2022年, 第42卷, 第10期　
刊出日期：2022-10-31

  

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综述专论
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  质谱成像技术在中药研究中的应用现状^*

  黄烈岩, 聂黎行, 董静, 杨学欣, 贾晓飞, 姚令文, 何风艳, 戴忠, 马双成

  药物分析杂志. 2022, 42(10): 1675-1689. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2022.10.01

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  质谱成像技术能够将质谱数据转变为可视化的离子成像图,具有前处理简单及结果清晰直观的优势。近年来,质谱成像被应用于揭示中药中天然成分的空间分布特征,探索中药药理作用机制,研究中药质量评价新方法,为中药研究带来了全新的视角。本综述概述了几种常见的质谱成像技术的原理、应用及发展史,重点介绍了基质辅助激光电离解吸附质谱成像技术、解吸电喷雾电离质谱成像技术及二次离子质谱成像技术;随后,概括了利用质谱成像探索中药成分的常见操作流程,列举了质谱成像技术在中药研究中的多个应用实例,详细说明质谱成像在中药研究中的独特贡献;最后,探讨了质谱成像应用于中药研究中的不足之处,期望能在未来得到补足。
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  以离子液体为流动相添加剂在天然产物色谱分析中的应用研究进展^*

  张媛媛, 胡燕珍, 黄斌, 田莹莹, 李才堂, 陈乐

  药物分析杂志. 2022, 42(10): 1690-1696. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2022.10.02

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  离子液体在室温下通常为液态,是完全由有机阳离子和各种阴离子组成的盐。离子液体具有不易挥发,黏度可调,溶解力强,导电性好等特点,在分析化学领域具有广泛的应用。本文综述离子液体在天然产物色谱分析中的应用研究进展,探讨离子液体作用机理和分离效能。通过查阅相关中英文文献,按照不同类型天然产物对内容进行归纳整理。结果表明离子液体在生物碱、有机酸、黄酮等天然产物的色谱分析都得到了应用,其在生物碱中的应用最为广泛。通过本文的研究,以期为离子液体在天然产物色谱分析方面的应用提供借鉴和参考。
成分分析
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  UPLC同时测定五味子木脂素纯化物中15个化学成分的含量^*

  张金朋, 郭晓帆, 杨园园, 赵志远, 李炳龙, 刘媛媛, 齐永秀

  药物分析杂志. 2022, 42(10): 1697-1707. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2022.10.03

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  目的: 建立采用UPLC同时测定五味子木脂素纯化物中五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素、五味子醇甲、五味子醇乙、五味子酯甲、五味子酯乙、戈米辛D、当归酰戈米辛H、当归酰戈米辛Q、戈米辛G、戈米辛K、五味子酚、苯甲酰戈米辛H和戈米辛J共15个化学成分含量的方法。方法: 采用Ultimate^® UHPLC XB-C₁₈色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8 μm),以0.1%甲酸水(A)和0.1%甲酸乙腈(B)为流动相,梯度洗脱,流速0.3 mL·min^-1,柱温为40 ℃,检测波长为267 nm,进样体积1 μL。结果: 3个批次中上述15个成分的含量范围为五味子甲素(4.02%~4.80%)、五味子乙素(4.85%~5.34%)、五味子丙素(0.15%~0.21%)、五味子醇甲(12.14%~12.64%)、五味子醇乙(2.72%~3.23%)、五味子酯甲(0.79%~0.87%)、五味子酯乙(2.65%~3.01%)、戈米辛D(0.53%~0.63%)、当归酰戈米辛H(2.33%~2.51%)、当归酰戈米辛Q(0.70%~0.81%)、戈米辛G(0.40%~0.45%)、戈米辛K(2.24%~3.07%)、五味子酚(0.94%~1.16%)、苯甲酰戈米辛H(0.27%~0.31%)、戈米辛J(0.71%~0.79%)。上述15个木脂素化学成分分离度良好且在线性范围内线性关系良好,平均回收率100.6%~103.1%,RSD为1.1%~4.0%。结论: 该方法对五味子木脂素纯化物中15个化学成分同时进行含量测定,操作简单、准确且重复性好,可用于五味子的质量控制与评价及为后续药效学、药代动力学研究鉴定物质基础。
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  HPLC-MS/MS法测定芪葵颗粒中25个成分的含量^*

  陆明霞, 欧阳冰琛, 廖健城, 桂婉玉, 向杰, 邹建东, 李长印

  药物分析杂志. 2022, 42(10): 1708-1719. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2022.10.04

