2023年, 第43卷, 第11期　
刊出日期：2023-11-30

  

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基因治疗制品质量评价技术与方法专栏（一）
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  重组腺相关病毒(rAAV)基因治疗制品质控检验技术重点考量^*

  秦玺, 于雷, 陶磊, 毕华, 王光裕, 史新昌, 周勇

  药物分析杂志. 2023, 43(11): 1813-1819. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2023.11.01

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  近些年,国内基因治疗行业迅速发展,创新制品不断涌现,如何对该类制品进行有效的质量控制成为业界十分关心的问题。本文借鉴基因治疗制品质量控制领域中相对成熟的、有效的、实用性被证明的方法,以重组腺相关病毒基因治疗制品为例,从检测项目与检测方法的选择、注意事项、质量标准的拟定等方面出发,阐述了其质量控制检验项目及相关技术要求。希望本文能为从业者开展该类制品的质量控制研究提供参考,并通过后续的交流讨论可达成一定共识,进而加速推动我国基因治疗行业的发展。
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  rAAV2-ND4注射液基因转录水平的生物学活性检测方法^*

  秦玺, 陈龙, 史新昌, 杨靖清, 潘燕群, 于雷, 毕华, 裴德宁, 安怡方, 潘悦, 李响, 周勇

  药物分析杂志. 2023, 43(11): 1820-1825. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2023.11.02

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  目的:建立并验证检测rAAV2-ND4注射液转录水平的生物学活性检测方法。方法:rAAV2-ND4样品(3.0×10¹⁰ vg·mL^-1,以每孔360 μL)感染HEK293T细胞(3.0×10⁵ cells·mL^-1,每孔0.8 mL,37 ℃ 5% 二氧化碳培养预培养24 h)后2 h,加适量培养基继续培养24 h,收集细胞;按细胞总RNA提取试剂盒操作细则提取细胞总RNA(裂解细胞、吸附、去蛋白、去杂质和洗脱);将提取后的细胞总RNA为模板,用qPCR方法分别检测ND4的mRNA Ct值和β-actin内参基因mRNA Ct值。通过同时设立rAAV2-ND4参比品进行平行检测,通过β-actin内参基因和rAAV2-ND4参比品双重校正检测rAAV2-ND4相对于其参比品的生物学活性。对所建立方法进行方法学验证,包括准确性、精密度、线性和专属性等。另考察了3批制品的批间一致性。 结果:qPCR检测ND4 mRNA转录量和参比品校正的方法检测结果提示ND4 mRNA与rAAV2-ND4感染细胞滴度之间存在量效关系。经方法学验证,方法的检测值与预期值之间偏离率在100%~130%;不同时间不同人员的9次结果RSD为13.75%;rAAV2-ND4滴度在1.0×10¹⁰~5.0×10¹⁰ vg·mL^-1范围内方法线性r>0.97;方法具有很好的专属性。3批rAAV-ND4检测值的RSD为9.3%。结论:初步建立了rAAV2-ND4转录水平的生物学活性检测方法。
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  rAAV5基因组滴度测定的数字PCR方法研究^*

  郑红梅, 秦玺, 李永红, 于雷, 毕华, 饶春明, 朱留强, 杨靖清, 史新昌, 周勇

  药物分析杂志. 2023, 43(11): 1826-1832. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2023.11.03

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  目的:建立并验证重组5型腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus type 5,rAAV5)基因组滴度测定的数字PCR方法,并对微滴数字PCR方法和芯片数字PCR方法进行比较。方法:分别用不同浓度的SDS和EDTA前处理 r AAV5样品,用微滴数字PCR测其基因组滴度,对病毒样品前处理试剂进行优化;在其他试验条件不变的情况下,分别设置微滴数字PCR的退火温度为60、58、54、52 ℃,以WPRE引物扩增,比较扩增效果,对数字PCR的退火温度进行优化;分别采用微滴数字PCR和芯片数字PCR测定rAAV5的基因组滴度并比较。结果:终浓度为1% SDS和62.5 mmol·L^-1 EDTA按1∶1(v/v)的比例混合后前处理rAAV5,测定的基因组拷贝数较高,前处理液裂解效果较好;当退火温度为54 ℃时,微滴数字PCR中阳性微滴和阴性微滴分离效果最好,扩增特异性最强;2种测定结果的试验室内精密度和回收率接近,测定同一裂解样本的结果较为接近(在1个数量级)。结论:初步建立了数字PCR方法并验证,为后续的进一步验证奠定基础。
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  CGE-LIF方法分析重组腺相关病毒(rAAV)衣壳蛋白的比例含量^*

