2022年, 第42卷, 第8期　
刊出日期：2022-08-31

  

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民族药研究专栏
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  基于1994—2021年专利分析民族药的发展及思考^*

  戴胜云, 刘杰, 乔菲, 连超杰, 过立农, 郑健, 马双成

  药物分析杂志. 2022, 42(8): 1290-1305. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2022.08.01

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  以“民族药”为检索词,检索1994—2021年在中国知网专利数据库中收载的专利文献,从专利角度对我国民族药的发展现状进行分析。通过对专利的地区分布、申请人类型、技术领域、不同民族药专利涉及的药材、成方制剂和药物组合等方面进行分析,结果显示我国民族药专利申请经历了1994年至2003年的萌芽阶段,2003年至2018年的快速发展阶段,2019年至今的稳步发展阶段,反映了在国家对民族药的重视和支持下,通过科研机构和学者的努力,部分民族药工作已取得了一定的成就。民族药专利申请地区、专利申请人和研究机构呈现地域性,不同民族药的研究侧重点不同,部分民族药实现了产学研全面发展,但还有大量民族药等待开发,民族药质量标准提高,民族药正本清原和民族药材资源保护与可持续利用等问题都是目前民族药发展亟待解决的关键问题。
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  固相萃取结合薄层色谱法鉴别滋肾育胎丸中的何首乌、续断、巴戟天和白术

  唐哲, 戴胜云, 王蔚, 宁娜, 雷婷, 何子昕, 乔菲, 郑健, 马双成

  药物分析杂志. 2022, 42(8): 1306-1311. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2022.08.02

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  目的:结合固相萃取法建立滋肾育胎丸中的何首乌、续断、巴戟天和白术的薄层色谱鉴别方法。方法:采用C18固相萃取法,将供试品甲醇超声提取、蒸干、复溶后上样至活化后的固相小柱中,先后用水和不同浓度甲醇洗脱,洗脱速度为1 mL·min^-1。收集水洗脱液,蒸干复溶作为巴戟天鉴别供试品溶液,以三氯甲烷-甲醇-水-冰醋酸(7:3:1:1)为展开剂;收集60%甲醇水洗脱液,蒸干复溶作为续断鉴别供试品溶液,以正丁醇-醋酸-水(4:1:5)的上层溶液为展开剂;收集80%甲醇水洗脱液,蒸干复溶作为何首乌鉴别供试品溶液,以环己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸(10:1:1:0.1)为展开剂;收集100%甲醇洗脱液,蒸干复溶作为白术鉴别供试品溶液,以正己烷-乙酸乙酯-甲酸(40:10:0.5)为展开剂。结果:供试品溶液在与对照药材或对照品相应的位置上,显示相同颜色的荧光斑点,阴性样品无干扰。结论:固相萃取可以有效的将滋肾育胎丸中含量低专属性成分进行富集分析,所建立的方法具有操作简单、重复性好等特点,可用作滋肾育胎丸的薄层色谱鉴别。
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  基质辅助激光解吸质谱成像可视化分析巴戟天炮制品中化学成分的空间分布

  乔菲, 戴胜云, 连超杰, 刘杰, 董静, 郑健, 马双成

  药物分析杂志. 2022, 42(8): 1312-1318. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2022.08.03

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  目的:采用质谱成像显微镜可视化分析巴戟天炮制品中环烯醚萜和寡糖的空间分布情况。方法:使用成像质谱显微镜对巴戟天不同炮制品进行空间分布数据采集,通过UPLC测定巴戟天不同炮制品中环烯醚萜的含量,判断不同炮制方法对环烯醚萜的影响,并验证质谱成像显微镜结果的准确性。结果:质谱成像显微镜可以实现环烯醚萜和寡糖的空间分布的可视化分析,结果与UPLC法含量测定结果基本一致。结论:质谱成像显微镜可运用于巴戟天炮制过程质量研究,为中药炮制研究提供一种新思路。
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  广西民族药材小叶金花草质量标准提升研究^*

  林雀跃, 戴胜云, 谢培德, 滕爱君, 马双成, 李丽莉, 郑健

  药物分析杂志. 2022, 42(8): 1319-1327. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2022.08.04