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  目的: 建立高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)法测定芪葵颗粒中25个成分(7,2’-二羟基-3’,4’-二甲氧基异黄烷、L-苯丙氨酸、毛蕊异黄酮-7-O-葡萄糖苷、芦丁、2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-葡萄糖苷、美迪紫檀苷、异黄芪皂苷Ⅱ、杨梅素、无水柠檬酸、紫檀烷、黄芪皂苷Ⅲ、黄芪甲苷、黄芪皂苷Ⅰ、环黄芪苷Ⅱ、异黄芪皂苷Ⅰ、L-色氨酸、黄芪皂苷Ⅱ、异槲皮苷、刺芒柄花苷、金丝桃苷、没食子酸、槲皮素、毛蕊异黄酮、芒柄花素、大黄素)的含量。方法: 采用Agilent Poroshell 120 SB-C₁₈色谱柱(100 mm×3.0 mm,2.7 μm),以含0.1%甲酸和1 mmol·L^-1甲酸铵的水溶液(A)-甲醇(B)为流动相,梯度洗脱,流速0.4 mL·min^-1,柱温45 ℃,进样体积2 μL;采用电喷雾离子源(ESI),多反应监测(MRM)模式,负离子模式扫描。结果: 25个成分在测定的质量浓度范围内线性关系良好,相关系数(r)均＞0.995 0,精密度、重复性、稳定性均良好,平均加样回收率在89.5%~105.7%,RSD≤4.0%;3批芪葵颗粒中上述25个成分的含量范围分别为0.005~0.006、0.102~0.104、0.107~0.155、0.073~0.074、0.016~0.019、1.058~1.120、0.032~0.047、0.040~0.052、5.600~6.617、0.026~0.030、0.009~0.011、0.009~0.013、0.077~0.085、0.018~0.026、0.131~0.154、0.061~0.068、0.032~0.038、0.108~0.127、0.043~0.064、0.167~0.185、0.084~0.110、0.021~0.026、0.186~0.203、0.091~0.094、0.020~0.033 mg·g^-1。结论: 所建立的方法可准确测定芪葵颗粒中多个主要成分,适用于芪葵颗粒制剂的质量评估与控制。
代谢分析
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  大黄素型单蒽酮大鼠体内毒代动力学研究^*

  汪祺, 杨建波, 王莹, 李妍怡, 张玉杰, 文海若, 马双成

  药物分析杂志. 2022, 42(10): 1720-1728. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2022.10.05

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  目的: 建立用于血浆中大黄素型单蒽酮及其代谢产物含量测定的UPLC-Q TOF-MS方法,研究其原型及代谢产物大鼠体内毒代动力学(TK)行为。方法: 开展重复给药毒性试验的首次给药至给药结束的原型及其代谢产物的TK测定,流动相为乙腈(A)-0.1%甲酸(B),梯度洗脱(0~7 min,95%A→50%A;7~10 min,50%A→20%A;10~11 min,20%A→0%A),流速:0.4 mL·min^-1,柱温:40 ℃;负离子扫描模式,毛细管电压1.0 kV,锥孔电压30 V,扫描范围m/z 50~1 000计算动力学参数毒代动力学参数T_max、C_max、AUC_all及MRT_last,评价大鼠口服不同剂量的大黄素型单蒽酮后大鼠血浆中原型及代谢产物的暴露程度。结果: 研究发现大黄素型单蒽酮给药后,原型成分在大鼠体内的C_max分别为0.56 μg·mL^-1(高浓度给药)、0.54 μg·mL^-1(中浓度给药)、0.51 μg·mL^-1 (低浓度给药),体内AUC_all分别为1.13 h·μg·mL^-1(高浓度给药)、1.11 h·μg·mL^-1(中浓度给药)、1.18 h·μg·mL^-1(低浓度给药),不同剂量组中原型成分大鼠体内血浆暴露量无明显差异(P>0.05)。给药后原型及代谢产物的血药浓度基本在6 h内达到T_max,并在20 h内消除。主要代谢产物为蒽醌(大黄素,羟基大黄素,芦荟大黄素)和蒽醌糖苷(大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷,芦荟大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷),原型及大部分代谢产物普遍可在体内停留20 h。随给药剂量增加芦荟大黄素、羟基大黄素及大黄素等则出现了轻度蓄积现象。结论: 大黄素型单蒽酮给药后,原型及其代谢物在体内消除缓慢,因此应严格控制给药剂量和给药间隔,防止体内成分蓄积发生不良反应。
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  基于UPLC-Q TOF MS的代谢组学研究辛伐他汀对小鼠肝脏脂类代谢的影响^*

  金一宝, 李上富, 王珏, 曹德良, 蒋宇扬, 王铁杰

  药物分析杂志. 2022, 42(10): 1729-1738. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2022.10.06

