2023年, 第43卷, 第7期　
刊出日期：2023-07-31

  

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综述专论
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  生物亲和色谱法及在中药药效物质研究中的应用^*

  叶琪涛, 邓雪慧, 许平翠, 林炳锋, 寿旦, 王娜妮

  药物分析杂志. 2023, 43(7): 1091-1103. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2023.07.01

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  生物亲和色谱是指利用分析物与色谱固定相的生物亲和结合特点,鉴别出特定活性化合物的一种色谱方法,具有高灵敏度和高选择性等特点。本文主要介绍了免疫亲和色谱、凝集素亲和色谱、细胞膜色谱以及固定化金属亲和色谱的选择原理,重点介绍不同亲和色谱柱的制备方法及在中药药效物质研究中的应用,并就其应用前景做了展望,为进一步研究生物亲和色谱和中药药效物质基础提供了参考。
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  中药质量控制研究关键科学问题^*

  李绍平, 赵静

  药物分析杂志. 2023, 43(7): 1104-1109. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2023.07.02

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  质量控制是中药现代化和国际化的关键。充分认识中药质量控制研究中的关键科学问题对于更好地理解中药至关重要。本文系统讨论了中药质量控制中的关键科学问题如质控指标和替代对照品,为符合中医特色的中药质量控制研究提供指导。
成分分析
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  UPLC-MS/MS方法同时测定左金丸中23个成分的含量^*

  张佳颖, 尹艺, 徐倩倩, 车晓青, 赵娟娟

  药物分析杂志. 2023, 43(7): 1110-1119. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2023.07.03

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  目的: 建立UPLC-MS/MS方法同时测定不同左金丸样品中小檗碱、黄连碱、表小檗碱、药根碱、非洲防己碱、巴马汀、8-氧代-表小檗碱、小檗红碱、木兰花碱、8-氧黄连碱、脱氢紫堇碱、原儿茶酸、5-O-阿魏酰奎尼酸13个黄连成分和吴茱萸碱、吴茱萸次碱、去氢吴茱萸碱、二氢吴茱萸卡品碱、吴茱萸新碱、14-甲酰基二氢吴茱萸次碱、1-甲基-2-十一烷基-4(1H)喹诺酮、1-甲基-2-壬基-4(1H)喹诺酮、茵芋碱、地奥司明10个吴茱萸成分的含量。方法: 左金丸80%甲醇水提取液,采用ACQUITY UPLC BEH Shield RP 18(100 mm×2.1 mm, 1.7 μm)色谱柱,以乙腈-0.1%甲酸水为流动相,梯度洗脱,流速0.40 mL·min^-1;质谱采用电喷雾离子源和多反应监测模式采集数据。结果: 23个成分在各自的测定范围内线性关系良好(r>0.999 0),平均加样回收率在95.8%~104.0%,精密度、重复性、稳定性均符合要求。结果发现,测定的23个成分在醇提左金丸、水提左金丸和市售左金丸样品中均被检测到,但含量相差较大,如醇提左金丸中小檗碱的含量最高为172.0 mg·g^-1,茵芋碱最低为0.021 64 mg·g^-1。结论: 该方法准确、简便和稳定,可为左金丸相关制剂的质量控制和药效物质基础研究提供参考。
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  白芷中香豆素类化合物的超临界流体色谱分离方法研究^*

  潘明霞, 赵淑军, 刘洁, 贾志鑫, 李月婷, 肖红斌

  药物分析杂志. 2023, 43(7): 1120-1128. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2023.07.04

