扩增出片段大小约为400 bp的特异性条带。结论:本多重PCR鉴别体系特异性好,可准确、可靠地鉴别人参、西洋参、三七。
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  硫酸软骨素滴眼液抑菌剂筛选与抑菌效力研究

  杨晓莉¹, 贺聪莹², 绳金房¹

  药物分析杂志. 2016, 36(4): 678-684. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2016.04.18

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  目的:探索硫酸软骨素滴眼液中抑菌剂的合理添加剂量,分别按中国药典2010年版和中国药典2015年版抑菌效力检查法测定硫酸软骨素滴眼液的抑菌效力。方法:对不同浓度抑菌剂的抑菌效果进行考察,筛选出抑菌剂的合理添加量。选择有代表性的挑战微生物为试验菌株进行菌落计数方法学验证,然后进行微生物的挑战试验,按验证方法测定各时间点的菌落数。结果:按2010年版中国药典,含羟苯甲酯0.03%、羟苯丙酯0.015%的硫酸软骨素滴眼液对铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌和黑曲霉5种代表试验菌的抑菌性均符合药典要求;按2015年版中国药典,均不符合药典的要求。结论:中国药典2015年版抑菌效力检查法相对中国药典2010年版抑菌效力判断标准差异较大,硫酸软骨素滴眼液目前的抑菌剂处方无法达到2015年版中国药典的要求,建议更换抑菌剂。
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  无菌检查时紊流型无菌隔离器内环境微生物监测方法研究

  史新昌, 范文红, 丁有学, 饶春明

  药物分析杂志. 2016, 36(4): 685-690. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2016.04.19

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  目的:研究在紊流型无菌隔离器内进行无菌检查时的内环境微生物监测方法。方法:自制监测杯(Φ90 mm×50 mm)。应用沉降菌检测和侧向气流落菌检测对监测杯法与平皿法检测效果进行比较。并在实际监测中应用监测杯法进行监测。结果:沉降菌检测和侧向气流落菌检测结果显示监测杯法与平皿法检测效果之间的差别无统计学意义,P > 0.05。空载实验证明监测杯可以通过无菌隔离器消毒程序进行消毒。监测杯应用实例证明监测杯可以对无菌隔离器内环境起到较好的监测作用,同时具有操作简单,使用方便等特点。结论:所建立的监测杯法可以替代平皿法对无菌隔离器内环境进行监测。
快速分析
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  近红外光谱法测定三七中3种皂苷的总含量

  闫珂巍, 陈美君, 梅国荣, 王福, 卢俊宇, 陈鸿平, 刘友平, 陈林

  药物分析杂志. 2016, 36(4): 691-696. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2016.04.20

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  目的:建立三七(Panax notoginseng(Burk.) F.H.Chen)药材中3种皂苷(三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁、人参皂苷Rb₁)的近红外定量分析模型,以快速分析药材质量。方法:按照2015年版中国药典三七项下的药材含量测定方法测定72批三七药材中3种皂苷的含量。采集三七药材近红外光谱,用标准正则变换(SNV)、一阶导数(db1)对光谱进行预处理,结合偏最小二乘法建立三七皂苷的近红外定量分析模型。结果:67批三七样品所建立的模型预测集相关系数(r)=0.9903,校正集均方根偏差(RMSEC)=0.3535,预测集均方根偏差(RMSEP)=0.4580;采用5批建模外的三七样品对模型进行验证,验证集预测平均回收率为101.12%。结论:本研究所建立的模型性能较好,对三七中3种皂苷的总含量预测准确,可用于三七药材质量的快速检测。近红外光谱技术快速、简便、准确的特点,为三七药材质量控制提供了依据。
安全监测
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  高效液相色谱法测定杯(6)芳烃磺酸钠及其有关物质

  邹磊^1,2, 杨建云¹, 肖炳坤¹, 黄荣清¹

  药物分析杂志. 2016, 36(4): 697-703. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2016.04.21