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  目的: 以代谢组学技术研究辛伐他汀对小鼠肝脏中脂类物质代谢的影响。方法: 采用超高效液相色谱-高分辨飞行时间质谱(UPLC-Q TOF MS)联用技术对给予药物辛伐他汀后小鼠的肝脏样品进行代谢物指纹信息采集,使用Acquity BEH C₁₈色谱柱,流动相为水-乙腈,梯度洗脱,流速0.5 mL·min^-1,柱温35 ℃,进样室温度4 ℃,进样量10 μL;电喷雾离子源,正离子检测模式,扫描范围m/z 100~1 000,毛细管电压为3.1 kV,锥孔电压为30 V,采用100 pg·mL^-1亮氨酸-脑啡肽(leucine-enkephalin,LE)溶液为质量校正溶液。通过数据采集进行代谢轮廓分析。读取总离子流色谱图中峰信息,利用主成分分析筛选出候选的差异代谢物后,通过一级、二级质谱碎片信息,比对数据库鉴别差异代谢物的结构。利用免疫印迹、同位素放射代谢流分析,验证辛伐他汀对细胞脂质合成的影响。结果: 给予辛伐他汀后,在肝组织发现8个代谢差异物,各剂量组溶血磷脂的含量增多,其中LysoPE(18∶1)在低、中、高剂量组中分别是对照组的1.14、1.24、1.31倍,LysoPC(16∶0)在、中、高剂量组分别是对照组的1.58、2.05、2.32倍。花生四烯酸、岩芹酸、O-花生四缩水甘油、17(S)-HETE、PC(16∶0/O-1∶0)、DG(16∶1/17∶1/0∶0)等脂肪酸和磷脂的含量减少,并呈现出剂量相关性。其中PC(16∶0/O-1∶0)的下降幅度最大,低、中、高剂量组中分别是对照组的0.68、0.43、0.38倍。通过同位素示踪验证辛伐他汀对脂质合成的影响并呈现出剂量相关性,对脂质合成限速酶具有调节作用。证实辛伐他汀可以抑制肝脏脂质的合成,最终导致脂类总量的降低。结论: 研究结果提示通过调节肝脏脂类代谢是辛伐他汀实现降脂作用的途径之一。
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  乳腺癌患者血清雌激素及其代谢产物的液相色谱串联质谱检测方法的建立及应用^*

  郝志翔, 钟雅男, 徐吟雪, 印晓星, 张蓓, 周雪妍

  药物分析杂志. 2022, 42(10): 1739-1753. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2022.10.07

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  目的: 建立稳定可靠的液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)方法,检测雌激素雌酮(E₁)、雌二醇(E₂)及其代谢产物2-甲氧基雌酮(2-MeOE₁)、4-甲氧基雌酮(4-MeOE₁)、2-甲氧基雌二醇(2-MeOE₂)、4-甲氧基雌二醇(4-MeOE₂)、16α-羟基雌酮(16α-OHE₁)、2-羟基雌酮(2-OHE₁)、4-羟基雌酮(4-OHE₁)、2-羟基雌二醇(2-OHE₂)、4-羟基雌二醇(4-OHE₂)共11个目标分析物的浓度水平,观察乳腺癌患者血清雌激素稳态的变化规律。方法: 利用丹磺酰氯作为衍生化试剂,对待测物进行衍生化处理,采用Agilent ZORBAX Extend-C₁₈色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8 μm),以含0.1%甲酸的乙腈溶液和含0.1%甲酸的水溶液为流动相,梯度洗脱,流速0.3 mL·min^-1,柱温为25 ℃,进样量30 μL。质谱采用ESI离子源,多反映监测(MRM)的正离子扫描方式进行定量检测雌激素及其代谢产物共11个目标分析物(E₁、E₂、2-MeOE₁、4-MeOE₁、2-MeOE₂、4-MeOE₂、16α-OHE₁、2-OHE₁、4-OHE₁、2-OHE₂和4-OHE₂)。从特异性、线性及范围、定量限、准确度和精密度、提取回收率、基质效应和稳定性等方面对建立的分析方法进行验证。用本法对41例乳腺癌患者和25例健康志愿者的血清样本进行雌激素及其代谢产物检测,比较2组间雌激素及其代谢产物的差异。结果: LC-MS/MS法可同时检测人血清中11个目标分析物的浓度,在标准曲线范围内线性良好;批内和批间精密度<15%;准确度绝对值<15%;提取回收率均>85%;基质效应在85%~115%;稳定性良好。用本方法进行临床血清雌激素及其代谢产物检测,测得对照组中E₁、E₂及其代谢产物2-MeOE₁、4-MeOE₁、2-MeOE₂、4-MeOE₂、16α-OHE₁、2-OHE₁/4-OHE₁、2-OHE₂、4-OHE₂的浓度分别为(0.101±0.006)(0.170±0.012)(1.078±0.104)(0.086±0.008)(0.064±0.000)(0.115±0.051) (0.071±0.006) (0.132±0.023)(0.237±0.020)和(0.225±0.027) nmol·L^-1,乳腺癌患者组相应的11个目标分析物的浓度分别为(0.174±0.017)(0.335±0.041)(0.958±0.080)(0.072±0.006)(0.066±0.001)(0.065±0.023)(0.097±0.007)(0.183±0.020)(0.365±0.084)和(0.366±0.082) nmol·L^-1,结果表明乳腺癌患者原型雌激素(E₁和E₂)和羟基化雌激素(16α-OHE₁,2-OHE₂,4-OHE₂和2/4-OHE₁)的浓度显著增加,而甲氧基化雌激素(4-MeOE₂)的浓度明显降低。结论: 本实验建立的血清中雌激素(E₁和E₂)及其代谢产物(2-MeOE₁、4-MeOE₁、2-MeOE₂、4-MeOE₂、16α-OHE₁、2-OHE₁、4-OHE₁、2-OHE₂和4-OHE₂)的LC-MS/MS定量检测方法准确、快速、可靠,可作为乳腺癌患者血清雌激素及其代谢产物检测的参考方法。乳腺癌状态下,雌激素稳态失衡与乳腺癌的发生发展密切相关,雌激素可能作为乳腺癌发生发展的潜在疾病标志物。
生物检定·活性分析
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  以CD79b为靶点抗体偶联药物结合活性的评价研究^*

