2022年, 第42卷, 第2期　
刊出日期：2022-02-28

  

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综述专论
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  蛋白质组学及其在肝癌诊疗中的研究进展

  郑鑫, 郑天宇

  药物分析杂志. 2022, 42(2): 179-186. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2022.02.01

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  蛋白质组学是一门在大规模水平上研究某一类型细胞、组织或体液中的所有蛋白质组成及其功能的新兴学科。其以细胞或器官表达的所有蛋白质为研究对象,通过凝胶电泳、生物质谱及生物信息学等技术,达到分离、鉴定、分析蛋白质的目的。肝癌是世界上病死率较高的恶性肿瘤之一,运用蛋白质组学技术,可以了解肝癌的发生、发展机制,在诊断和治疗方面产生价值。本文将解释蛋白质组学的概念及主要技术,介绍蛋白质组学在肝癌研究中的意义,阐述蛋白质组学在肝癌的早期诊断,标记物的筛选以及药物靶标的选择中体现出的重要应用。随着蛋白质组学的逐步完善和现代生物技术的迅速发展,这项技术将在肝癌等生命科学领域发挥更显著的作用。
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  植物药材提取动力学研究进展及其标准化思考

  白璧炜, 闫广利, 孙晖, 白政忠, 张清波

  药物分析杂志. 2022, 42(2): 187-197. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2022.02.02

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  中药提取动力学是定量研究中药材有效成分、溶解规律和提取工艺的有利工具。随着动力学模型研究的由浅入深到简的发展过程,应用于药材提取工业化生产中的工艺参数日趋成熟,业界应加快提取动力学的标准化进程,以推进该工具的推广和应用。本文对国内近10年的植物药材提取动力学研究文献进行总结与归纳,对植物药材提取动力学研究和应用进行了深度思考并提出建议。对提取动力学研究的标准化和工具化具有非常现实的意义。
成分分析
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  UPLC-MS/MS法同时测定绞股蓝中16个皂苷类成分的含量^*

  温秀萍, 翁艳鸿, 陈祖倩, 许少华, 许文, 林青青, 徐伟, 林羽, 陈在敏

  药物分析杂志. 2022, 42(2): 198-210. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2022.02.03

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  目的: 建立超高效液相色谱串联三重四极杆质谱法(UPLC-MS/MS),在12 min内完成对绞股蓝药材中16个皂苷类成分(人参皂苷CK、F₂、Rb₁、Rb₃、Rd、Rg₂、Rg₃、Rg₅、Rg₆、Rh₄、Rh₈,绞股蓝皂苷A、XLVI、XLIX,三七皂苷Fd和越南人参皂苷R₈)的含量测定。方法: 采用UPLC-MS/MS法,正离子多反应监测(MRM)模式进行含量测定。色谱条件:采用Waters CORTECS C₁₈色谱柱(2.1 mm×100 mm, 1.6 μm),流动相为0.1%甲酸水(A)-乙腈(B),梯度洗脱,流速为0.25 mL·min^-1,柱温为45 ℃。结果: 在所设定的色谱条件下,12 min内完成对绞股蓝药材中上述16个成分的含量测定,在考察的浓度范围内均呈良好的线性关系(r>0.997 6),回收率和RSD分别在96.2%~104.0%和1.5%~2.9%,精密度、重复性、稳定性考察均符合分析要求。含量测定结果发现,16个皂苷中,绞股蓝皂苷XLVI、A、XLIX和人参皂苷Rb₃含量较高,含量均值分别达到7.083、5.599、1.657、1.283 mg·g^-1,且不同产地的绞股蓝药材中皂苷类成分存在较大差异,聚类分析可分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ 3类。统计发现,越南人参皂苷R₈,人参皂苷Rb₁、Rb₃、Rd、Rg₃、Rg₅、Rg₆、Rh₈、F₂、CK,绞股蓝皂苷XLVI和三七皂苷Fd成分含量在类型Ⅱ中高于类型Ⅰ和Ⅲ,而绞股蓝皂苷A与XLIX成分含量在Ⅲ类型中高于类型Ⅰ和Ⅱ。结论: 本研究所建立的在12 min内完成对绞股蓝中16个皂苷类成分的UPLC-MS/MS定量分析方法简便、快捷、准确,分离效果较好,可为完善绞股蓝中皂苷类成分的质量标准评价提供依据。
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  对照提取物定位结合一测多评法同时测定重楼中9个皂苷的含量^*

  李海亮, 李静, 刘丽娜, 金红宇

  药物分析杂志. 2022, 42(2): 211-217. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2022.02.04