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  目的:建立测定杯(6)芳烃磺酸钠的含量及有关物质的高效液相色谱方法。方法:采用SHISEIDOCAPCELL ADME S5(250 mm×4.6 mm,5.0μm)色谱柱;流动相A为乙腈,流动相B为10 mmol·L^-1磷酸氢二铵+10 mmol·L^-1磷酸二氢铵,pH 7.0;梯度洗脱(0~30 min,2%A→21.5%A;30~35 min,21.5%A→2%A);流速:1.0 mL·min^-1,检测波长:208 nm;柱温:35℃;进样体积:20μL。结果:在上述色谱条件下,各杂质及各降解产物均可与杯(6)芳烃磺酸钠主峰良好分离,主要有关物质杯(4)芳烃磺酸钠与主峰分离良好;HPLC测定的线性范围为0.1~2μg(r=0.9990),方法的仪器精密度、日内精密度、日间精密度及重复性的RSD均小于2%;3批杯(6)芳烃磺酸钠原料药中杯(6)芳烃磺酸钠含量范围为98.14%~98.65%之间,总有关物质含量不高于1.0%。结论:经方法学验证,本法可用于测定杯(6)芳烃磺酸钠的含量及有关物质。
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  HPLC法测定吉非替尼原料药有关物质

  齐敬敬¹, 孙春艳¹, 褚岩凤¹, 吴剑华¹, 王玉^1,2

  药物分析杂志. 2016, 36(4): 704-710. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2016.04.22

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  目的:建立加校正因子的主成分自身对照法测定吉非替尼原料药中有关物质的含量。方法:采用Inertsil ODS-3(3.0 mm×100 mm,3μm)色谱柱,以乙腈-0.05 mol·L^-1的醋酸盐(用冰醋酸调节pH至4.5)为流动相进行梯度洗脱,流速0.5 mL·min^-1,柱温50℃,检测波长248 nm,进样量5μL。测定吉非替尼和杂质SM1、I、XV、SM2、XII、D和C的线性方程,以斜率计算杂质相对于吉非替尼的校正因子,并进行方法学验证。结果:在吉非替尼与相邻杂质(杂质SM2和杂质XII)及各已知杂质之间的分离度均大于1.5。杂质SM1、I、XV、SM2、XII、D和C在各自的线性范围内线性关系良好(r > 0.9990,n=6),相对校正因子分别为0.8、2.3、1.2、4.0、1.1、0.8和1.1,检测限分别为0.02、0.27、0.04、0.31、0.05、0.10和0.05 ng,定量限分别为0.15、0.06、0.54、0.13、0.62、0.15、0.31和0.15 ng,低、中、高3种浓度的平均回收率(n=9)分别为99.1%、93.5%、96.8%、100.3%、102.8%、103.4%和97.9%,RSD分别为1.8%、5.4%、4.3%、2.3%、3.3%、3.1%和3.8%。结论:经验证,该方法的专属性、线性等良好,可采用加校正因子的主成分自身对照法对本品的有关物质进行控制。
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  葛根芩连片中掺入染色剂的检测方法研究

  朱雪妍¹, 谷立勍¹, 何颂华¹, 冯旭²

  药物分析杂志. 2016, 36(4): 711-720. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2016.04.23

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  目的:建立葛根芩连片中可能掺入的染色剂含量测定方法,并采用LC-MS/MS方法进行专属性确证。方法:采用HPLC法测定染色剂含量,使用Kromasil C₁₈(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.05 mol·L^-1乙酸铵溶液(含0.5%冰乙酸)为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL·min^-1,检测波长为420 nm和500 nm,柱温35℃。用LC-MS/MS进行确证,以乙腈-0.01 mol·L^-1乙酸铵溶液为流动相,梯度洗脱;离子源为电喷雾电离源(ESI),扫描模式为多反应监测(MRM)。结果:建立了HPLC法检测葛根芩连片中可能含有的10种染色剂含量的方法。方法学验证结果表明,柠檬黄、胭脂红、日落黄、亮黄、酸性红73、甲基橙、金橙Ⅱ、金胺O、赤藓红、碱性橙Ⅱ的线性范围分别为1.4986~49.9550、0.6727~22.4235、1.4978~49.9250、0.2235~7.4516、0.4470~14.9000、0.3980~13.2678、0.4970~16.5667、0.1906~6.3532、0.6953~23.1764和0.1193~3.9776μg;加样回收率(n=6)分别为97.2%(RSD=0.86%)、99.1%(RSD=0.48%)、98.6%(RSD=0.86%)、101.0%(RSD=1.2%)、98.2%(RSD=0.89%)、98.3%(RSD=1.0%)、97.5%(RSD=0.63%)、96.3%(RSD=0.40%)、97.8%(RSD=1.0%)和96.3%(RSD=0.96%)。在对11个厂家123批样品的检验中,有5个厂家33批样品检出金胺O,检出率为26.8%,含量在0.013~83.51μg·g^-1之间,其中1批样品同时检出金胺O和碱性橙Ⅱ。用LC-MS/MS进行专属验证,33批出现HPLC阳性峰样品均检出相应的金胺O和碱性橙Ⅱ。结论:本方法准确、便捷,具有良好的精密度、重现性和稳定性,线性关系良好,可用于葛根芩连片的质量控制。
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  佐太等珍宝矿物类藏药材中总砷、总汞及可溶性砷汞含量的对比研究