  李萌, 赵雪羽, 俞小娟, 杨雅岚, 龙彩凤, 于传飞, 王兰

  药物分析杂志. 2022, 42(10): 1754-1762. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2022.10.08

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  目的: 建立抗CD79b单抗及抗CD79b单抗-vc-MMAE的表面等离子共振(surface plasmon resonance, SPR)法和酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)法评价其结合活性。方法: 采用SPR法,使用Protein A芯片,测定抗CD79b单抗及抗CD79b单抗-vc-MMAE与其靶点CD79b蛋白之间的动力学常数包括结合常数(K_a)和解离常数(K_d)、亲和力常数(K_D)、半最大效应浓度(half maximal effective concentration, EC₅₀)及相对效价;采用经典ELISA法测定抗CD79b单抗及抗CD79b单抗-vc-MMAE与CD79b的EC₅₀及相对效价。结果: 经3次实验测定,抗CD79b单抗与CD79b的K_a为(2.61±0.14)×10⁶ L·mol^-1·s^-1,K_d为(1.87±0.12)×10^-2 s^-1,K_D为(7.17±0.30)×10^-9 mol·L^-1,RSD均＜10%;抗CD79b单抗-vc-MMAE与CD79b的K_a为(2.99±0.26)×10⁶ L·mol^-1·s^-1,K_d为(1.46±0.04)×10^-2 s^-1,K_D为(4.88±0.31)×10^-9 mol·L^-1,RSD均＜10%。经3次实验测定,SPR法测得抗CD79b单抗与CD79b的EC₅₀为(78.68±6.35)ng·mL^-1,相对效价为(84.62±6.63)%,RSD均＜10%;测得抗CD79b单抗-vc-MMAE与CD79b的EC₅₀为(35.93±0.75) ng·mL^-1,相对效价为(84.74±1.76)%,RSD均＜5%。经3次实验测定,ELISA法测得抗CD79b单抗与CD79b的EC₅₀为(22.66±0.41) ng·mL^-1,相对效价为(95.70±1.74)%,RSD均＜5%;测得抗CD79b单抗-vc-MMAE与CD79b的EC₅₀为(69.19±1.71) ng·mL^-1,相对效价为(97.64±2.39)%,RSD均＜5%,SPR和ELISA 2种方法结果基本一致。结论: 建立了抗CD79b单抗及抗CD79b单抗-vc-MMAE的SPR法,并对靶点结合的动力学、亲和力进行评价,与ELISA方法在EC₅₀及相对效价方面进行了对比,为该类抗体偶联药物的研发提供参考。
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  丹红注射液在体外抑制血小板聚集的生物活性测定法研究^*

  李瑞吉, 王婷婷, 刘金辉, 于尚玥, 娄天宇, 马贝贝, 梁耀月, 左泽平, 田时秋, 李依林, 裴海鸾, 林兆洲, 王志斌

  药物分析杂志. 2022, 42(10): 1763-1770. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2022.10.09

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  目的: 以丹红注射液的抗血小板聚集活性为切入点,旨在建立丹红注射液的生物活性测定法,以期量化丹红注射液的药理作用,并优化现有的中药注射液质量评价体系。方法: 以诱导剂为花生四烯酸(arachidonic acid),丹红注射液剂间比1∶0.8,血小板数500×10⁹个·L^-1,在体外抑制血小板聚集的生物作用为试验系,实施量效关系考察与效价定义,而后通过量反应平行线法计算效价,建立丹红注射液的生物活性测定法,同时进行方法学考察验证该方法的可行性与适用性。结果: 丹红注射液在64%~100%的浓度范围内呈现较显著的量效关系,且由效价定义得到的丹红注射液标准品效价为1 350 U·mL^-1;其余7个不同批次的供试品效价分别为1 320.6、1 397.4、1 407.5、1 445.2、1 278.4及1 234.6 U·mL^-1。结论: 基于抗血小板聚集活性建立的丹红注射液生物活性测定法操作简便,精确度高,同时以效价测定的方式量化了丹红注射液的关键活性,可为现有中药质量控制方法的改进与扩充提供借鉴。
安全监测
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  HPLC法测定甘草酸二铵注射液异构体含量及检测有关物质^*