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  目的:完善广西民族药材小叶金花草质量标准,提高其质量控制水平。方法:对广西境内小叶金花草进行资源调查及实地采样,收集17批次小叶金花草药材及5批混伪品大叶金花草药材,结合显微鉴别(包括根茎横切面和粉末显微)和薄层色谱鉴别对二者进行判别;参照2020年版《中华人民共和国药典》通则,对小叶金花草药材的水分、总灰分、酸不溶灰分和浸出物进行测定;建立小叶金花草中菊苣酸的HPLC测定法,采用CAPCELLPAK MGⅡC₁₈色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈-0.3%磷酸水溶液(19:81),流速为1.0 mL·min^-1,检测波长为330 nm,柱温为25 ℃。结果:与现行质量标准2018年版《广西壮族自治区壮药质量标准》第三卷相比,新增了根茎横切面显微鉴别,修订了薄层色谱鉴别方法,斑点更清晰,专属性更强;建立了菊苣酸的含量测定方法,菊苣酸质量浓度在2.73~273 μg·mL^-1范围内线性关系良好(r=1.000),平均回收率为102.8%(RSD为1.1%,n=6),17批次样品菊苣酸的含量范围为0.12%~2.23%。结论:本文建立了完整的显微鉴别、薄层色谱鉴别、检查及含量测定方法,完善了小叶金花草药材的质量标准,为合理评价小叶金花草质量提供数据支撑和科学依据。
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  藏成药石榴健胃散基因组DNA提取方法的比较及优化^*

  房文亮, 刘杰, 唐哲, 戴胜云, 连超杰, 乔菲, 过立农, 马双成, 郑健

  药物分析杂志. 2022, 42(8): 1328-1334. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2022.08.05

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  目的:比较不同试剂盒,不同方法对藏成药石榴健胃散基因组DNA的提取效果。方法:针对磁珠法与吸附柱法2类方法、4种不同市售试剂盒,延长裂解时间后,按照试剂盒标准操作方法,对藏成药石榴健胃散的基因组DNA进行提取,并通过Nanodrop one、Qubit、凝胶电泳检测综合比较各种方法对其基因组DNA提取的效果。结果:通过4种市售试剂盒、2类方法对藏成药基因组DNA的提取,结果显示吸附柱法即试剂盒3和试剂盒4提取的基因组DNA浓度、DNA片段完整性、PCR扩增效果方面优于磁珠法即试剂盒1和试剂盒2,且经济性更好。结论:初步探究了主流的核酸提取方法对藏成药石榴健胃散基因组DNA的提取效果,证明了试剂盒标准方法下,吸附柱法具有较好的基因组DNA提取效果,为后续进一步的提取方法的优化奠定了前期基础。
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  基于特异性引物的藏成药石榴健胃散HRM鉴别方法研究^*

  刘杰, 房文亮, 唐哲, 乔菲, 连超杰, 戴胜云, 过立农, 郑健, 马双成

  药物分析杂志. 2022, 42(8): 1335-1344. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2022.08.06

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  目的:基于特异性引物设计和高分辨率熔解曲线(HRM)技术建立藏成药石榴健胃散中不同药味的HRM鉴别方法。方法:以原料药相同或相近物种的ITS2序列作为模板,按照引物设计原则,利用Primer Primer 6.0软件进行引物设计;利用琼脂糖凝胶电泳方法,筛选对目标原料药扩增效果较好的特异性引物;利用HRM方法对琼脂糖凝胶电泳检测筛选出的特异性引物进行验证,比较自制石榴健胃散成药与市售石榴健胃散检测结果的一致性;优化HRM实验的扩增循环数,并确定各原料药的最佳特异性引物,建立较为专属性的特异性HRM方法。结果:实验设计了52对特异性引物,通过琼脂糖凝胶电泳检测,筛选出了具有较好扩增特异性的11对特异性引物;采用HRM方法对琼脂糖凝胶电泳检测结果筛选出的11对特异性引物进行验证,其结果的特异性与琼脂糖凝胶电泳检测结果一致,且以11对特异性引物检测自制石榴健胃散成药与市售石榴健胃散的结果一致;确定五味原料药中最佳特异性引物,石榴子为SLZ-7A7S(32 cycles),红花为HH-2A2S(25 cycles),肉桂为RGCA-1A1S(40 cycles),豆蔻为DKAC-1A1S(27 cycles),荜茇为BBPBN-1A1S(35 cycles)。结论:最终确定了石榴健胃散中各个原料药HRM检测方法的最佳扩增引物及最适扩增循环数,实现了对石榴健胃散中各个原料药较为专属性的鉴别,为原粉入药的中成药的分子生物学质量控制提供了研究思路及参考依据。
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  基于响应面法优化紫草药材的基因组DNA提取条件^*

  刘杰, 房文亮, 唐哲, 连超杰, 戴胜云, 过立农, 郑健, 乔菲, 马双成, 李昀铮

  药物分析杂志. 2022, 42(8): 1345-1353. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2022.08.07