  张炜, 刘学良, 骆桂法, 刘亚蓉, 袁璐, 肖瑞娜, 张耀元, 刘海青

  药物分析杂志. 2016, 36(4): 721-726. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2016.04.24

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  目的:测定佐太等珍宝矿物类藏药材中总砷、总汞以及可溶性砷汞的含量,对比评价分析珍宝矿物类藏药材中有关砷汞类有害物质的安全性。方法:通过高压密闭微波消解及聚焦微波消解技术消解珍宝矿物类藏药材样品提取其中总砷、汞,同时通过模拟人体胃肠道环境,采用人工胃液仿生提取样品中的可溶性砷、汞,结合氢化物-原子荧光法进行分析测定。最佳仪器工作条件为光电倍增管负高压270 V,原子化器高度10 mm,载气流量400 mL·min^-1,屏蔽气流量800 mL·min^-1,砷灯电流为40 mA、汞的灯电流为20 mA。结果:在选定的最佳条件下,仪器对砷与汞的检测限分别为0.15μg·L^-1和0.02μg·L^-1,日内精密度RSD分别为1.94%和2.18%,日间精密度RSD分别为2.02%和2.39%;总砷、总汞的平均回收率分别为94.3%、92.0%,可溶性砷、可溶性汞的平均回收率为93.0%、91.3%,RSD均小于5%。佐太、朱砂、银珠、雄黄4个品种10批样品的总砷含量为31.49~485829μg·g^-1,总汞含量为0.004~742187μg·g^-1;可溶性砷的含量为0.43~1162μg·g^-1,可溶性汞的含量为0~79.55μg·g^-1。结论:珍宝矿物类藏药材中可溶性砷汞的含量远远低于总砷汞的含量。
标准研讨
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  大蒜化学成分不同测定方法比较及相关性探讨

  宋百灵^1,3, 张唯¹, 史荣梅³, 黄琼³, 李新霞², 陈坚³

  药物分析杂志. 2016, 36(4): 727-732. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2016.04.25

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  目的:采用不同方法测定大蒜中化学成分含量并进行相关性探讨。方法:本实验参考美国药典大蒜中蒜氨酸含量测定方法,采用C₁₈色谱柱,以乙腈-1,4-二氧六环-四氢呋喃-0.045 mol·L^-1磷酸二氢钠溶液(25:2.9:2.2:69.9)为流动相,供试品经灭酶、衍生化处理后在337 nm下测定蒜氨酸含量;参考印度药典大蒜中蒜氨酸含量测定方法,采用C₁₈色谱柱,以0.1%磷酸为流动相,供试品经热水灭酶处理后,直接在210 nm下测定蒜氨酸含量;采用课题组建立的大蒜中蒜氨酸含量测定方法,采用C₁₈色谱柱,以0.04%三氟乙酸为流动相,供试品经微波灭酶处理后,直接在214 nm下测定蒜氨酸含量;参考欧洲药典和英国药典大蒜粉中大蒜辣素含量测定方法,采用C₁₈色谱柱,以甲醇-0.1%甲酸(60:40)为流动相,将供试品捣碎后,在254 nm下测定大蒜中大蒜辣素含量;参考中国药典大蒜中大蒜素含量测定方法,采用C₁₈色谱柱,以甲醇-0.1%甲酸(75:25)为流动相,将供试品捣碎、回流处理后在210 nm下测定大蒜中大蒜素含量。结果:课题组建立方法与美国药典方法测得蒜氨酸含量没有显著性差异,印度药典方法灭酶不完全,蒜氨酸测定结果偏低,欧洲药典方法合理可行,大蒜辣素测定值可反应真实情况,中国药典方法测定大蒜素的结果与多种因素相关。结论:5种方法测定的指标不同,欧盟药典和英国药典以大蒜辣素为测定指标,中国药典以大蒜素为测定指标,美国药典、印度药典和课题组自建方法都以蒜氨酸为测定指标;但方法之间仍具有一定差异,灭酶方法不同:美国药典采用蒜酶抑制剂灭酶,印度药典用热水灭酶,课题组方法采用微波灭酶;方法原理不同:美国药典采用柱前衍生化法,印度药典和课题组方法则直接测定蒜氨酸含量。
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  HPLC法同时测定妇科止带片中6种成分的含量