  谭菊英, 刘庄蔚, 王娟, 梁秋霞, 蒋洁, 杨欣智, 朱健萍, 卢日刚, 邓鸣

  药物分析杂志. 2022, 42(10): 1771-1779. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2022.10.10

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  目的: 建立同时测定甘草酸二铵注射液中异构体18α-甘草酸二铵和18β-甘草酸二铵含量及检测有关物质的高效液相色谱方法。方法: 采用Xbridge C₁₈色谱柱,以磷酸盐缓冲液(磷酸二氢钾6.8 g、氢氧化钾1.7 g,加水1 000 mL溶解,用氢氧化钾试液调pH至7.0)为流动相A,乙腈为流动相B,含量测定采用等度洗脱,有关物质检测采用梯度洗脱,流速1.0 mL·min^-1,柱温30 ℃,检测波长252 nm,进样量20 μL。结果: 18α-甘草酸二铵和18β-甘草酸二铵线性范围分别为34.64~103.9、15.20~45.59 μg·mL^-1(r=0.999 9);平均加样回收率(n=6)分别为101.7%、99.8%,RSD分别为1.6%、2.0%;5批样品中18α-甘草酸二铵和、18β-甘草酸二铵及其总含量分别为62.32%~76.31%、16.03%~25.06%、87.01%~92.34%。有关物质检测中,18α-甘草酸二铵和18β-甘草酸二铵两异构体峰与相邻杂质峰均能有效分离,辅料不干扰有关物质的测定,供试品溶液在42 h内稳定;18α-甘草酸二铵线性范围为0.870 9~13.06 μg·mL^-1(r=0.999 9);18α、18β异构体检测限分别为3.528、3.148 ng;5批次样品共检出杂质24个,最大单个杂质含量为1.63%~2.46%;总杂质含量为6.47%~7.44%。结论: 本方法准确、简便、可靠,可用于甘草酸二铵注射液的含量测定及有关物质检测。
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  GC-NCI MS法同时测定水蛭中34个溴代阻燃剂的残留量^*

  孙晶, 谭力, 胡浩彬, 冯有龙, 樊夏雷, 杭太俊, 曹玲, 杨功俊, 李珂瑜, 王沁怡

  药物分析杂志. 2022, 42(10): 1780-1791. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2022.10.11

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  目的: 建立气相色谱-负化学离子化质谱法(GC-NCI MS)同时测定水蛭中28个持久性有机污染物(POPs)多溴二苯醚(PBDEs)和6个新兴溴代阻燃剂(eBFRs),并测定9批市售水蛭药材中溴代阻燃剂残留量。方法: 水蛭样品粉末用正己烷-二氯甲烷(1∶1,v/v)超声提取,50%硫酸硅胶消化过夜,复合硅胶柱固相净化,正己烷-二氯甲烷(1∶1,v/v)洗脱,以BDE-118和¹³C-BDE-209为定量内标,采用GC-NCI MS测定。使用5%苯基-95%甲基聚硅氧烷为固定液的安捷伦DB-5MS石英毛细管柱(0.25 mm×15 m,0.1 μm)分离,载气为高纯氦气,流速1.0 mL·min^-1;进样口温度290 ℃,脉冲不分流进样模式,进样体积1 μL;柱温程序升温(初始90 ℃,保持0.5 min,以20 ℃·min^-1升至180 ℃,以5 ℃·min^-1升至275 ℃,再以15 ℃·min^-1升至315 ℃,保持5 min)。三重四极杆串联质谱仪监测;离子源为化学源(CI),反应气为甲烷,离子源温度230 ℃,接口温度300 ℃,扫描模式为负离子选择离子检测模式。优化了负离子选择离子检测模式的条件,较好地去除基质干扰,并提高了质谱定性的准确性及定量的灵敏性。结果: 34个化合物的线性关系良好,相关系数r均大于0.999 5,3个水平加标回收率试验中全部指标回收率在63.0%~135.6%,符合痕量测定的要求。9批水蛭样品均检出PBDEs和eBFRs,总量分别为1.426~4.617 μg·kg^-1和0.541~9.837 μg·kg^-1。结论: 该方法专属、灵敏、可靠,可用于中药材中阻燃剂的残留控制。建议相关部门考虑POPs在水蛭类等动物药中的安全限量。
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  UPLC-QDa质谱检测器法检测米拉贝隆中硝基苯类带基因毒警示结构杂质的含量^*

  秦永香, 许红霞, 谌宗永, 郭鑫, 刘智, 孙跃军, 王明娟, 袁伟锋, 孟旻, 马昂, 刘宇晶

  药物分析杂志. 2022, 42(10): 1792-1800. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2022.10.12