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  目的:基于响应面法对紫草药材基因组DNA的提取条件进行优化。方法:考察植物基因组DNA提取试剂盒中不同操作步骤反应时间对紫草药材基因组DNA提取效率与质量的影响;基于响应面法对紫草药材基因组DNA提取过程中取样量、乙醇处理、裂解时间3个条件进行优化;对优化条件进行验证;通过调整PCR扩增体系中的引物浓度,而对紫草药材基因组DNA的PCR扩增体系进行优化。结果:通过考察植物基因组DNA提取试剂盒中不同操作步骤反应时间对紫草药材基因组DNA提取效率与质量的影响,发现不同反应时间的影响不明显;基于响应面法,确定紫草药材基因组DNA的最佳提取条件为取样量100 mg、裂解过夜(12~15 h)、以100%乙醇浸泡样品24 h进行前处理;通过对紫草市场样品100批进行验证,PCR扩增成功率为89%;确定紫草药材基因组DNA的PCR体系中最佳引物浓度为0.10 μmol·L^-1,当所得基因组DNA仍不能正常扩增时,可将DNA稀释10倍。结论:通过对紫草药材的基因组DNA提取条件和PCR扩增条件进行优化,大大提高了紫草药材基因组DNA的提取与扩增效率,为紫草药材的分子生物学鉴定提供支撑,同时也为其他中药民族药品种的基因组DNA提取条件优化提供了可以参考的依据。
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  基于DNA条形码和HRM技术建立紫草药材的RFLP-HRM鉴别方法^*

  刘杰, 房文亮, 唐哲, 连超杰, 戴胜云, 过立农, 郑健, 乔菲, 马双成, 李昀铮

  药物分析杂志. 2022, 42(8): 1354-1362. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2022.08.08

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  目的:基于DNA条形码技术和高分辨率熔解曲线(HRM)技术鉴别紫草市场样品的真伪并建立紫草药材的RFLP-HRM鉴别方法。方法:通过聚合酶链式反应(PCR)对紫草药材的ITS2序列进行扩增;利用MEGA 6.06软件对紫草药材的ITS2序列进行NJ树聚类分析和遗传距离分析;对市场中紫草非药典品进行基原确证;针对紫草药材的ITS2序列利用Primer Premier 5软件进行引物设计;对经设计、合成的引物通过HRM实验进行筛选;建立紫草药材的RFLP-HRM鉴定方法。结果:通过对紫草药材的ITS2序列进行NJ树聚类分析和遗传距离分析,可以有效区分新疆紫草、疏花软紫草、黄花软紫草及市场上非药典来源的紫草药材(紫草非药典品);经过Primer Premier 5软件进行引物设计共选出4对引物进行合成;通过HRM实验筛选出引物Zcf-1为最佳实验引物;确立了有效鉴别紫草市场药材的RFLP-HRM方法。结论:通过DNA条形码和HRM技术均能有效鉴别紫草市场药材真伪,且结果一致,起到互相验证的作用,建立了紫草市场药材的RFLP-HRM鉴定方法,为紫草及其他中药民族药品种的快速鉴定技术提供了可以参考的依据。
成分分析
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  HPLC法同时测定金蝉止痒颗粒中9个成分的含量^*

  何艳, 袁志鹰, 夏新斌

  药物分析杂志. 2022, 42(8): 1363-1370. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2022.08.09

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  目的:建立高效液相色谱(HPLC)同时测定金蝉止痒颗粒中栀子苷、连翘酯苷A、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、黄芩苷、盐酸小檗碱、汉黄芩苷和黄芩素含量的方法。方法:该样品采用70%甲醇水超声(功率500 W,频率40 kHz)提取,分析采用Waters Atlantis T3-C₁₈色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸(含0.01 mol·L^-1磷酸二氢钾),梯度洗脱,流速为1.0 mL·min^-1,检测波长为240 nm(检测栀子苷)、328 nm(检测连翘酯苷A、异绿原酸B、异绿原酸A和异绿原酸C)、270 nm(检测黄芩苷、盐酸小檗碱、汉黄芩苷和黄芩素),柱温为30 ℃,进样量为10 μL。结果:栀子苷、连翘酯苷A、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、黄芩苷、盐酸小檗碱、汉黄芩苷和黄芩素9个成分的线性范围和相关系数分别为2.330~23.30 μg·mL^-1(r=0.999 8)、2.494~24.94 μg·mL^-1(r=0.999 9)、1.064~10.64 μg·mL^-1(r=0.999 7)、0.905 1~9.051 μg·mL^-1(r=0.999 7)、1.038~10.38 μg·mL^-1(r=0.999 8)、6.792~67.92 μg·mL^-1(r=0.999 9)、5.822~58.22 μg·mL^-1(r= 0.999 7)、1.193~11.93μg·mL^-1(r=0.999 5)和0.561 6~5.616 μg·mL^-1(r=0.999 8),平均回收率(n=6)分别为96.9%(RSD=0.83%)、98.6%(RSD=1.3%)、101.6%(RSD=2.8%)、103.2%(RSD=2.6%)、103.6%(RSD=2.7%)、102.8%(RSD=1.1%)、98.2%(RSD=2.0%)、101.6%(RSD=1.8%)和98.8%(RSD=2.4%)。6批样品中上述9个成分含量范围依次分别为0.601 7~0.880 2、0.272 3~0.480 0、0.144 5~0.223 5、0.055 49~0.093 53、0.121 4~0.191 3、 0.638 2~1.697、0.930 9~1.657、0.171 7~0.359 8、0.029 65~0.089 54 mg·g^-1。结论:本方法操作简便,重复性好,可用于金蝉止痒颗粒的质量控制。
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  蛇床子饮片HPLC指纹图谱及7个香豆素类成分含量测定^*