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  目的: 建立一测多评法(QAMS法)同时测定重楼中9个皂苷的含量,为其质量标准的研究提供依据。方法: 采用Agilent ZORBAX SB-C₁₈色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);以乙腈与水为流动相,梯度洗脱,流速为1.0 mL·min^-1,柱温为20 ℃,检测波长为203 nm。使用重楼对照提取物定位各色谱峰,以重楼皂苷Ⅶ为内参物,建立重楼中重楼皂苷D、重楼皂苷H、重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅱ、薯蓣皂苷、纤细薯蓣皂苷、重楼皂苷Ⅰ和重楼皂苷Ⅴ与内参物的相对校正因子(RCFs),并验证所建立方法的可行性和准确性。结果: 9个重楼皂苷在一定的浓度范围内呈良好的线性关系(R²>0.999 9);精密度、稳定性、重现性等均符合方法学要求;重楼皂苷D、重楼皂苷H、重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅱ、薯蓣皂苷、纤细薯蓣皂苷、重楼皂苷Ⅰ和重楼皂苷Ⅴ的相对校正因子分别为0.891 1、0.896 9、0.734 6、0.992 7、0.880 3、0.901 6、0.827 1、0.768 7,在不同实验条件下重现性良好。45批云南重楼中9个皂苷的平均总含量为2.211%,35批七叶一枝花中9个皂苷的平均总含量为2.965%。结论: 所建立的一测多评法可用于重楼中9个皂苷成分的含量测定,可为重楼的质量控制提供科学理论依据。
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  2种半夏炮制品-厚朴药对HPLC特征图谱与多成分含量测定研究^*

  李卫, 袁海建, 马学玉, 肖焱波, 王春琼, 李干鹏

  药物分析杂志. 2022, 42(2): 218-228. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2022.02.05

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  目的: 建立2种半夏炮制品-厚朴药对的HPLC特征图谱分析方法及鸟苷、尿苷、肌苷、紫丁香苷、绿原酸、金丝桃苷、和厚朴酚、厚朴酚的含量测定的方法。方法: 采用Agilent Zorbax SB-C₁₈色谱柱(4.6 mm × 250 nm,5 μm),以0.5%磷酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相,梯度洗脱,流速为1.0 mL·min^-1,检测波长为210 nm,柱温为30 ℃。采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”(2012版)软件建立20批样品的HPLC特征图谱并进行相似度评价,使用SPSS 24.0、SIMCA 14.1软件进行主成分分析(PCA)和偏最小二乘聚类分析(PLS-DA)。结果: 从供试品溶液中未检出肌苷,鸟苷、尿苷、紫丁香苷、绿原酸、金丝桃苷、和厚朴酚、厚朴酚在一定浓度范围内呈良好的线性关系(r=0.999 4~0.999 8),平均回收率(n=6)分别为97.1%、96.2%、97.1%、98.2%、96.1%、98.3%及96.9%(RSD<2.0%)。方法的精密度RSD均小于3.0%,重复性RSD小于3.0%,供试品溶液放置48 h内稳定。20批样品的相似度均大于0.9,表明样品相似度差异不大。主成分得分结果与聚类分析结果一致,都将样品分为4类。本研究共标定了34个共有峰,经主成分分析,主成分1～8是影响药材样品质量评价的主要因子;其中成分15、16、21、17、11、9、6、8、30、22、1、14、26、23、5、31和3(尿苷)对样品分组起关键作用,鸟苷、尿苷、紫丁香苷、绿原酸、金丝桃苷、和厚朴酚、厚朴酚的平均含量分别为0.047、0.075、0.425、0.623、0.065、4.994、8.724 mg·g^-1。结论: 所建立的HPLC方法可用于同时测定半夏炮制品-厚朴药对中8个化学成分的含量,该方法高效、准确、重复性好,可用于半夏-厚朴药对的质量控制、评价。
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  龙骨安神酒HPLC特征图谱及10个成分含量测定研究^*

  杨要琳, 张海, 李希, 冯建安, 王玉, 黄嫣

  药物分析杂志. 2022, 42(2): 229-236. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2022.02.06

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  目的: 建立龙骨安神酒HPLC特征图谱并测定斯皮诺素、金丝桃苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、补骨脂素、异补骨脂素、宝藿苷Ⅰ、五味子醇甲的含量,为龙骨安神酒的质量控制提供参考。方法: 采用Agilent Zorbax SB-C₁₈色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),以乙腈-水溶液为流动相进行梯度洗脱,体积流量为1.0 mL·min^-1,柱温为30 ℃,检测波长为270 nm;通过相似度评价,结合聚类分析(CA)、主成分分析(PCA)及偏最小二乘法-判别分析(PLS-DA)对12批龙骨安神酒的指纹图谱进行分析评价,并对指认的10个指标成分进行定量测定研究。结果: 建立了龙骨安神酒特征指纹图谱,共标定了15个共有峰,各批次样品的相似度均大于0.9;12批龙骨安神酒样品质量存在一定的差异,筛选出对质量影响较大的5个关键成分,分别为斯皮诺素、金丝桃苷、朝藿定C、淫羊藿苷、补骨脂素; 10种成分的线性关系良好(r≥0.999 6),含量范围分别为10.59～18.59、48.51～61.11、13.74～20.78、13.05～20.05、231.82～271.29、113.77～148.98、60.89～80.58、58.90～71.68、17.91～21.17、64.09～76.34 μg·mL^-1。结论: 建立的龙骨安神酒特征图谱及10个成分含量测定的方法,简便、准确可靠,可用于龙骨安神酒的质量控制。
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  液质联用法测定齿痛消炎灵颗粒中马兜铃酸Ⅰ和马兜铃内酰胺Ⅰ