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  目的: 建立可监控米拉贝隆原料中残留风险最大的4个硝基苯类带基因毒警示结构杂质(MLB-1、MLB-2、MLB-1-IM01、MLB-2-IM01)含量的方法。方法: 采用UPLC-QDa质谱检测器系统,XBridge C₁₈柱(150 mm×4.6 mm,3.5 μm),以乙腈-水-三氟乙酸(400∶600∶0.5)为流动相,流速0.8 mL·min^-1,柱温35 ℃,进样体积2 μL;QDa检测器的参数设置:电喷雾离子化-正电离模式(ESI⁺),多反应监测模式(MRM),探头温度为600 ℃,采集速率10 点·s^-1,气流量20 L·min^-1;采集时间15 min。结果: 4个目标硝基苯类杂质在0.03~0.6 μg·mL^-1浓度范围内(相当于主成分的0.000 3%~0.006%水平;4个目标杂质限度为0.003%,总量限度为0.01%)线性关系均良好(r≥0.997 3),回收率介于91.8%~119.1%,检测限和定量限分别低于0.1和0.25 μg·mL^-1(相当于0.002 5%水平),能较好地满足目标杂质的检测灵敏度要求。采用拟定工艺生产的多批米拉贝隆样品中均未检出上述4个目标杂质(总量<0.001%,远低于限度规定的0.01%)。结论: 该方法灵敏度高,准确性好,在拟定限度范围内呈线性响应,可用于检测米拉贝隆原料中潜在硝基苯类基因毒杂质的残留量监控。
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  伊沙匹隆有关物质的HPLC法检测^*

  伏瑶, 刘松霞, 范彩霞, 彭纪铭, 晋敦青, 侯君

  药物分析杂志. 2022, 42(10): 1801-1807. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2022.10.13

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  目的: 建立HPLC法检测伊沙匹隆原料药7个有关物质(有关物质1~7)的方法,为伊沙匹隆的质量控制提供方法依据。方法: 采用Welch XB-C₁₈色谱柱(250 mm×4.6 mm,3 μm),以乙腈-0.04 mol·L^-1乙酸铵水溶液为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL·min^-1,柱温25 ℃,检测波长249 nm,进样量10 μL。结果: 伊沙匹隆与其7个有关物质的色谱峰均能良好分离。有关物质1~7质量浓度在0.05~2 μg·mL^-1范围内与相应的峰面积呈良好的线性关系(r≥0.999 5);定量限分别为0.025、0.033、0.043、0.036、0.036、0.108、0.032 μg·mL^-1;平均加样回收率(n=9)分别为98.5%、98.3%、101.2%、100.3%、97.6%、101.0%和98.6%,RSD分别为2.3%、2.8%、3.3%、2.1%、2.6%、5.7%和3.6%。3批伊沙匹隆样品检测结果显示,已知杂质及其他最大单个杂质含量均＜0.083%,杂质总含量＜0.256%。结论: 本方法专属性强,准确度高,可用于伊沙匹隆原料药有关物质的测定,同时填补了国内外关于伊沙匹隆有关物质检测方法的空白。
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  基于LC-MS/MS特征图谱技术牛黄清心丸(局方)中牛黄及代用品的鉴别研究^*

  胡晓茹, 聂黎行, 何风艳, 刘晶晶, 戴忠, 马双成

  药物分析杂志. 2022, 42(10): 1808-1814. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2022.10.14

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  目的: 通过建立牛黄清心丸(局方)中牛黄及代用品胆汁酸类成分的特征图谱,达到鉴别牛黄清心丸(局方)中牛黄种类的目的,进而更好地控制牛黄清心丸(局方)中牛黄的质量。方法: Waters Symmetryshield^TM C₁₈色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),以0.2%甲酸水溶液(含10 mmol·L^-1醋酸铵)(A)-乙腈(B)为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL·min^-1;采用负模式电喷雾离子化源(ESI^-),以甘氨胆酸(m/z 464.3→m/z 402.4/74.1)、牛磺胆酸(m/z 514.3→m/z 124.1/80.0)、胆酸(m/z 407.4→m/z 343.3/289.1)、猪去氧胆酸(m/z 391.4→m/z 391.4)、鹅去氧胆酸(m/z 391.4→m/z 391.4)和去氧胆酸(m/z 391.4→m/z 343.3/327.2)为检测离子对进行分析,建立牛黄清心丸(局方)中牛黄中胆汁酸类成分的特征图谱,对牛黄清心丸(局方)中牛黄及代用品进行鉴别研究。结果: 所建立的牛黄清心丸(局方)中牛黄及代用品LC-MS/MS特征图谱可以牛磺胆酸、甘氨胆酸和胆酸的峰面积比值对该制剂中牛黄的种类进行区分。同时发现1个批次牛黄清心丸(局方)存在人工牛黄掺伪的问题;其余批次牛黄清心丸中牛黄种类与说明书中一致。结论: LC-MS/MS特征图谱技术可以有效地排除牛黄清心丸(局方)中其他成分的干扰,所建立的牛黄和代用品胆汁酸特征图谱可以用于鉴别牛黄清心丸(局方)中牛黄及代用品种类,以期对含牛黄制剂中牛黄的质量控制提供参考。
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  激光散射法测定氟米龙滴眼液的粒度分布