  李响, 高铁, 史新昌, 陈泓序, 唐红梅, 秦玺, 周勇

  药物分析杂志. 2023, 43(11): 1833-1839. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2023.11.04

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  目的:建立毛细管凝胶电泳串联激光诱导荧光检测器(CGE-LIF)方法分析重组腺相关病毒(rAAV)衣壳蛋白VP1、VP2和VP3比例含量并进行方法学验证。方法:CGE-LIF分析rAAV衣壳蛋白方法为:rAAV 样品加入4% SDS-150 mmol·L^-1 NEM的溶液预变性(70 ℃,5 min);再加入P503染料标记(70 ℃,10 min);再加入1%SDS进行变性(70 ℃,5 min),然后混匀上机检测。方法验证包括准确性、精密度、线性、检测限、定量限,耐用性等。另外考察了P503、TAMRA、FQ 3种染料条件及rAAV不同血清型和部分批间一致性。结果:CGE-LIF分析不同血清型rAAV(包括2、5、8、9、10型)可将其衣壳蛋白VP1、VP2和VP3基线分离并且峰形尖锐。准确性显示衣壳蛋白VP1、VP2和VP3的实测结果与预期结果的相关系数r>0.99;重复性结果显示每个衣壳蛋白VP1、VP2和VP3的迁移时间RSD均<1.5%,校正峰面积百分比的RSD均<5%;中间精密度结果显示衣壳蛋白VP1、VP2和VP3的迁移时间RSD均<1.5%,校正峰面积百分比RSD均<5%;线性结果显示在0.6×10¹²~3.0×10¹² vg·mL^-1范围内与衣壳蛋白校正峰面积线性关系良好;VP3检测限和定量限分别为7.2×10¹⁰ vg·mL^-1和2.2×10¹¹ vg·mL^-1。用3种不同染料(P503、FQ和TAMRA)进行CGE-LIF检测,结果良好。该方法的批间稳定结果较为理想。结论:建立了rAAV衣壳蛋白CGE-LIF分析方法,所建方法可以对rAAV产品3种衣壳蛋白进行分离和相对定量。
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  应用SEC-UV-MALS-RI技术分析重组腺相关病毒(rAAV)的颗粒滴度和实心率^*

  李响, 史新昌, 王恒, 韩春梅, 秦玺, 周勇

  药物分析杂志. 2023, 43(11): 1840-1846. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2023.11.05

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  目的:建立分子排阻色谱(SEC)串联紫外检测器(UV)、多角度激光散射检测器(MALS)和示差检测器(RI)的方法分析重组腺相关病毒(rAAV)的颗粒滴度和实心率。方法:对rAAV、rAAV空壳对照品和二者混合样品进行SEC-UV-MALS-RI串联分析,流动相为50 mmol·L^-1磷酸盐缓冲液,流速为0.3 mL·min^-1,进样量为50 μL,温度为室温,采集时间为30 min;紫外检测器选择260 nm和280 nm双通道;18角度激光散射检测和示差检测采用系统默认设置;用WYATT软件分析结果。结果:样品颗粒滴度为4.816×10¹² vp·mL^-1,RSD为0.37%;空壳对照品颗粒滴度为3.199×10¹² vp·mL^-1,RSD为0.75%。按不同预设比例混合的5份样品颗粒滴度的RSD均在3%以内,实心率RSD均在4%以内。混合样品的颗粒滴度和实心率测定结果与预期值基本一致。结论:采用SEC-UV-MALS-RI方法可以分析rAAV制品的颗粒滴度、实心率等项目,适用于rAAV制品颗粒滴度和实心率的质量控制。
成分分析
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  UHPLC-MS/MS法同时测定牛黄蛇胆川贝液中22个胆酸成分^*

  游菁菁, 林晨, 林诗铃, 林薏涵, 池文杰, 黄鸣清

  药物分析杂志. 2023, 43(11): 1847-1857. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2023.11.06