  刘静, 刘阳, 武营雪, 戴忠, 马双成

  药物分析杂志. 2022, 42(2): 237-242. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2022.02.07

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  目的: 建立齿痛消炎灵颗粒中马兜铃酸Ⅰ和马兜铃内酰胺Ⅰ的液质联用检测分析方法。方法: 采用Agilent SB-C₁₈ (2.1 mm× 50 mm,1.8 μm)色谱柱,以乙腈-0.1%甲酸溶液为流动相,梯度洗脱,流速0.3 mL·min^-1;多反应监测模式,马兜铃酸Ⅰ为m/z 359.0→298.1(定量)和m/z 359.0 → 296.1(定性),马兜铃内酰胺Ⅰ为m/z 294.0 → 278.9(定量)和m/z 294.0→251.1(定性),建立齿痛消炎灵颗粒中2个马兜铃酸类成分的液质联用检测方法,在方法学验证的基础上对所有样品进行检测分析。结果: 马兜铃酸Ⅰ和马兜铃内酰胺Ⅰ进样量分别在51.849~1 036.984、1.842~36.848 pg范围内线性关系良好,R²≥ 0.999 5,定量限分别为26.91、0.69 pg,平均加样回收率分别为107.2%~107.4%(RSD 0.50%~2.1%)、98.9%~105.5%(RSD 1.3%~2.9%)。16批齿痛消炎灵颗粒样品中均未检出马兜铃酸Ⅰ,马兜铃内酰胺Ⅰ的检出量为0.063~0.763 μg·g^-1。结论: 所建立的方法准确、灵敏、可靠,能够用于齿痛消炎灵颗粒中上述马兜铃酸类成分的筛查与分析,为其安全性有关成分研究提供科学依据。
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  HPLC同时测定小儿肺热咳喘口服液中10个成分的含量^*

  胡英婕, 王磊, 朱冬冬

  药物分析杂志. 2022, 42(2): 243-252. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2022.02.08

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  目的: 建立HPLC法同时测定小儿肺热咳喘口服液中10个成分(盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、苦杏仁苷、(R,S)-告依春、芒果苷、黄芩苷、连翘苷、绿原酸、连翘酯苷A、木犀草苷) 的含量,为小儿肺热咳喘口服液质量标准完善提供依据。方法: 采用 ZORBAX SB-C₁₈色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱,体积流量为0.8 mL·min^-1,柱温为35 ℃,检测波长为210 nm(盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱和苦杏仁苷)、258 nm[(R,S)-告依春、芒果苷、黄芩苷和连翘苷]和330 nm(绿原酸、连翘酯苷A和木犀草苷)。结果: 上述10个成分进样量的线性关系分别为0.20～1.20 μg(r=0.999 0)、0.20～1.20 μg(r=0.999 6)、0.25～1.50 μg(r=0.999 4)、0.40～2.40 μg(r=0.999 5)、0.40～2.40 μg(r=0.999 2)、0.40～2.40 μg(r=0.999 1)、0.40～2.40 μg(r=0.999 3)、0.20～1.20 μg(r=0.999 3)、0.10～0.60 μg(r=0.999 4)、0.50～3.00 μg(r=0.999 6),平均加样回收率为98.5%～99.5%,RSD≤0.89%(n＝9)。单因素方差分析结果表明,不同批次间的盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、苦杏仁苷、黄芩苷、连翘苷、连翘酯苷A、芒果苷含量无显著性差异(P>0.01),(R,S)-告依春、绿原酸和木犀草苷的含量有显著差异(P<0.01)。盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、苦杏仁苷、(R,S)-告依春、绿原酸、木犀草苷、黄芩苷、连翘苷、连翘酯苷A、芒果苷的平均含量分别为0.174、0.067、2.326、3.548、2.851、0.958、3.484、3.456、5.389、3.891 mg·mL^-1。结论: 该方法简便、准确、灵敏,重复性好,可用于同时测定小儿肺热咳喘口服液中10个成分的含量。
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  芩连胶囊HPLC指纹图谱研究及多指标成分定量分析

  周娟娟, 吴嫣艳, 冯友龙, 田京歌

  药物分析杂志. 2022, 42(2): 253-262. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2022.02.09