  贾玉倩, 王晶晶, 袁诗农, 侯芳洁, 刘钊, 段绪红, 李春花

  药物分析杂志. 2022, 42(8): 1371-1380. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2022.08.10

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  目的:建立蛇床子饮片HPLC指纹图谱、多成分定量与化学计量学整合分析方法,评价不同来源蛇床子饮片的质量属性与差异。方法:采用Thermo C₁₈色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈-水,梯度洗脱,体积流量1.0 mL·min^-1,柱温30 ℃,进样量10 μL,检测波长220 nm。建立不同来源蛇床子饮片的HPLC指纹图谱,结合聚类分析(CA)、偏最小二乘-判别分析(PLS-DA)以及主成分分析(PCA)对25批蛇床子饮片进行质量评价。同时测定其中7个香豆素类成分花椒毒酚、香柑醇、花椒毒素、佛手柑内酯、欧前胡素、蛇床子素、异欧前胡素的含量。结果:指纹图谱及含量测定的方法学验证均良好,25批蛇床子饮片的HPLC指纹图谱相似度均大于0.90,选取了19个色谱峰作为指纹图谱共有峰,指认了其中5个色谱峰,通过聚类分析可按产地进行大体分类,PCA与CA结果基本一致,产自山东的S16、S17、S18号样品的质量较优;定量分析的上述7个香豆素类成分线性关系、精密度、稳定性、重复性、加样回收率试验结果均良好;上述7个成分的含量范围分别为0~1.221、0~0.724、7.925~28.784、15.330~39.118、59.173~156.662、74.108~189.682、0~4.141 mg·g^-1,其中花椒毒酚、香柑醇及异欧前胡素在部分批次中未检测到。结论:不同产地蛇床子饮片存在一定质量差异。基于统一色谱分析条件的指纹图谱定性与香豆素类成分定量分析操作方便、准确可靠,可为蛇床子饮片的质量标准建立及质量评价提供依据。
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  金叶败毒颗粒多指标成分含量测定及化学计量学分析

  苏若, 阮健, 李桂女

  药物分析杂志. 2022, 42(8): 1381-1390. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2022.08.11

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  目的:建立HPLC指纹图谱和多指标成分含量测定的方法,同时采用聚类分析(CA)及主成分分析(PCA)等化学计量学方法对其进行质量评价研究。方法:利用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012.A版) 建立金叶败毒颗粒HPLC 指纹图谱并进行相似度评价,共标定 22 个共有峰,通过对照品比对指认8个共有峰,分别为绿原酸、咖啡酸、木犀草苷、3,5-二-O-咖啡酰奎宁酸、4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸、槲皮素、菊苣酸、靛玉红,并同时测定 8 个共有峰的含量。基于8个成分含量测定结果,采用CA、PCA及正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)等化学计量学方法对15批金叶败毒颗粒进行质量评价。结果:15 批金叶败毒颗粒的HPLC指纹图谱相似度均＞0.98,8个共有峰含量测定结果分别为2.456~2.123、1.635~1.401、0.966~0.828、0.654~0.518、0.469~0.278、0.789~0.605、1.362~0.903、0.551~0.433 mg·g^-1,线性关系良好(r≥0.999 4),平均回收率分别为99.3%、98.3%、98.6%、98.9%、98.3%、98.6%、98.8%、99.1%,RSD均≤2.0%;该方法的精密度、稳定性、重复性均较好。CA和PCA结果表明15批样品按生产年份分为3类。通过OPLS-DA分析得出区分各类样品的强特征峰为菊苣酸、绿原酸和咖啡酸。结论:该方法准确可靠,可用于金叶败毒颗粒的质量控制和综合评价。
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  基于色度原理的薏苡仁炮制过程颜色与化学成分相关性分析^*

  杜伟锋, 汤璐璐, 朱伟豪, 孙贝贝, 吕悦, 吴杭莎, 葛卫红, 李昌煜

  药物分析杂志. 2022, 42(8): 1391-1399. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2022.08.12