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  目的:建立同时测定牛黄蛇胆川贝液中22个胆酸成分(甘氨熊脱氧胆酸、甘氨猪胆酸、牛磺胆酸、7-酮-3α,12-α-二羟基胆烷酸、12-脱氢胆酸、甘氨胆酸、3-酮-7α,12α-二羟基-5β-胆烷酸、牛磺鹅去氧胆酸、熊去氧胆酸、3α-羟基-7-酮基-5β-胆烷酸、猪胆酸、牛磺脱氧胆酸钠、12-酮脱氧胆酸、猪去氧胆酸、胆酸、甘氨鹅脱氧胆酸、甘氨脱氧胆酸、牛磺石胆酸钠、甘氨石胆酸、鹅去氧胆酸、去氧胆酸、石胆酸)的超高效液相色谱-串联质谱联用(UPLC-MS/MS)方法。方法:样品采用甲醇超声提取;以Thermo Fisher Scientfic Bremen HYPERSIL GOLD(100 mm×2.1 mm,1.9 μm)为色谱柱,0.1%甲酸水溶液(A)-甲醇(B)为流动相,梯度洗脱,流速为0.2 mL·min^-1,柱温为40 ℃,进样量为2 μL;质谱采用加热电喷雾离子源(HESI),负离子模式和平行反应监测(PRM)模式,喷雾电压为3.0 kV (-)。结果:所建方法在一定范围内均呈现良好线性关系(r≥0.999 4);精密度、重复性良好,供试样品在48 h内稳定性良好,加样回收率在94.9%~105.2%,RSD为0.50%~5.2%。含量测定结果表明牛黄蛇胆川贝液中牛磺胆酸、胆酸、猪胆酸、甘氨胆酸、猪去氧胆酸含量较高,且不同厂家之间含量存在较大差异,聚类分析可分为3类。统计发现,Ⅱ类中的牛磺胆酸、3-酮-7α,12α-二羟基-5β-胆烷酸、3α-羟基-7-酮基-5β-胆烷酸、12-酮脱氧胆酸、胆酸含量明显高于类别Ⅱ、Ⅲ,类别Ⅲ中猪胆酸含量明显高于类别Ⅰ和Ⅱ。结论:本方法便捷、高效、准确、灵敏,可用于牛黄蛇胆川贝液中22个胆酸成分的测定。
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  蒲公英药材UPLC指纹图谱及10个成分含量测定研究^*

  洪博, 刘荣宏, 侯玉娇, 邹宇, 李文静

  药物分析杂志. 2023, 43(11): 1858-1865. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2023.11.07

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  目的:建立蒲公英药材的超高效液相色谱(UPLC)指纹图谱,并同时测定蒲公英中咖啡酸 、芦丁、伞形花内酯、木犀草苷、菊苣酸、槲皮素 、芹菜素、山柰酚、香叶木素、芫花素10个成分的含量。方法:采用Waters T3 C₁₈色谱柱(100 mm×2.1 mm, 1.7 μm),以乙腈-0.4%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱,采用中药色谱指纹图谱相似度评价软件建立15批蒲公英药材指纹图谱。使用SPSS 26.0软件和SIMCA14.1软件进行聚类分析(CA)、主成分分析(PCA)、正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)等化学计量方法对蒲公英进行质量评价。结果:15批蒲公英药材UPLC指纹图谱共确定23个共有峰,指认了11个成分,测定了10个活性成分含量(咖啡酸、芦丁、伞形花内酯、木犀草苷、菊苣酸、槲皮素、芹菜素、山柰酚、香叶木素、芫花素的含量分别为0.11~0.60、3.47~18.02 、3.46~14.60、0.23~0.32、6.98~8.68、2.19~7.17、0.29~1.03、0.60~0.87、0.17~1.25、0.05~0.23 mg·g^-1)。10个成分在各自范围内线性关系良好(r≥0.999),平均加样回收率为91.7%~96.3%,RSD为<1.9%。结论:该方法简便易行,准确度高,重复性好,可为蒲公英药材的内在质量评价提供参考。
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  4种青海产龙胆科藏药材中8个活性成分含量的比较分析^*

  马金梅, 肖远灿, 郜靓, 魏立新, 杨仕兵

  药物分析杂志. 2023, 43(11): 1866-1875. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2023.11.08