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  目的: 建立芩连胶囊的HPLC指纹图谱,并同时测定芍药苷、盐酸黄连碱、连翘酯苷A、盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、黄芩苷、甘草酸7个指标性成分的含量。方法: 采用Agela Durashell RP C₁₈(4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱,以甲醇-0.05 mol·L^-1磷酸二氢钾水溶液(含0.05%磷酸)为流动相进行梯度洗脱,流速1.0 mL·min^-1,柱温35 ℃,检测波长分别为230 nm(芍药苷、甘草酸)、280 nm(黄芩苷)和346 nm(盐酸黄连碱、连翘酯苷A、盐酸小檗碱、盐酸巴马汀)。结果: 建立了芩连胶囊的HPLC指纹图谱,共确定了20个共有峰,利用相似度评价系统对20批样品指纹图谱进行分析,各批样品相似度均在0.97以上。在建立的色谱条件下,定量分析的7个成分分离度良好,方法精密度和重复性的RSD均<2.0%,供试品溶液在48 h内稳定,各成分具有良好的线性关系和较宽的线性范围,加样回收率为96.5%~101.9%,RSD为0.30%～1.9%;20批芩连胶囊中芍药苷、盐酸黄连碱、连翘酯苷A、盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、黄芩苷、甘草酸的含量范围分别为6.95～14.37、0.27～2.46、3.47～8.43、9.82～17.80、1.90～3.55、13.12～25.90、1.64～4.40 mg·g^-1。结论: 所建立的HPLC指纹图谱方法和多指标成分测定方法可有效地评价芩连胶囊的质量。
代谢分析
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  柚皮苷改善东莨菪碱模型小鼠学习认知能力的血液代谢组学研究^*

  林雪, 赵晨宇, 董蕊, 张怡博, 姚睿敏, 郭婷秀, 张宁, 徐艳明

  药物分析杂志. 2022, 42(2): 263-270. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2022.02.10

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  目的: 从代谢组学角度研究骨碎补总黄酮中柚皮苷对东莨菪碱致记忆损伤模型小鼠的学习记忆、认知能力的保护机制。方法: 取3月龄雄性昆明种小鼠按体质量随机分为空白组、模型组和给药组。采用东莨菪碱构建记忆损伤模型,新物体识别实验和水迷宫实验检测小鼠学习记忆能力,然后对小鼠血液样品进行代谢物图谱及血液代谢物变化分析。结果: 行为学实验结果显示,给药后小鼠的学习记忆能力较模型组明显改善。代谢组学研究结果显示,给药后小鼠血液的代谢轮廓都有显著的回调趋势,共鉴定出差异代谢物21个,其中L-乙酰肉碱、柠檬酸水平给药后显著上升,脯氨酸、色氨酸、溶血磷脂酰胆碱(14∶0)、溶血磷脂酰碱(15∶0)、脱氧胞苷、4-氨基苯酚水平给药后显著降低,涉及牛磺酸和亚牛磺酸代谢、色氨酸代谢、精氨酸和脯氨酸代谢、维生素B₆代谢、酪氨酸代谢、柠檬酸循环。结论: 柚皮苷能够改善东莨菪碱模型小鼠学习记忆能力,其作用机制可能与改善能量代谢,减少β样淀粉蛋白(Aβ)产生,降低Tau蛋白过度磷酸化,促进神经突触可塑性,改善乙酰胆碱系统紊乱,抗氧化应激和抗细胞凋亡等作用有关。
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  LC-MS/MS法同时测定伊马替尼、达沙替尼、尼洛替尼及伏立康唑、伊曲康唑、泊沙康唑的血药浓度

  向东, 余恒毅, 刘璐, 李喜平, 赵婷慧, 李宁红, 刘东, 贡雪芃

  药物分析杂志. 2022, 42(2): 271-278. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2022.02.11

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  目的: 建立同时测定血浆中3种一线络氨酸激酶抑制剂(伊马替尼、达沙替尼、尼洛替尼)和3种一线三唑类抗真菌药物(伏立康唑、伊曲康唑、泊沙康唑)浓度的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)方法,并应用于临床进行治疗药物监测。 方法: 血浆样品50 μL加入氯氮平内标 20 μL,采用乙腈直接沉淀蛋白法处理样品后稀释进样分析。采用Welch XB-C₁₈(2.1 mm×50 mm,5.0 μm)色谱柱进行色谱分离,流动相A为10 mol·L^-1甲酸铵溶液,流动相B为甲醇-乙腈-异丙醇(7∶1.5∶1.5,含0.2%甲酸),梯度洗脱,流速0.72 mL·min^-1, 进样量6 μL, 色谱分析时间3.5 min;采用电喷雾离子源,正离子扫描,多反应监测模式进行测定。 结果: 6种分析物线性范围均满足检测需求,线性系数均≥0.997,各浓度的批内与批间RSD≤10.3%,回收率为98.6%~111.6%,方法准确度为94.3%~109.5%。此外,收集并检测6名同时接受伊马替尼和伏立康唑治疗的白血病患者,血药浓度范围分别为0.418~2.697 μg·mL^-1和0.312~8.725 μg·mL^-1,个体间差异较大。 结论: 本实验成功建立同时检测3种一线络氨酸酶抑制剂和3种一线三唑类抗真菌药物血药浓度的方法,可应用于临床进行治疗药物监测。
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  基于Cocktail探针药物法研究木犀草素在大鼠体内对CYP450酶活性影响^*