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  目的: 建立超临界流体色谱法(SFC法)同时测定白芷中7个香豆素类化合物(水合氧化前胡素、佛手柑内酯、氧化前胡素、欧前胡素、蛇床子素、异欧前胡素、软木花椒素)的含量,并与高效液相色谱法(HPLC法)进行比较。方法: 采用Agilent ZORBAX RX-SIL(150 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱,以二氧化碳(A)-乙醇(B)为流动相,梯度洗脱,流速1.5 mL·min^-1,柱温45 ℃,背压12.75 MPa,进样体积为2 μL,检测波长280 nm。结果: 7个香豆素类化合物在一定质量浓度范围内均具有良好的线性关系(r>0.999 0),精密度的RSD为0.79%~2.9%。7个香豆素类化合物在24 h内具有良好的稳定性,重复性的RSD为1.8%~3.0%,回收率为93.8%~102%。27批白芷饮片中,7个香豆素类化合物的含量由高到低的顺序为欧前胡素、水合氧化前胡素、异欧前胡素、氧化前胡素、佛手柑内酯、软木花椒素、蛇床子素,含量范围分别为1.00~5.70、0.24~3.10、0.31~1.50、0.01~2.50、0.03~0.39、0.01~1.20、0.01~0.54 mg·g^-1。在一定程度上,SFC法HPLC法具有相反的色谱行为。结论: 建立的SFC方法能够快速分离含2对同分异构体的7个香豆素类化合物。SFC法的保留及选择性受色谱柱、改性剂的影响较大。与HPLC法相比,SFC法更迅速、经济环保。
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  4种市售发酵虫草菌粉胶囊寡糖成分分析^*

  陈芷馨, 朱宝杰, 赵鹏, 杨明, 李绍平, 赵静

  药物分析杂志. 2023, 43(7): 1129-1134. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2023.07.05

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  目的: 研究4种市售发酵虫草菌粉胶囊中的寡糖成分。方法: 首先应用高效薄层色谱(HPTLC)对4种市售发酵虫草菌粉胶囊(百令胶囊、金水宝胶囊、宁心宝胶囊和心肝宝胶囊)寡糖成分进行初步分析,展开剂为正丁醇-异丙醇-乙酸-水(6∶11∶3∶4),显色剂为苯胺-二苯胺-磷酸;再采用HPTLC-MS确定寡糖聚合度,质谱选用正离子模式,质量范围m/z 100~1 500;最后结合淀粉酶酶解-HPTLC分析确定主要糖苷键类型。结果: 4种市售发酵虫草菌粉胶囊中,除宁心宝胶囊外,其他3种发酵虫草菌粉胶囊均基本不含寡糖类成分;HPTLC-MS结果显示,宁心宝胶囊样品HPTLC中Rf=0.53、0.48、0.40、0.32、0.27、0.22和0.18处的条带相对分子质量分别约为342、342、504、666、828、991、1 153,分别对应二糖及二糖至七糖;淀粉酶酶解结果提示:宁心宝胶囊中寡糖主要是α-1,4-葡聚寡糖。结论: 4种市售发酵虫草菌粉胶囊中,仅宁心宝胶囊含相对多的寡糖类成分,且主要为α-1,4-葡聚寡糖,其产生可能与菌种和/或生产工艺有关。
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  不同校正和定位方法在常春藤一测多评中的应用^*

  何兵, 梁思成, 田吉, 杨世艳

  药物分析杂志. 2023, 43(7): 1135-1147. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2023.07.06