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  目的:建立青海产龙胆科藏药材大花龙胆、蓝玉簪龙胆、线叶龙胆、喉毛花中8个活性成分的UPLC分析方法,比较其在4种藏药材中的差异。方法:超高效液相色谱法,采用InfinityLab Poroshell 120 SB-C₈(150 mm×2.1 mm,2.7 μm)色谱柱,乙腈(B)-0.05%乙酸水溶液(C)梯度洗脱,流速0.2 mL·min^-1,检测波长254 nm,柱温25 ℃。结果:马钱苷酸、獐芽菜苦苷、龙胆苦苷、獐芽菜苷、异荭草素、异金雀花素-2″-O-吡喃糖苷、异牡荆素及异金雀花素8个成分在线性范围内相关系数为0.999 8~1.000,平均回收率(n=6)98.4%~102.1%,RSD为0.77%~2.3%。8个活性成分在4种龙胆科植物中的总含量,喉毛花最高,为85.63 mg·g^-1,其次是线叶龙胆龙胆66.01 mg·g^-1和蓝玉簪龙胆42.11 mg·g^-1,大花龙胆最低,为19.33 mg·g^-1。4种龙胆科藏药都含有马钱苷酸、异牡荆素,但其含量均较低。蓝玉簪龙胆中龙胆苦苷和獐牙菜苷含量较高,均超过10 mg·g^-1,线叶龙胆中龙胆苦苷含量最高,为(19.26±1.67) mg·g^-1,均不含异金雀花素-2″-O-吡喃糖苷。大花龙胆中未检出獐芽菜苦苷、龙胆苦苷和獐芽菜苷,但异金雀花素-2″-O-吡喃糖苷和异金雀花素含量较高,达(7.99±0.09) mg·g^-1和(6.77±0.03) mg·g^-1;喉毛花中獐芽菜苦苷含量最高,为(76.79±7.42) mg·g^-1;但未检出龙胆苦苷和异红草素。结论:所建立的方法简便、准确,可用于4种龙胆科藏药的质量评价并为其资源的深入研究和利用提供参考。
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  双标线性校正法用于盐沙苑子配方颗粒多组分定性分析^*

  栾永福, 刘洪超, 解盈盈, 许丽丽, 郭东晓, 马双成, 孙磊, 林永强, 汪冰

  药物分析杂志. 2023, 43(11): 1876-1883. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2023.11.09

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  目的:建立HPLC-MS法对盐沙苑子配方颗粒中化合物A、杨梅素-3-O-β-D-葡萄糖苷、化合物B、沙苑子苷B、沙苑子苷A进行定性分析,考察双标线性校正(LCTRC)法预测保留时间的可行性,并对LCTRC法和相对保留时间(RRT)法2种替代对照品定性方法进行比较。方法:采用HPLC-MS法,以乙腈为流动相A,以0.1%甲酸水溶液为流动相B,梯度洗脱(0~5 min,10%A→15%A;5~15 min,15%A;15~45 min,15%A→25%A;45~65 min,25%A→45%A),流速为1.0 mL·min^-1,柱温为35 ℃,检测波长为266 nm。通过对照品保留时间及样品的紫外光谱、质谱数据进行样品色谱峰定位,在18根不同品牌或型号的C₁₈色谱柱上,测定盐沙苑子配方颗粒中5个成分的实际保留时间,计算标准保留时间(SRT),以化合物A和沙苑子苷A为双标化合物,使用LCTRC法预测保留时间,并在另外3根C₁₈色谱柱上进行方法验证。同时以中间峰化合物B为参照物,使用RRT法预测保留时间。结果:建立了LCTRC法对化合物A、杨梅素-3-O-β-D-葡萄糖苷、化合物B、沙苑子苷B、沙苑子苷A进行定性分析,5个成分在17根色谱柱上的SRT分别为14.433、19.556、34.071、37.662、39.643 min,线性关系良好(r>0.995)。与RRT法相比,LCTRC法预测保留时间的准确度更高,色谱柱适用范围更广。结论:作为一种新的替代对照品定性方法,LCTRC法能较好地辅助色谱峰定性,值得应用和推广。
安全监测
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  超高效液相色谱-串联质谱法测定3种含麦冬中药注射剂中多效唑残留量^*

  许玮仪, 郭藤, 黄金莉, 金红宇, 马双成

  药物分析杂志. 2023, 43(11): 1884-1890. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2023.11.10

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  目的:建立超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)结合标准加入法测定生脉注射液、参麦注射液、注射用益气复脉(冻干)中多效唑残留量。方法:采用Thermo Hypersil Gold色谱柱(100 mm×2.1 mm, 1.9 μm),以0.1%甲酸溶液和甲醇为流动相进行梯度洗脱,电喷雾电离源(ESI),正离子模式下多反应监测(MRM)。采用标准加入法进行样品测定。结果:线性关系良好,相关系数均>0.998,加样回收率全部指标在94.5%~119.8%,RSD为1.4%~2.5%,定量限为0.7~0.8 ng·mL^-1。共筛查47批样品,其中85%的样品未检出多效唑,总体上安全可控,但3种注射液中均有部分批次样品有多效唑检出,具有一定安全风险。结论:标准加入法可有效克服基质效应,操作方便,该方法灵敏、准确、可靠。
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  一次性针头过滤器洗脱及吸附效应的研究