  宋可心, 衣洁, 高琳, 任纪平, 李倩

  药物分析杂志. 2022, 42(2): 279-286. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2022.02.12

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  目的: 应用Cocktail探针药物法评价木犀草素对大鼠体内CYP450酶亚型活性的影响。方法: 首先将大鼠随机分为空白组和木犀草素组,2组分别灌胃羧甲基纤维素钠(2.0 mL·kg^-1)和木犀草素(30.0 mg·kg^-1)1 d,并于第7 d腹腔注射混合探针药物溶液(含10.0 mg·kg^-1的非那西汀和睾酮,2.5 mg·kg^-1的甲苯磺丁脲)。之后在不同时间点对大鼠进行眼眶取血,血浆样本经异丙醇沉淀后进入液质测定。UHPLC-MS/MS色谱部分采用ZORBAX SB-C₁₈(2.1 mm×30 mm,3.5 μm)色谱柱进行分离,以乙腈-0.1%甲酸水为流动相,梯度洗脱;质谱部分使用电喷雾离子源(ESI),分别在正、负离子条件下采用MRM模式下进行监测,将所采集数据输入DAS软件计算药动学参数。另外,采用Western blot法观察木犀草素对CYP450蛋白表达的影响,对体内结果做进一步验证。结果: 非那西汀、睾酮、甲苯磺丁脲分别在2.0~2 000.0、0.3~300.0及1.7~1 700.0 ng·mL^-1浓度范围内线性关系良好,定量限分别为2.0、0.3、1.7 ng·mL^-1。所建立UHPLC-MS/MS法专属性良好,各待测药物准确度在96.9%~108.0%范围内,日间和日内精密度RSD均小于8.9%,提取回收率、基质效应以及稳定性考察项目均符合测定要求。药动学结果显示,与空白组相比,木犀草素组非那西汀AUC值明显降低,甲苯磺丁脲和睾酮AUC值均呈现升高趋势,但睾酮变化非常轻微。Western blot结果表明,木犀草素组大鼠CYP1A2蛋白表达增加,而CYP2C9和CYP3A4蛋白表达减少。结论: 根据FDA CYP450酶诱导剂和抑制剂标准,木犀草素可作为CYP1A2的中度诱导剂,CYP2C9的弱抑制剂,但对CYP3A4无显著影响。
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  α-玉柏碱减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤^*

  刘雨露, 朱子贵, 张建新, 赵红, 姚平波

  药物分析杂志. 2022, 42(2): 287-293. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2022.02.13

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  目的: 探索石松的活性成分α-玉柏碱通过抗炎抗氧化作用对心肌缺血再灌注(MI/R)损伤的保护作用。方法: Wistar大鼠灌胃1 mL无菌水或含有2.5 mg·kg^-1或5 mg·kg^-1 α-玉柏碱的水,持续1周,雷米普利1 mg·kg^-1作为阳性对照。结扎心脏左前降支30 min,再灌注3 h。超声检测射血分数EF(%)、短轴缩短分数FS(%)、左心室收缩压LVSP(mmHg)、左心室舒张末期压力LVEDP(mmHg)。伊文思蓝染指示心梗体积。试剂盒检测血清或心肌组织中总还原型谷胱甘肽(GSH)、乳酸脱氢酶(LDH)、天冬氨酸转氨酶(AST)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的水平。ELISA测定血清肌酸激酶-同工酶 (CK-Mb)、肌钙蛋白T (cTnT)、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白介素(IL)-1β、IL-6和前列腺素E 2(PGE 2)。Western blotting检测环氧合酶2(COX-2)、金属基质蛋白酶(MMP)-2和MMP-9的蛋白表达。结果: 与假手术对照组比,MI/R组大鼠EF、FS和LVSP显著下降,而LVEDP明显升高(P<0.05)。α-玉柏碱能有效逆转这些超声心动指标(P<0.05)。α-玉柏碱还有效减少了MI/R大鼠的梗死面积和血清CK-Mb、cTnT、AST和LDH(P<0.05)。α-玉柏碱降低了MI/R升高的血清MDA、升高了降低的血清SOD和心肌GSH,减轻了氧化应激(P<0.05)。MI/R升高的血清炎症标志物TNF-α、IL-1β、IL-6、PEG₂和心肌炎症标志物Cox-2均在5 mg·kg^-1·d^-1 α-玉柏碱处理下显著降低(P<0.05)。MI/R升高的MMP-2和MMP-9也被α-玉柏碱降低(P<0.05)。结论: α-玉柏碱能有效减轻氧化应激和炎症,改善MI/R导致的心肌损伤。对MMP-2和MMP-9的抑制可能是其作用机制。
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  LncRNA FAS-AS1通过抑制过度的自噬促进胶质瘤细胞对顺铂的敏感性^*