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  目的:研究薏苡仁炮制过程中化学成分含量与颜色值的相关性,为薏苡仁炮制过程质量控制提供理论依据。方法:采用HPLC法对薏苡仁中9个化学成分(甘油三亚油酸酯、1,2-二油酰基-3-油酰反式甘油、1,2-二亚油酸-3-棕榈酸甘油酯、1,2-二油酸-3-亚油酸甘油酯、1-棕榈酸2-油酸-3-亚油酸甘油酯、1,3-二棕榈酸-2-亚油酸甘油酯、甘油三油酸酯、1,3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯和1,3-二棕榈酸-2-油酸甘油酯)含量进行测定;以薏苡仁炮制过程样品为研究对象,利用色差计采集色度值(L^*、a^*、b^*、E^*ab)。结果:3批生品到麸炒品的炮制过程中,色度值L^*、E^*ab数值越小,9个指标性成分含量越大;色度值a^*、b^*数值越大,9个指标性成分含量越大。在3批麸炒品到炮制太过的炮制过程中,色度值L^*、E^*ab与9个指标性成分含量均基本呈显著性正相关;色度值a^*与9个指标性成分含量均基本呈显著性负相关;色度值b^*与9个指标性成分含量在产地山东和安徽批次中均基本呈正相关,但均无显著性,产地四川批次中呈负相关,无显著性。结论:薏苡仁炮制过程含量与颜色具有一定的相关性,本实验为薏苡仁炮制过程质量控制提供了理论依据。
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  血清外泌体的提取方法与鉴定^*

  李雪洁, 付洁, 冀元凯, 宋海峰

  药物分析杂志. 2022, 42(8): 1400-1406. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2022.08.13

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  目的:建立阴选纯化富集(NSPE)法,从血清中高效、快速提取外泌体,并对外泌体进行鉴定。方法:利用低密度脂蛋白受体与低密度脂蛋白(LDL)结合的原理,去除人血清中大量LDL干扰,再通过外泌体表面磷脂分子的磷酸盐基团与二氧化锆(ZrO₂)双配位结合的原理富集外泌体。使用纳米流式细胞仪、透射电子显微镜来检测外泌体的粒径分布、颗粒浓度和形态特征,蛋白免疫印迹法检测外泌体表面标志性蛋白。使用基因本体论数据库和京都基因与基因组百科全书数据库对外泌体内部的microRNAs (miRNAs)进行基因通路分析。结果:该方法可在60 min从血清中有效提取外泌体。外泌体颗粒浓度为(2.94±0.3)×10¹⁰颗粒·mL^-1,粒径大小为(88.07±2.94) nm,并呈现标志性蛋白TSG101⁺、CD9⁺。外泌体内部miRNAs与免疫、代谢过程等相关。结论:建立的NSPE法可从血清中高效、快速地提取外泌体,用于健康监测和医学检验。
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  基于成分变化和体外降糖活性优选麦冬的“酸甘化阴”配伍比例和提取工艺研究^*

  席啸虎, 王世伟, 高建平

  药物分析杂志. 2022, 42(8): 1407-1417. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2022.08.14

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  目的:基于成分含量和体外降糖活性优选麦冬、山药、五味子配伍比例及提取工艺。方法:以配伍比例、甲醇浓度、溶剂倍数、提取时间为因素,以麦冬皂苷D(OPD)、麦冬皂苷D'(OPD'),麦冬甲基二氢高异黄酮A(MA)、麦冬甲基二氢高异黄酮B(MB),五味子醇甲(SA),尿囊素(DA)含量及体外HepG2细胞糖代谢改善、STZ损伤NS-1细胞修复等为指标,运用星点设计-效应面法结合G1-熵权法优化麦冬山药五味子配伍比例及提取工艺。结果:麦冬、山药、五味子体外降糖最佳配伍比例为麦冬20～28 g、山药5～15 g、五味子10～14 g;最佳提取工艺参数范围为甲醇浓度>85%、溶剂倍数>8、提取时间>90 min。其中,麦冬15 g、山药7 g、五味子6 g配伍后,用6倍91%甲醇提取60 min,所得提取物对HepG2细胞试验组上清葡萄糖消耗量较少,平均为2.13 mmol·L^-1;对INS-1细胞活力增殖较低,吸收度A平均为1.12。麦冬25 g、山药25 g、五味子6 g配伍后,用10倍91%甲醇提取120 min,所得提取物对HepG2细胞试验组上清葡萄糖含量消耗较多,平均为3.24 mmol·L^-1,对INS-1细胞活力增殖较高,吸收度A平均为1.97。配伍比例优化试验拟合方程为Y＝0.155+0.14X₁+0.013X₂+0.096X₃+0.12X₁X₁+0.10X₂X₂+0.082X₃X₃+0.054X₁X₂-0.15 X₁X₃-0.20X₂X₃(R-Sq=96.59%);提取工艺优化实验拟合方程为Y'＝0.63-0.010X'₁+0.11X'₂+0.12X'₃-0.099X'₁X'₁-0.075X'₂X'₂-0.069X'₃X'₃+0.054X'₁X'₂+0.12X'₁X'₃+0.011X'₂X'₃(R-Sq=94.86%)。在此条件下,分别进行3次验证试验,试验数据组间无明显差异。结论:基于网络药理学数据,从麦冬、山药、五味子主要降糖成分和体外降糖活性情况考虑,明确配伍比例及提取工艺范围,为麦冬的“酸甘化阴”配伍中降糖活性组分研究提供参考。麦冬、山药、五味子配伍可促进细胞对上清液中葡萄糖的摄取,同时,可不同程度增加STZ致INS-1细胞损伤增殖的活力,促进细胞修复。
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  基于随机森林预测西洋参药材的生长年限^*