  苏坦

  药物分析杂志. 2023, 43(11): 1891-1896. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2023.11.11

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  目的:选取国内6家制造商的尼龙及聚醚砜针头过滤器开展洗脱及吸附试验,研究针头过滤器在色谱试验中的洗脱及吸附效应。方法:洗脱试验选取有机试剂(甲醇、乙腈),使用尼龙针头过滤器过滤,观察液相色谱洗脱峰情况;吸附试验配置不同浓度林可霉素、克拉霉素与罗红霉素标准品溶液,使用针头过滤器过滤,LC-MS测定,计算回收率。结果:6家制造商的尼龙针头过滤器均有可被乙腈与甲醇洗脱的残留物峰;不同制造商聚醚砜针头过滤器吸附效应不同,同一制造商的聚醚砜针头过滤器对不同化合物的吸附程度也存在差异。被过滤溶液的浓度变小,需要弃去的初滤液体积有变多趋势。随着弃去的初滤液体积变多,被吸附的物质存在被释放的可能。结论:提示试验人员使用针头过滤器进行色谱前处理时应充分评估针头过滤器的洗脱及吸附效应。
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  QuEChERS-三重四极杆-气质联用法测定西洋参中227种农药残留

  王玮, 赵莹, 郭蓉, 田丽, 刘存卫, 梁晓聪

  药物分析杂志. 2023, 43(11): 1897-1908. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2023.11.12

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  目的:建立QuEChERS-气相色谱-三重四极杆串联质谱(GC-MS/MS)相结合技术同时测定西洋参中227种农药的检测方法,并对50批次西洋参样品进行农药残留筛查。方法:先向粉碎好的西洋参样品中加入乙腈,涡旋混匀后再加无水硫酸镁与无水乙酸钠的混合粉末摇散,震荡,离心,取上清液经QuEChERS技术净化,应用三重四极杆-气质联用多反应监测模式(MRM)进行检测分析,通过基质匹配标准曲线进行校正。结果:227种农药在2.50~250 ng·mL^-1范围内呈现良好的线性关系(r>0.995 9);定量限为0.01~0.05 μg·kg^-1;精密度(RSDs)在0.16%~11.62%(n=6),回收率在61.4%~125.3%;50批次西洋参中样品检出率为80.0%,共检出29种农药,其中灭菌磷检出率最高,达到66.0%。结论:该方法操作简便,重复性好,准确可靠,可用于西洋参中农药残留的快速筛查,为西洋参的种植生产及质量监管提供技术支撑。
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  电感耦合等离子体质谱法测定新型冠状病毒灭活疫苗(Vero细胞)的铝含量^*

  张承志, 王文晞, 郭江红, 程樱, 姜红

  药物分析杂志. 2023, 43(11): 1909-1913. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2023.11.13

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  目的:建立测定新型冠状病毒灭活疫苗(Vero细胞)铝含量的电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法。方法:以钪为内标元素,用2%硝酸溶液稀释样品,采用ICP-MS法进行测定,选择碰撞池模式(KED),射频功率1.6 kW,等离子体流量14.99 L·min^-1,雾化气流速1.02 L·min^-1,辅助气流量1.20 L·min^-1,蠕动泵转速:-35 r·min^-1,氦气流速5 mL·min^-1,积分时间2 s,跳峰模式,重复次数3次。并进行相关的方法学验证。结果:铝元素质量浓度在0~2 mg·L^-1范围内线性关系良好(r=0.999 9);检测限为0.073 9 μg·L^-1,定量限为0.246 2 μg·L^-1;精密度RSD(n=8)为0.70%;重复性RSD(n=8)为3.0%;平均回收率(n=8)为106.7%,RSD为2.1%。结论:ICP-MS法操作简单、快速,准确度和重复性好,可用于新冠病毒灭活疫苗(Vero细胞)的铝含量测定。
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  ICP-MS法测定左氧氟沙星注射液中10种元素杂质的含量

  钟思伟

  药物分析杂志. 2023, 43(11): 1914-1919. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2023.11.14