  高旋, 陈晓萍, 范琳琳, 杨永健

  药物分析杂志. 2022, 42(10): 1815-1821. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2022.10.15

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  目的: 建立激光散射法用于测定氟米龙滴眼液的粒度分布。方法: 采用Mastersizer 3000激光粒度分析仪和Hydro MV型湿法进样器,样品折射率为1.70;样品吸收率为0.001;分散介质为0.000 1 g·mL^-1吐温-80,其折射率为1.33;搅拌速率为1 000 r·min^-1;测量次数为5次;测量时间为5 s;背景时间为5 s;遮光率为5%~15%。结果: 方法学精密度考察结果d(0.5)和d(0.9)的RSD均＜2%,5批氟米龙滴眼液样品d(0.5)均＜4 μm,d(0.9)均＜8 μm。结论: 该方法操作简便,准确度高,耐用性好,适用于氟米龙滴眼液的粒度检测。
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  LC-MS/MS法检测替格瑞洛原料药中4,6-二氯-2-(丙硫基)-5-氨基嘧啶和5-硝基-2-(丙硫基)嘧啶-4,6-二醇

  王庆鹏, 骆献丽, 陈晓英, 李原, 张明辉, 刘山崎

  药物分析杂志. 2022, 42(10): 1822-1830. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2022.10.16

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  目的: 建立LC-MS/MS法检测替格瑞洛中基因毒性杂质4,6-二氯-2-(丙硫基)-5-氨基嘧啶(DCPA)和5-硝基-2-(丙硫基)嘧啶-4,6-二醇(DHPN)。方法: 采用Ultimate^® UHPLC XB-Phenyl色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8 μm),以0.1%甲酸溶液为流动相A,0.1%甲酸的甲醇溶液为流动相B,梯度洗脱,流速0.3 mL·min^-1,柱温为40 ℃;采用AB SCIEX ExionLC-QTRAP5500三重四极杆串联离子阱液质联用仪进行检测,电喷雾离子源(ESI⁺)、多反应监测模式(MRM),定量离子对为m/z 240.1→197.8(DCPA)、m/z 232.2→213.9(DHPN)。结果: DCPA质量浓度在0.10~16.1 ng·mL^-1范围内与峰面积呈良好线性关系(r=0.999 9);检测限为0.03 ng·mL^-1,定量限为0.10 ng·mL^-1,平均加样回收率为97.5%(RSD=9.9%,n=9);DHPN质量浓度在0.20~16.1 ng·mL^-1范围内与峰面积呈良好线性关系(r=0.999 5),检测限为0.06 ng·mL^-1,定量限为0.20 ng·mL^-1,平均加样回收率为98.1%(RSD=1.5%,n=9)。重复性和中间精密度实验中,DHPN在100%限度浓度加标供试品溶液(n=12)中的加样平均含量为7.97 μg·g^-1,RSD=4.9%;供试品溶液(n=12)中DCPA的平均含量为0.94 μg·g^-1,RSD=4.3%,表明精密度良好。对照品溶液、供试品溶液、加标供试品溶液中DCPA和DHPN室温放置24 h内稳定。3批替格瑞洛样品(批号Q19010701G、Q19010702G、Q19010703G)中均未检测到DHPN,DCPA的含量依次为1.2、1.1和1.1 μg·g^-1,均符合规定。结论: 该方法简便、准确、可靠,可用于替格瑞洛中DCPA和DHPN的检测。
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  UPLC-APCI MS/MS法检测克拉霉素中3个N-亚硝胺类化合物

  汪辉, 邵红霞, 秦秋明

  药物分析杂志. 2022, 42(10): 1831-1837. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2022.10.17

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  目的: 建立超高液相色谱-大气压化学电离源三重四极杆质谱法(UPLC-APCI MS/MS)检测克拉霉素中3个N-亚硝胺类化合物[N-亚硝基乙基异丙基胺(NIPEA)、N-亚硝基二异丙胺(NDIPA)和N-亚硝基二丁胺(NDBA)。方法: 采用ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8 μm),以甲醇-0.1%甲酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速0.4 mL·min^-1;采用大气压化学电离(APCI),多反应监测(multiple reaction monitoring,MRM),正离子扫描模式。结果: 测得NIPEA、NDIPA质量浓度在18~120 μg·L^-1内呈现良好的线性关系(r=0.999),NDBA质量浓度在7.8~52 μg·L^-1内呈现良好的线性关系(r=0.999 1),重复性试验的RSD为2%~3%,方法回收率为88%~109%,NIPEA、NDIPA方法定量限(S/N不低于10)为9.0 μg·L^-1,NDBA方法定量限(S/N不低于10)为3.9 μg·L^-1,溶液在室温放置24 h内稳定。对2家国内生产企业各3批克拉霉素样品进行检测,NIPEA、NDIPA、NDBA均低于检测限。结论: 本试验建立了克拉霉素中N-亚硝胺类化合物NIPEA、NDIPA、NDBA的检测方法,具有灵敏度高,测定结果准确,专属性强等诸多优点,可应用于临床治疗药物的监测。
标准研讨
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  基于对照品和对照提取物的2个含玄参复方和制剂定量研究^*