  胡笑文, 严华, 魏锋, 马双成

  药物分析杂志. 2022, 42(8): 1418-1423. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2022.08.15

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  目的:采用随机森林算法,结合西洋参的理化性质,建立精准预测西洋参生长年限的机器学习模型,为市场上西洋参年限鉴定提供工具。方法:以前期收集的106批2~4年的西洋参样品为基础,采用西洋参醇溶性浸出物含量、人参皂苷Rb₁含量、西洋参长度等9种理化特征作为数据特征进行分析。按照随机分割方法将数据集分为训练集和验证集,使用随机森林算法进行建模,并以多元线性回归作为对照模型,分别进行训练和验证。对所有特征的重要性进行分析和筛选,采用筛选后的特征再次进行建模,评估模型的准确性。结果:初步建模结果表明,随机森林模型预测准确度优于多元线性回归,特征重要性分析表明,长度、重量、醇溶性浸出物含量、水溶性浸出物含量、人参皂苷Rb₁含量5种理化性质的重要性较高。使用筛选后的特征再次建模,得到改进后的随机森林模型。改进后的模型较原始模型准确性均有一定的提升:验证集上的均方误差为0.017,决定系数为0.950,可用于鉴别2~4年生西洋参。结论:基于我国规范化种植的不同生长年限的西洋参样品,建立了生长年限判定的数学统计分析方法。该方法快速、准确、可靠,可作为西洋参生长年限判断的依据,从而为西洋参质量评价提供了新的研究思路。
安全监测
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  盐酸二甲双胍制剂中N-亚硝胺基因毒性杂质的GC-MS/MS测定及N-亚硝基二甲胺的产生机制解析

  文松松, 牛冲, 刘琦, 张雷, 郭常川, 徐玉文, 王维剑

  药物分析杂志. 2022, 42(8): 1424-1432. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2022.08.16

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  目的:建立气相色谱-质谱联用法同时测定盐酸二甲双胍制剂中6种N-亚硝胺类基因毒性杂质:N-亚硝基二甲胺(NDMA)、N-亚硝基二乙胺(NDEA)、N-亚硝基乙基异丙胺(NEiPA)、N-亚硝基二异丙胺(NDiPA)、N-亚硝基二丙胺(NDPA)、N-亚硝基二丁胺(NDBA),并对缓释制剂中NDMA的产生机制进行探索。方法:采用聚乙二醇为固定相的毛细管柱(TG-WAX,30 m×0.25 mm×0.25 μm);起始温度40 ℃,维持0.5 min,20 ℃·min^-1升温至200 ℃,60 ℃·min^-1升温至240 ℃,维持5 min;进样口温度为250 ℃;载气为氦气;碰撞气为氩气;流速为1 mL·min^-1;进样体积为2 μL;质谱采用电子轰击离子化离子源(EI),选择反应监测(SRM)模式,实现了6种N-亚硝胺杂质的色谱分离及定量检测。结果:6种N-亚硝胺杂质在0.25~50 ng·mL^-1浓度范围内线性关系良好(r ＞0.999);检测限为0.01~0.07 ng·mL^-1,定量限为0.04~0.2 ng·mL^-1;平均加样回收率为97.4%~116.0%(n= 9);精密度、重复性、稳定性试验的RSD均<10%。139批盐酸二甲双胍制剂中仅检出NDMA,且超限样品全部来自缓释制剂,研究发现,原料药中残留的合成起始物二甲胺与缓释骨架材料羟丙甲纤维素中的亚硝酸盐是产生NDMA的主要因素;同时,辅料被氧化后产生的活性氧物质也能够氧化原料药中的二甲胺进而生成NDMA。结论:本方法灵敏度高,专属性强,结果准确且重现性好,适用于盐酸二甲双胍制剂中N-亚硝胺杂质的定量分析;此外,在盐酸二甲双胍缓释片制剂工艺过程中,须严格控制原料药以及辅料的质量,从而避免或减少杂质NDMA的产生。
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  HPLC加校正因子的主成分自身对照法测定呋塞米片中有关物质的含量^*