  刘晨, 姚俊朝, 张祥

  药物分析杂志. 2022, 42(2): 294-301. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2022.02.14

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  目的: 探讨长链非编码RNA(LncRNA)FAS-AS1对胶质瘤细胞顺铂(Cis)耐药的影响及相关分子机制。方法: 应用RT-PCR检测U87和U251细胞以及U87/Cis和U251/Cis细胞间差异表达LncRNA FAS-AS1;MTT法、CCK-8和流式细胞法检测过表达LncRNA FAS-AS1后的U87/Cis和U251/Cis细胞在一定浓度顺铂中的增殖能力、活力以及凋亡水平;免疫荧光分析顺铂作用下U87/Cis和U251/Cis细胞的自噬能力,并通过Western blot和RT-PCR进一步加以验证自噬及凋亡相关蛋白;随后进一步分析过表达LncRNA FAS-AS1后的U87/Cis和U251/Cis细胞其自噬能力的变化。结果: LncRNA FAS-AS1在U87/Cis和U251/Cis细胞系中显著低表达;在U87/Cis和U251/Cis细胞系中过表达LncRNA FAS-AS1,细胞的增殖能力无明显变化,细胞活力减弱,细胞凋亡水平显著增加;随着顺铂浓度的增加,U87/Cis及U251/Cis细胞的自噬及凋亡相关蛋白表达水平逐渐增加;过表达LncRNA FAS-AS1后U87/Cis及U251/Cis细胞的自噬相关蛋白表达水平降低。结论: LncRNA FAS-AS1通过抑制过度的自噬促进胶质瘤细胞对顺铂的敏感性。
安全监测
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  固相萃取辅助UPLC-MS/MS同时测定肾康宁胶囊中乌头类生物碱的含量^*

  刘世欣, 陈良妮, 程雪梅, 季莉莉, 李小锋, 刘胜, 康兴东, 尉小慧, 王长虹

  药物分析杂志. 2022, 42(2): 302-311. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2022.02.15

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  目的: 建立肾康宁胶囊中乌头类生物碱的含量测定方法。方法: 采用 Waters ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8 μm),以0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相,梯度洗脱,流速0.3 mL·min^-1,柱温40 ℃;质谱采用电喷雾离子化源(ESI),正离子模式下选择多反应监测(MRM)模式检测,建立同时测定肾康宁胶囊中乌头碱、新乌头碱、次乌头碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、乌头原碱和新乌头原碱8个生物碱含量的固相萃取(SPE)辅助UPLC-MS/MS分析方法。结果: 乌头碱、新乌头碱、次乌头碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、乌头原碱、新乌头原碱分别在0.31~99.80、0.78~99.80、0.31~75.15、30.31~485.00、309.38~3 712.50、61.88~742.50、7.75~248.00、61.25~1 960.00 ng·mL^-1的质量浓度范围内线性关系良好,精密度、重复性和稳定性的RSD均小于5%,加样回收率在80.6％~109.0％之间。12批胶囊中次乌头碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、乌头原碱和新乌头原碱含量范围分别为0.002～0.041、1.163～1.758、9.300～16.446、2.070～3.112、0.166～0.319、1.243～3.067 μg·粒^-1。结论: 建立的方法稳定可靠,可用于肾康宁胶囊的质量控制。
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  HPLC-MS/MS法同时测定吲哚布芬中4个基因毒性杂质

  石小娜, 侯玲君, 赵龙山

  药物分析杂志. 2022, 42(2): 312-319. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2022.02.16

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  目的: 建立HPLC-MS/MS法测定吲哚布芬中的4个基因毒性杂质:2-(4-硝基苯基)丁酸、2-(4-氨基苯基)丁酸、2-(3-氨基苯基)丁酸、2-(2-氨基苯基)丁酸。方法: 采用Agilent Eclipse Plus C₁₈(4.6 mm×100 mm,3.5 μm)色谱柱,0.1%甲酸-5 mmol·L^-1甲酸铵为流动相A,0.1%甲酸-甲醇为流动相B,梯度洗脱,流速为0.55 mL·min^-1,进样体积为10.0 μL,柱温35 ℃;采用电子喷雾源ESI,负离子模式采集分析,多反应监测(MRM),离子源温度为550 ℃。结果: 4个基因毒性杂质的质量浓度在31.8~211.7、30.6~204.0、30.0~199.8、29.9 ~199.2 ng·mL^-1范围内,r均大于0.990 0,峰面积与浓度线性关系良好;检测下限和定量下限的范围分别为1.06~10.2 ng·mL^-1和12 ~20.4 ng·mL^-1;平均加样回收率为94.2%~108.4%、94.7%~106.6%、96.4%~108.9%、83.2%~100.3%(n=3),RSD均不超过7.6%;重复性为3.2%~7.6%(n=6);中间精密度为3.4%~8.2%(n=12);对照品溶液和样品加标溶液在8 h内稳定性良好。实际样品中4个基因毒性杂质均未检出。结论: 该法简便、快速,灵敏高,专属性好,适用于吲哚布芬中基因毒性杂质的测定。
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  高效液相色谱-三重四级杆质谱快速筛查及定量检测改善睡眠类保健品和中成药中的22个精神类化合物