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  目的:建立电感耦合等离子体质谱法测定左氧氟沙星注射液中锂(Li)、钒(V)、钴(Co)、镍(Ni)、铜(Cu)、砷(As)、镉(Cd)、锑(Sb)、汞(Hg)、铅(Pb)10种元素杂质的含量。方法:选择氦气碰撞结合动能甄别模式(KED);RF功率1 550 W;采样深度5 mm;载气(氩气)流量1.13 L·min^-1;辅助气流量0.8 L·min^-1;积分时间0.03 s,采集次数30次;以铟(In)、锗(Ge)、钪(Sc)、铋(Bi)作为内标,按照标准曲线法同时测定上述10种元素杂质的含量。结果:上述10种元素杂质的响应值和其质量浓度均呈良好的线性关系(r>0.99);加样回收率均在90%~110%范围内;重复性RSD<6%;检测限和定量限均远小于各元素杂质的限度;检测条件(载气流量)在一定范围内(1.05~1.20 L·min^-1)的变化对测定结果无显著影响;供试品溶液室温放置3 d内各元素测得值的RSD<6%,溶液稳定性良好;3家不同企业生产的左氧氟沙星注射液中10种元素杂质的测定结果均符合规定。 结论:经分析方法学验证,该方法准确专属,快速灵敏,适用于左氧氟沙星注射液中10种元素杂质的检查。
标准研讨
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  质量提取法和微生物挑战法测定药品包装用西林瓶密封性的关联分析^*

  张芳芳, 咸富荣, 姚琳

  药物分析杂志. 2023, 43(11): 1920-1924. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2023.11.15

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  目的:建立质量提取法与微生物挑战法测试西林瓶包装系统密封性,并进行关联比较。方法:质量提取法使用不同孔径激光打孔阳性样品进行了线性、阳性率灵敏度与定量限的测试。微生物挑战法通过将不同孔径打孔样品倒置浸入铜绿假单胞菌悬液内,加压至并浸泡后培养,统计分析孔径与阳性率的关系。结果:质量提取法的灵敏度优于概率性方法微生物挑战法,质量提取法的阳性率灵敏度为0.2 μm,微生物挑战法的阳性率灵敏度为3 μm;3 μm激光打孔西林瓶样品的质量流量值为19.1 μg·min^-1。质量流量值与微生物阳性率的相关系数为0.98。结论:本文建立的关联比较分析方法,能够有效地比较微生物挑法和质量提取法测定该西林瓶包装系统密封性。
质量分析
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  藏药西藏凹乳芹及近似种HPLC指纹图谱对比研究^*

  王艺娱, 徐微, 齐景梁, 高必兴, 苟琰, 李倩, 高驰, 王颖, 杨蕾, 兰志琼

  药物分析杂志. 2023, 43(11): 1925-1934. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2023.11.16

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  目的:建立藏药西藏凹乳芹的HPLC指纹图谱方法,并与其近似种进行对比分析,寻找各品种间成分的共性和差异性。方法:收集主产区具有代表性的26批西藏凹乳芹样品,建立其HPLC指纹图谱方法。采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2012.130723版)对西藏凹乳芹及其近似种(迷果芹、西藏棱子芹、刺果峨参、羽苞藁本、凹乳芹、峨参、东当归、松潘棱子芹)的指纹图谱进行相似度评价分析。同时以共有峰面积量化数据为变量,采用SIMCA软件对临床常用的3个加哇基原药材(西藏凹乳芹、迷果芹、西藏棱子芹)进行主成分分析(PCA)和偏最小二乘法判别分析(PLS-DA)。结果:HPLC指纹图谱共标定了西藏凹乳芹17个共有峰,并指认了L-色氨酸、绿原酸、阿魏酸、异绿原酸A、异绿原酸C、洋川芎内酯I及藁本内酯7个共有峰。通过相似度比较分析,西藏凹乳芹与近似种具有明显差异。PCA及PLS-DA结果显示西藏凹乳芹、迷果芹及西藏棱子芹具有显著差异性,并筛选出6个种间差异的标志物。结论:建立的HPLC指纹图谱结合多元统计学分析可鉴别西藏凹乳芹及其近似种,各品种间成分上存在着较大的差异性,所指认的7个共有峰均为其主要有效成分,为其质量标准的制定打下基础。
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  基于肉苁蓉内在品质结合化学计量学评价鲜制与传统炮制的差异性^*

  靳婉君, 倪琳, 蔺瑞丽, 赖晶, 梁一博, 刘富强, 宋平顺

  药物分析杂志. 2023, 43(11): 1935-1945. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2023.11.17