  李玲^1,2, 孙辉², 丁野², 黄晓燕², 刘丽^1,2, 席洋^1,2, 李文莉^1,2

  药物分析杂志. 2016, 36(4): 733-738. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2016.04.26

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  目的:建立HPLC法同时测定妇科止带片中木兰花碱、盐酸黄柏碱、盐酸小檗碱、五味子醇甲、五味子醇乙、五味子乙素6种成分的含量。方法:采用Waters Symmetry^® C₁₈色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈与0.033 mol·L^-1磷酸二氢钾水溶液为流动相,梯度洗脱,流速0.8 mL·min^-1,检测波长220 nm。结果:6种化学成分分离度良好,阴性无干扰,其平均加样回收率(n=6)范围为97.5%~108.0%(RSD为1.6%~2.8%);重复性RSD(n=6)为1.5%~3.3%;木兰花碱、盐酸黄柏碱、盐酸小檗碱、五味子醇甲、五味子醇乙、五味子乙素的线性范围分别为8.89~1066.7、9.70~1789.5、10.90~2179.6、9.70~1940.3、9.53~3810.2和9.87~3948.0 ng,r²分别为0.9997、0.9995、0.9999、1.0000、1.0000和1.0000;供试品溶液各成分在24 h内稳定。8批样品中木兰花碱、盐酸黄柏碱、盐酸小檗碱、五味子醇甲、五味子醇乙、五味子乙素6个成分的含量测定结果分别为0.183~0.282、0.674~2.313、11.540~18.010、0.045~0.659、0.006~0.110和0.004~0.343 mg·g^-1。结论:新建立的方法经方法学验证,可有效控制妇科止带片的质量,也可作为提高标准中新的含量测定方法。
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  八珍系列制剂微生物限度检查法的建立及检验结果分析

  陈志禹, 夏佳, 席时东

  药物分析杂志. 2016, 36(4): 739-747. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2016.04.27

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  目的:建立八珍系列制剂(八珍丸、八珍颗粒、八珍胶囊、八珍片、八珍口服液)微生物限度检查法,对18个生产企业125批次样品的微生物限度检查结果进行分析,并对污染较严重样品的污染菌进行分离、鉴定。方法:八珍丸和八珍胶囊:细菌计数采用培养基稀释法,霉菌和酵母菌计数采用常规法,大肠埃希菌和大肠菌群检查采用直接接种法;八珍颗粒和八珍口服液:细菌计数、霉菌和酵母菌计数采用常规法,大肠埃希菌检查采用直接接种法;八珍片:细菌计数采用培养基稀释法,霉菌和酵母菌计数采用常规法,大肠埃希菌检查采用直接接种法。细菌和酵母菌鉴定采用VITEK 2全自动微生物鉴定系统。结果:14个生产企业24批次的产品进行方法验证,细菌、霉菌和酵母菌计数验证中各菌的回收率均大于70%,大肠埃希菌和大肠菌群检查验证中可检出验证菌,该方法可行。不同剂型样品间的微生物污染状况差异较大,样品污染的微生物主要是芽孢杆菌。结论:18个生产企业125批次的八珍系列制剂的微生物限度检查结果均符合规定。