  席彰, 周亚兰, 康靖, 刘亚洲

  药物分析杂志. 2022, 42(2): 320-328. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2022.02.17

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  目的: 建立高效液相色谱-三重四级杆质谱(HPLC-MS/MS)法快速筛查及定量分析改善睡眠类保健品及中成药中22个精神类化合物。方法: 采用ZORBAX Eclipse Plus-C₁₈ (2.1 mm×50 mm,1.8 μm)色谱柱进行分离,以乙腈-1 mmol·L^-1乙酸铵(含0.1%甲酸)为流动相,梯度洗脱,流速为0.3 mL·min^-1,电喷雾离子源,用多反应监测结合正离子扫描分析。通过比较样品与对照品的色谱保留时间、相对离子丰度比,进行定性分析,并对阳性样品进行定量分析。结果: 22个精神类化合物(阿普唑仑、地西泮、米安色林、帕罗西汀、氯丙嗪等)在0.1~400 ng·mL^-1浓度范围呈良好的线性关系,线性相关系数大于0.99,样品回收率在79.1%~109.2%,RSD在1.2%~9.6%,检测下限范围在0.05~0.5 ng·mL^-1。本方法可在13 min内同时完成对保健品和中成药中的22个精神类化合物的分离和筛查。检测12批次样品,结果均未检出22个精神类化合物。结论: 该方法操作简单,灵敏度高,准确可靠,可用于常见精神类化合物的快速检测。
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  远红外贴中16种非法添加药物的识别与含量测定^*

  杜福映, 张花美, 王晨晓, 吴长岩, 张丽莹, 万敏, 沈永

  药物分析杂志. 2022, 42(2): 329-334. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2022.02.18

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  目的: 建立一种快速、准确测定远红外贴中16个非法添加药物(10种非甾体类抗炎药和6种糖皮质激素药)的方法。方法: 样品经冷凝回流后,用高效液相色谱法(HPLC)及高分辨液质联用法(UPLC-HRMS/MS)对非法添加药物进行定性分析,并使用高效液相色谱法(HPLC)进行含量测定。结果: 16个非法添加药物在相应测定范围内线性关系良好,相关系数均大于0.999;在3个浓度加标水平下,回收率为81.1%~112.7%;RSD为0.010%~2.8%;各药物检测下限为0.05~1.5 μg·mL^-1;定量下限为0.2~5 μg·mL^-1;35批样品中9批次检出双氯芬酸钠成分,含量为0.56~37.11 mg·贴^-1。结论: 该方法操作简便,专属性强,灵敏度、准确度高,适用于远红外贴及同类产品中非法添加药物的检测。
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  维吉尼亚雪松精油的GC-MS分析及体外药理活性研究^*

  席祖卫, 王雨佳, 陈金虎, 王梦如, 李婷, 刘衡

  药物分析杂志. 2022, 42(2): 335-341. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2022.02.19

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  目的: 对市售维吉尼雪松精油主要挥发性成分分析,并探究其体外药理活性。方法: 采用气相-质谱联用法,色谱柱为Agilent HP-5MS(250 μm×30 m,0.25 μm),载气为高纯氦气,进样量0.2 μL;分流比10∶1;柱流量 1. 0 mL·min^-1,进样口温度220 ℃。离子源为EI,离子源温度230 ℃,电离能量70 eV,质量扫描范围m/z 12～550,溶剂延迟 3 min;采用面积归一化法测定各组分的相对含量;牛津杯法测定抑菌圈的大小,评价其对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌及白色念珠菌的体外抑菌活性;通过建立脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)刺激RAW264.7细胞系炎症模型,探究其对巨噬细胞相关炎症因子TNF-α表达量的影响;噻唑蓝(Methyl Thiazolyl Tetrazolium, MTT)法测定其对HT-29肿瘤细胞体外细胞毒活性。结果: 从维吉尼亚雪松精油样品中共检测出21个成分,占总峰面积的95.67%,主要成分为雪松醇(26.58%)、α-雪松烯(24.05%)、顺罗汉柏烯(23.46%)等萜烯类和萜醇类化合物;维吉尼亚雪松精油可显著提高TNF-α的表达量,呈成剂量依赖性抑制HT-29细胞的增殖,但对3个菌敏感度均不高。结论: 维吉尼亚雪松精油成分丰富,具有一定的抗菌活性,同时能促进LPS诱导RAW264.7细胞向M1型极化的作用,并有较好的抗HT-29肿瘤细胞增殖作用。
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  医用胶原充填剂的细菌内毒素检测