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  目的:以肉苁蓉内在品质结合化学计量学评价其鲜制与传统炮制的差异,为肉苁蓉鲜制药材质量评价及判定提供参考。方法:通过测定4种炮制样品的水分、总灰分、浸出物、多糖、松果菊苷及毛蕊花糖苷6个内在质量控制指标,应用聚类分析(CA)、主成分分析(PCA-DA)、偏最小二乘法-判别分析(PLS-DA)及正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA) 对测定结果进行分析。结果:CA结果显示,肉苁蓉鲜干片及冻干片聚为一类,肉苁蓉片和酒苁蓉各自聚类。PCA结果显示与CA结果一致。PLS-DA结果显示肉苁蓉4种炮制品各自聚类效果良好,但肉苁蓉鲜干片与肉苁蓉冻干片比较集中,其主要差异指标为肉苁蓉多糖,松果菊苷以及浸出物。肉苁蓉鲜干片与冻干片OPLS-DA结果显示,其主要差异指标为肉苁蓉多糖,松果菊苷以及毛蕊花糖苷。结论:肉苁蓉鲜制与传统炮制饮片品质存在差异,通过内在指标结合化学计量法建立了肉苁蓉的评价模型,为肉苁蓉鲜制方法的可行性及质量可控性提供参考。
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  药用菊花生药学鉴别研究与数字化表征^*

  陶冶, 张亚中, 马双成, 康帅, 刘军玲, 翟宏焱, 程璐, 邓继敏, 陈荣耀

  药物分析杂志. 2023, 43(11): 1946-1954. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2023.11.18

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  目的:对2020年版《中华人民共和国药典》一部收载的5个不同规格药用菊花进行生药学鉴别研究,建立性状和显微鉴定及其数字化表征规范,为菊花与其同属易混品及伪品的鉴别研究奠定基础。方法:借鉴植物学形态和分类的术语及研究方法,应用体视显微、光学显微镜、数码成像技术手段,从外观性状(大样、顶面观、底面观)、剖面,以及粉末显微特征,对5种药用菊花进行比较鉴别和数字化表征,同时建立5种菊花及其混淆品性状检索表。结果:明确了5种菊花及其混淆品的性状鉴别,主要从花序、总苞、小苞片等方面进行区分。粉末显微增加了苞片表皮细胞及气孔、花柱碎片、花粉囊内壁细胞显微特征。结论:通过实验研究,总结归纳了药用菊花5个不同商品规格专属且实用的生药学鉴别特征,为菊花类药材与混淆品的鉴定研究提供参考依据,并为市场监管检验和标准修订提供科学依据。
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  维药蜀葵花的多成分质量分析研究^*

  刘红玉, 石磊岭, 马国需, 孙照翠, 杨峻山, 许旭东, 张悦, 樊丛照

  药物分析杂志. 2023, 43(11): 1955-1964. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2023.11.19

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  目的:建立HPLC法测定蜀葵花药材中芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷和槲皮素的含量,以上述4个成分的含量为指标,采用Box-Behnken响应面法考察甲醇体积分数、料液比和提取时间对提取效果的影响,优化维药蜀葵花的提取工艺。方法:HPLC条件: SB-C₁₈色谱柱 (250 mm×4.6 mm, 5 μm),流动相为乙腈(A)-0.2%磷酸水(B),梯度洗脱,流速1.0 mL·min^-1,柱温35 ℃,检测波长360 nm;在单因素试验基础上,采用Box-Behnken 响应面法,以芦丁、金丝桃苷、槲皮素、异槲皮苷成分含量为指标,优化蜀葵花的提取条件。结果:芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷和槲皮素质量浓度在5.025~50.25、10.20~102.0、19.91~199.1、16.85~168.5 μg·mL^-1范围内呈良好的线性关系(r=0.999 1~0.999 3),平均加样回收率为91.0%~96.2%;不同产地和批次之间,4个成分的含量相差很大;蜀葵花提取的最佳条件:甲醇体积分数为59%,料液比为 1∶50,提取时间为90 min,在此条件下建立的模型预测性与实际值相符。结论:建立的含量测定方法稳定、可靠,重复性好,建立的数学模型精度预测度好,可用于蜀葵花的质量评价及提取工艺条件优化。
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  基于GC指纹图谱结合化学计量学对麝香品质的评价研究^*