  胡泽锴, 罗嫄

  药物分析杂志. 2022, 42(8): 1433-1439. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2022.08.17

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  目的:建立测定呋塞米片中杂质B(4-氯-5-氨磺酰邻氨苯甲酸)、最大单个杂质和总杂质的方法。方法:采用高效液相色谱(HPLC)-加校正因子的主成分自身对照法进行测定。色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C₁₈(250 mm ×4.6 mm,5 μm),以水-四氢呋喃-冰醋酸(70:30:1)为流动相,流速为1.0 mL·min^-1,检测波长为272 nm,进样体积为20 μL,柱温为30 ℃。绘制呋塞米和杂质B的线性方程,以斜率计算杂质B相对于呋塞米的校正因子,用相对保留时间确定杂质B的位置,测定6家制药企业共15批呋塞米片中杂质B、最大单个杂质和总杂质的含量,并与杂质对照品外标法测得的结果进行比较。结果:杂质B的相对保留时间为0.31,检测质量浓度线性范围为0.041~12.19 μg·mL^-1,校正因子为1.06,检测限为0.40 ng,定量限为0.81 ng。比较采用校正因子的主成分自身对照法和外标法测得的结果,差值为±0.01%,表明2种方法无显著性差异。结论:经方法学验证,本法简便快速,可准确测定呋塞米片中有关物质的含量。
标准研讨
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  正心降脂片HPLC指纹图谱构建与共有峰高分辨质谱分析^*

  崔小敏, 何芳, 晋玥媞, 任慧, 胡静, 曲彤, 李宁, 陈志永

  药物分析杂志. 2022, 42(8): 1440-1447. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2022.08.18

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  目的:建立正心降脂片的HPLC指纹图谱,为该制剂的质量控制提供参考依据。方法: 采用Kromasil C₁₈色谱柱(4.6 mm × 150 mm, 3.5 μm)进行色谱分离,使用乙腈-0.1%甲酸流动相系统进行梯度洗脱,流速0.8 mL·min^-1,柱温25 ℃,检测波长254 nm。采用国家药典委员会颁发的中药色谱指纹图谱相似度评价软件(2012版)分析评价所构建的10批正心降脂片指纹图谱相似度。采用Q-Exactive轨道阱高分辨质谱技术和对照品比对鉴定共有峰成分。结果:构建了正心降脂片的指纹图谱共有模式并确认了其中的32个共有指纹峰,去除芦丁积分前后计算得到的10批正心降脂片指纹图谱与对照指纹图谱的相似度分别大于0.99和0.95。采用高分辨质谱技术共鉴定了26个共有峰,其中13个共有峰采用对照品比对进一步确认为3'-羟基葛根素、葛根素、3'-甲氧基葛根素、大豆苷、芦丁、木犀草素-7-O-葡萄糖醛酸苷、橙皮苷、大豆苷元、丹酚酸A、槲皮素、异鼠李素、橙黄决明素、大黄素。通过与组方中各单味药以及阴性样品的比对,对共有峰进行峰归属,32个共有峰涵盖了组方中全部8味药材。结论:本文所建立的正心降脂片HPLC指纹图谱方法简便、可靠,专属性强,结合共有峰的高分辨质谱定性分析,为正心降脂片的质量评价及药效物质基础研究奠定了基础。
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  基于HPLC指纹图谱及化学计量学筛选醋青皮质量标志物^*

  王杨, 杜晓蕾, 孙梓玮, 毕建云, 许丽丽, 李慧芬, 崔伟亮

  药物分析杂志. 2022, 42(8): 1448-1456. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2022.08.19

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  目的:分析比较青皮醋炙前后化学成分的变化,筛选醋青皮的质量标志物。方法:建立10批青皮醋炙前后HPLC指纹图谱,采用相似度分析、主成分分析和聚类分析等化学计量学方法,分析青皮醋炙前后化学成分差异。结果:生青皮标定了8个共有色谱峰,醋青皮标定了9个共有色谱峰,醋青皮色谱图中5号峰为新增共有色谱峰。化学计量学分析生青皮、醋青皮可以各自聚类,2种饮片的主要差异成分峰为 1号峰(辛弗林)和5号峰(未知成分)。结论:建立的指纹图谱能够系统地反映生青皮和醋青皮化学成分的差异,醋炙后成分(5号峰)可以作为区别青皮生、醋饮片的质量标志物,可为制定更加合理的醋青皮质量标准和研究青皮醋炙炮制原理提供科学依据。
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  铝佐剂疫苗《中国药典》铝含量测定不确定度评定