  陆珠儿, 陈丹丹, 蔡彤

  药物分析杂志. 2022, 42(2): 342-345. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2022.02.20

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  目的: 建立医用胶原充填剂的细菌内毒素检测方法。方法: 分别采用ISO10993.12的样品制备方法(浸提液法)和盐酸溶解法,对医用胶原充填剂进行前处理,然后采用2020年版《中华人民共和国药典》(简称《中国药典》)四部通用技术要求(通则)1143细菌内毒素检查法中的动态浊度法进行细菌内毒素含量的检测。结果: 浸提液法制备的供试液细菌内毒素含量(0.12 EU·mL^-1),远低于使用0.01 mol·L^-1盐酸溶解法制备的供试液细菌内毒素含量(9.991 EU·mL^-1)。结论: 不同的样品制备方法会影响检测医用胶原充填剂中细菌内毒素含量的准确性。故采用使用0.01 mol·L^-1盐酸溶解法制备医用胶原充填剂的供试液,这样可充分地把供试品中的细菌内毒素释放出来,之后再进行细菌内毒素检测较为合适。
标准研讨
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  基于大麻二酚及△⁹-四氢大麻酚含量的化妆品质量研究

  陈丹丹, 彭兴盛, 郑荣

  药物分析杂志. 2022, 42(2): 346-351. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2022.02.21

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  目的: 研究建立化妆品中大麻二酚(CBD)及△⁹-四氢大麻酚(△⁹-THC)的检测方法,以CBD的含量作为功效参考指标,△⁹-THC的含量作为安全性评价指标,评价含大麻叶提取物成分化妆品的质量。方法: 以Agilent ZORBAX SB-C₁₈(4.6 mm×250 mm, 5 μm)为色谱柱,流动相为乙腈-水,梯度洗脱,流速1.0 mL·min^-1,波长220 nm,建立HPLC同时测定CBD及△⁹- THC含量的方法。采用该方法对20批化妆品中CBD及△⁹- THC含量进行测定,并在样品放置15、35、80 d后,分别对其中CBD含量进行监测。结果: CBD线性范围为0.2~100 μg·mL^-1、△⁹-THC线性范围为0.02~10 μg·mL^-1,精密度、加样回收率结果均符合要求。20批测定样品中,仅12批样品检出CBD,含量范围为0.002 6%~1.3%,含量在80 d内无明显变化;1批样品检出△⁹-THC,含量为0.000 2%。结论: 该方法快速、简便,适用于化妆品中CBD与△⁹-THC的测定,可为相关化妆品的产品开发及质量评估提供依据。部分样品存在与配方标示不符及△⁹-THC风险成分检出的情况,应加强对相关产品的市场监管。
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  进口药材司卡摩尼亚脂质量标准提高研究^*

  苏来曼·哈力克, 白宇, 艾力克木·吐尔逊

  药物分析杂志. 2022, 42(2): 352-360. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2022.02.22

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  目的: 提高进口药材司卡摩尼亚脂的质量标准。方法: 收集23批司卡摩尼亚脂药材,按照《中华人民共和国药典》方法进行系统的水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物、重金属及有害元素和农药残留分析测定;分别采用UV、TLC进行定性鉴别研究;采用HPLC特征图谱研究,色谱柱为Agilent ODS-AQ(4.6 mm×150 mm,5 μm),流动相为甲醇(A)-0.4%磷酸水溶液(B),梯度洗脱(0～5 min,30%A;5～10 min,30%A→40%A;10～15 min,40%A;15～20 min,40%A→55%A;20～30 min,55%A→70%A;30～32 min,70%A→95%A;32～45 min,90%A;45～55 min,100%A;55～60 min,100%A→30%A;60～70 min,30%A),流速为1.0 mL·min^-1,检测波长为254 nm,柱温为35 ℃。建立HPLC指纹图谱,以4号峰为参照,采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)》进行相似度评价。结果: 司卡摩尼亚脂药材的性状鉴别专属;UV光谱鉴别具有特征性,薄层色谱鉴别色谱清晰、简便易行;检查项目确定了合理限度:水分≤3.5%,总灰分≤1.5%,95%乙醇浸出物≥95.0%,挥发性乙醚浸出物≤3.0%,重金属及有害元素、农药残留均未检出;HPLC特征指纹图谱确定5个色谱峰为共有指纹峰,其中选定一个为参照峰(S),结果为不同批次样品中共有峰相似度大于0.99,相对保留时间的RSD在0.32%～0.45%,表明不同批次样品共有成分的重现性好与伪品容易区分。结论: 实验研究结果可作为司卡摩尼亚脂药材质量控制和评价标准。