  汤燕, 罗恒, 沈立, 杨安东

  药物分析杂志. 2023, 43(11): 1965-1973. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2023.11.20

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  目的:建立GC指纹图谱,并结合化学计量学方法对麝香化学成分进行相关性分析。方法:采用Agilent HP-5气相色谱柱 (30 m×0.25 mm,0.25 μm),进样口温度为230 ℃,不分流模式,FID检测器温度为280 ℃,程序升温。以麝香酮峰为参照,利用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)”建立16批麝香样品的指纹图谱,确定共有峰并进行相似度评价。基于指纹图谱共有峰峰面积测定结果,采用聚类分析(HCA)、主成分分析(PCA)和偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)对麝的品种、取香年龄、养殖地与麝香化学成分进行相关性评价。结果:建立麝香GC 指纹图谱,确定17个共有峰;16批样品与对照指纹图谱相似度在0.89~0.996,3种化学识别模式分析方法可将16批样品分为2类,并筛选出导致不同年龄阶段质量差异的 5个差异标志物。结论:本研究建立的指纹图谱分析方法简单、可靠,精密度、稳定性、重复性良好,结合化学计量学方法,能够较好地辨认影响麝香质量差异的标志性成分,为麝香的质量控制和品质评价提供科学依据。
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  一种用于鉴别湖北麦冬的PCR-RFLP方法研究^*

  段庆梓, 王巍, 尚柯, 魏锋, 马双成, 张文娟

  药物分析杂志. 2023, 43(11): 1974-1979. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2023.11.21

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  目的:建立聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法,用于湖北麦冬的分子鉴别。方法:在ITS 2区设计湖北麦冬、短葶山麦冬和麦冬的通用引物,经PCR反应后,对PCR产物进行限制性内切酶(Nae I)的酶切反应,酶切条件为37 ℃孵育60 min。结果:设计的通用引物对湖北麦冬和麦冬均能扩增出377 bp的单一条带,经酶切反应后,湖北麦冬被切为231 bp和146 bp 2条条带,麦冬仍为377 bp的单一条带,以此实现湖北麦冬的分子鉴别。结论:建立的PCR-RFLP方法能够实现湖北麦冬的准确鉴别,且该方法操作简单,特异性强,稳定性好,检测结果客观易判读。
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  淫羊藿(箭叶淫羊藿)与其同属混淆品的生药学鉴别研究

  王燕明, 康帅, 李君瑶, 马双成, 王淑红, 郑玉光

  药物分析杂志. 2023, 43(11): 1980-1988. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2023.11.22

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  目的:研究建立淫羊藿(箭叶淫羊藿)与其同属混淆品的生药学鉴别方法。方法:通过深入产区调研,收集准确基原的植物标本和样品,整理基原鉴定特征及商品现状,综合应用体式荧光显微镜、光学显微镜和扫描电镜技术等技术对淫羊藿(箭叶淫羊藿)与其混淆品进行了鉴别比较。结果:箭叶淫羊藿来源药材与其混淆品在叶片下表面非腺毛及突起等特征上存在明显差异。与箭叶淫羊藿显微特征接近的粗毛淫羊藿,在体式荧光显微镜、偏光显微镜和扫描电镜下也可实现有效区分。结论:本文研究归纳了淫羊藿(箭叶淫羊藿)与其同属混淆品较为专属且实用的鉴别特征,从而为临床用药、市场监督、日常检验、标准起草等工作提供有益的参考。
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  奥泽沙星皮肤外用制剂体外释放的对比研究

  石玲玲, 陈轶嘉, 朱云龙

  药物分析杂志. 2023, 43(11): 1989-1996. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2023.11.23

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  目的:比较试验制剂和参比制剂体外释放的一致性。方法:采用Franz扩散池法,以0.45 μm聚醚砜膜为人工膜,7 mL脱气后的Transcutol P(二乙二醇单乙醚)-水(50∶50)为接收液,转速500 r·min^-1,温度32 ℃,取样体积2 mL,于0.5、1、2、4、6 h取样,以HPLC法分别测定药物在人工膜中的释放量随时间变化的释放规律,评价试验和参比制剂体外释放的一致性。结果:试验制剂与参比制剂在接收液中的累积释放百分率分别为93.7%和89.1%,单位面积累积释放量分别为2 622.0和2 479.0 μg·cm^-2,二者体外释放率比值的90%置信区间在75%~133.33%(FDA一致性规定限度)范围内。结论:试验制剂与参比制剂体外释放行为一致。