  李玉立, 邵天舒, 刘齐, 李想, 马一星, 李文东

  药物分析杂志. 2022, 42(8): 1457-1464. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2022.08.20

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  目的:建立2020年版《中国药典》通则3106《氢氧化铝(或磷酸铝)测定法》的不确定度评定模型,并以含铝佐剂疫苗品种进行示例计算。方法:根据JJP1059.1-2012《测量不确定度的评定与表示》等规范对影响测量结果的各个不确定度来源进行分析和评估,建立了不确定度评定模型,并示例计算合成不确定度。结果:通过测定方法的分量分析建立了不确定度评定模型,在结果判断中基于扩展不确定度可设置严格接受标准与宽松接受标准。示例计算结果表明,锌滴定液的标定浓度及消耗滴定液体积引入的不确定度是该示例品种不确定度的主要来源。结论:通过建立不确定度评定模型,可对采用该方法进行铝含量测定的所有铝佐剂疫苗及其他含铝制剂的不确定度进行评定。根据评定结果,可以更合理地进行结果判断并从多个维度有效降低不确定度,更针对性地指导检验工作,同时该模型对于容量分析法的不确定度评定具有很好的借鉴作用。
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  单剂量吸入混悬液剂量均一性抽样方案及评价分析^*

  晏菊姣, 李苗, 耿颖, 卢劲涛, 陈路, 魏宁漪

  药物分析杂志. 2022, 42(8): 1465-1471. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2022.08.21

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  目的:比较单剂量吸入混悬液剂量均一性不同测定方法得到的结果,提出合理的吸入液体制剂的剂量均一性检测及评价方法。方法:对不同企业生产的吸入混悬液采用完全转移和可提取体积法2种不同方式测定装量,并制备剂量均一性供试品溶液供HPLC测定含量,采用中国及欧美药典的不同评价方法对结果进行比较。结果:混悬液为非均一体系,以装量和完全转移的方法控制剂量均一性不能反映产品的最终质量的实际情况。单剂量吸入混悬液应以可提取体积法测定剂量均一性,并依据2020年版《中华人民共和国药典》四部通则0941“含量均匀度检查法”进行判定。此方法更加准确直观地反映了吸入混悬液剂量均一性的情况。结论:本文提出的方法更适合单剂量吸入混悬液剂量均一性的检测及评价。
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  基于指纹图谱结合对映异构体比值法对元胡止痛片进行质量分析^*

  刘娟汝, 耿昭, 苟琰, 邓晓鸿, 钟恋, 周娟, 郭力, 李敏, 李美凤, 尹磊

  药物分析杂志. 2022, 42(8): 1472-1481. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2022.08.22

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  目的:建立元胡止痛片的HPLC指纹图谱方法及延胡索乙素对映异构体拆分方法,评价元胡止痛片的质量现状,以提高元胡止痛系列制剂的质量可控性。方法:HPLC指纹图谱方法采用资生堂MG C₁₈色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),以乙腈-四氢呋喃(5:3)为流动相A,0.6%冰乙酸溶液(用三乙胺调节pH至6.0)为流动相B进行梯度洗脱,检测波长为220 nm,流速为1 mL·min^-1,柱温为30 ℃;基于中心切割-二维液相色谱法,建立元胡止痛片中延胡索乙素对映异构体的手性拆分方法,以左旋延胡索乙素(L-tetrahydropalmatine,L-THP)和右旋延胡索乙素(D-tetrahydropalmatine,D-THP)峰面积的比值为指标,比较不同样品之间的差异。结果:指纹图谱结果表明,可将39个生产企业的156批样品分为A类和B类,其中7家生产企业的25批样品对照指纹图谱相似度低于0.8,被归为B类样品,其指纹图谱表现为,除延胡索乙素消旋体(DL-tetrahydropalmatine,DL-THP)对应的指纹峰外,其他来自延胡索的特征峰均较小甚至缺失;中心切割-二维液相色谱的结果表明,DL-THP经中心切割阀转切到二维色谱中,被拆分成D-THP与L-THP,B类样品中D-THP与L-THP的峰面积比值小于1.0,A类样品则相反。结论:部分生产企业延胡索药材投料存在一定问题,可能通过违规添加化学药品(罗通定)的方式,以减少成本并符合《中华人民共和国药典》含量测定的规定,这可能是导致指纹图谱存在差异的主要原因。本研究建立的指纹图谱方法简便,准确,重复性好,能有效地反映元胡止痛片的质量;以延胡索乙素对映异构体的比值作为评价指标,分析和阐明了元胡止痛片的质量问题,可作为其质量控制的重要手段,同时为其他含有延胡索的处方制剂、或其他含有对映异构体化合物的中药材和中成药的质量控制提供新思路。