  杨帆, 蒋丽娟, 高艳艳, 孙萌, 李想, 姜艳艳, 刘斌

  药物分析杂志. 2022, 42(10): 1838-1849. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2022.10.18

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  目的: 基于玄参对照提取物和玄参中主成分化学对照品,分别建立四妙勇安汤和玄麦甘桔颗粒含量测定方法,探讨中药对照提取物代替单体对照品在中药复方质量控制中应用的合理性与科学性。方法: 采用高效液相色谱法,使用SunFire C₁₈色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),以甲醇(A)-0.05%磷酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL·min^-1,检测波长210 nm(检测哈巴苷)、280 nm(检测哈巴俄苷)、330 nm(检测安格洛苷C),柱温35 ℃,进样量10、20 μL。分别以哈巴苷、安格洛苷C、哈巴俄苷3个对照品和已知含量的玄参对照提取物为对照,分别建立四妙勇安汤和玄麦甘桔颗粒的HPLC含量测定方法,测定2种复方制剂中3个成分的含量,采用t检验法对2种方法所得结果进行比较。结果: 对照品法测得四妙勇安汤中3个成分的含量分别为0.132 9、0.042 1、0.032 5 mg·mL^-1,对照提取物法测得的含量分别为0.133 1、0.042 0、0.032 4 mg·mL^-1,3个成分对应的P值分别为0.665、0.284、0.661;对照品法测得玄麦甘桔颗粒中3个成分的含量分别为0.035 1、0.012 2、0.006 3 mg·mL^-1,对照提取物法测得的含量分别为0.035 3、0.012 2、0.006 4 mg·mL^-1,3个成分对应的P值分别为0.173、0.586、0.157。t检验结果显示,P值均＞0.05,2种方法无显著性差异。结论: 该研究结果为玄参对照提取物替代对照品对四妙勇安汤和玄麦甘桔颗粒进行含量测定提供了科学依据,为中药对照提取物替代单体对照品在中药复方质量控制应用的可行性和实用性奠定了研究基础,为中药复方质量控制研究提供新的研究思路。
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  mRNA疫苗起始材料、原辅料和原液技术评估要点的研究与分析

  孙巍, 佟乐, 杨亚莉, 杨振

  药物分析杂志. 2022, 42(10): 1850-1855. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2022.10.19

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  基于mRNA疫苗生产技术特点,对照新近发布的《WHO预防传染病mRNA疫苗质量、安全及有效性评价法规考虑》,梳理评估现阶段预防传染病mRNA疫苗起始材料、原辅料和原液质量控制具体考虑要点,为我国预防传染病mRNA疫苗的研究和质控提供参考。
快速分析
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  近红外光谱法快速测定附子中总灰分、酸不溶性灰分和胆巴残留^*

  戴胜云, 蒋双慧, 高妍, 刘杰, 乔菲, 过立农, 马双成, 郑健

  药物分析杂志. 2022, 42(10): 1856-1863. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2022.10.20

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  目的: 采用近红外光谱法快速分析附子中的总灰分、酸不溶性灰分和胆巴残留。方法: 选择40批附子,包括白附片、黑顺片和生附片,样品粉碎后,采用漫反射的方式采集样品近红外光谱(NIRS),扫描范围1 950~1 550 cm^-1,扫描次数32,分辨率16 cm^-1,温度(25±2) ℃,相对湿度(55±2)%,每份样品重复测定3次。按照2020年版《中华人民共和国药典》通则中总灰分测定法及酸不溶性灰分测定40批样品的总灰分和酸不溶性灰分,通过化学法测定胆巴残留。用Kenston样本集划分方法划分数据集,其中26批附子样品为校正集,其余14批为验证集,建立总灰分、酸不溶性灰分和胆巴残留与NIR光谱数据之间的偏最小二乘法(PLS)模型。结果: 测得的样品的总灰分为1.40%~15.4%,酸不溶性灰分为0.008%~0.812%,胆巴残留为0.044%~1.464%。所建立的PLS模型中,总灰分、酸不溶性灰分和胆巴残留模型的相对预测偏差(RPD)分别为5.17、3.47和3.41,验证集相关系数(r_pre)分别为0.982 1,0.978 0和0.975 0,说明NIRS模型验证集与总灰分、酸不溶性灰分和胆巴残留测定值具有良好的线性关系,模型预测效果良好。结论: 采用NIRS技术结合PLS模型可以快速对附子中的总灰分、酸不溶性灰分和胆巴残留进行测定,方法操作简便,对控制附子质量有一定的指导作用。