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  目的: 建立一测多评(QAMS)的方法同时测定常春藤中8个活性成分(新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、芦丁、烟花苷、常春藤皂苷C、常春藤皂苷B、α-常春藤皂苷)的含量。方法: 采用高效液相色谱,Lubex Kromasil C₁₈ (250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱,以乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱,检测波长326 nm(0~15 min,检测酚酸类)、266 nm(15~25 min,检测黄酮类)、210 nm(25~45 min,检测皂苷类),流速1.0 mL·min^-1,柱温30 ℃,进样量10 μL。以绿原酸为内参物,分别采用不同校正方式(斜率校正、多点校正和单点校正)计算其他成分相对于绿原酸的相对校正因子(RCF)。同时考察不同色谱系统、色谱柱、流动相梯度比例、水相磷酸比例、测定波长、流速、柱温对相对校正因子的影响。考察不同定位方式[相对保留时间(RRT)、两点校正(TPC)]对待测成分色谱峰定位的影响。以相对误差考察一测多评法与外标法(ESM)和标准曲线法(SCM)结果之间的差异,并评估一测多评的准确性和可行性。结果: 采用斜率校正,新绿原酸、隐绿原酸、芦丁、烟花苷、常春藤皂苷C、常春藤皂苷B、α-常春藤皂苷相对于绿原酸的RCF分别为0.980、1.019、0.653、0.708、0.062、0.064、0.117;采用多点校正,上述成分的RCF分别为0.975、1.006、0.645、0.711、0.060、0.061、0.114;采用单点校正,上述成分的RCF分别为0.952、0.992、0.631、0.704、0.061、0.063、0.112。不同试验条件下RCF重复性良好(RSD＜3%)。相对保留时间和两点校正单一应用均无法实现色谱峰的准确定位,但二者结合可实现色谱峰的精准定位(RE＜3%)。一测多评法(单点校正)测得10批常春藤中8个成分含量分别为新绿原酸0.101~0.495 mg·g^-1、绿原酸1.134~4.855 mg·g^-1、隐绿原酸0.064~0.348 mg·g^-1、芦丁1.054~4.558 mg·g^-1、烟花苷0.452~1.331 mg·g^-1、常春藤皂苷C 11.121~72.350 mg·g^-1、常春藤皂苷B 4.944~14.100 mg·g^-1、α-常春藤皂苷5.325~19.734 mg·g^-1,与外标法测定结果完全一致(RE=0%)。采用斜率校正和多点校正的测定结果与外标法和标准曲线法接近(RE＜5%)。结论: 所建一测多评法简便快捷、准确可靠,可用于常春藤中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、芦丁、烟花苷、常春藤皂苷C、常春藤皂苷B、α-常春藤皂苷8个活性成分的同时测定。
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  UPLC-MS/MS法检测细辛中6个马兜铃酸类成分及其分布规律研究

  孙慧珠, 王晓蕾, 段吉平, 王常顺, 刘永利

  药物分析杂志. 2023, 43(7): 1148-1155. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2023.07.07

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  目的: 建立采用超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)检测北细辛中马兜铃酸A、B、C、D、Ⅲ及Ⅶa,并对待测成分在入药部位(根或根茎)的分布进行考察。方法: 采用Waters C₁₈ (100 mm×2.1 mm,1.8 μm)色谱柱,以乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,流速0.3 mL·min^-1,柱温30 ℃;电喷雾离子源,多反应监测(MRM)模式,正离子检测,定量离子对为m/z 359.0→298.0(马兜铃酸A)、m/z 329.0→268.0(马兜铃酸B)、m/z 345.0→284.0(马兜铃酸C)、m/z 375.0→312.0(马兜铃酸D)、m/z 359.0→296.0(马兜铃酸Ⅲ)、m/z 375.0→314.0(马兜铃酸Ⅶa)。结果: 马兜铃酸A、B、C、D、Ⅲ及Ⅶa的线性范围分别为5.269 5~526.95、5.543 3~554.33、10.056~502.79、4.723 1~472.31、4.938 2~493.82、5.042 7~504.27 ng·mL^-1,相关系数均＞0.999 6;平均加样回收率分别为98.2%、100.2%、103.1%、101.7%、96.2%、104.3%,RSD分别为4.3%、4.2%、3.7%、5.2%、3.0%、2.5%。12批样品的根或根茎中均未检出马兜铃酸B、C、Ⅲ。马兜铃酸A在根、根茎中含量范围分别为0.039 9~0.280 1、0.216 1~1.459 1 μg·g^-1;马兜铃酸D在根、根茎中含量范围分别为4.355 2~11.187 9、3.126 2~8.014 4 μg·g^-1;马兜铃酸Ⅶa在根、根茎中含量范围分别为0~0.017 3、0.008 4~0.070 3 μg·g^-1。马兜铃酸D含量最高。结论: 该方法快速,专属性好,对样品测定结果有明显规律性,为细辛合理应用及其马兜铃酸成分限量测定提供依据。
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  HPLC-MS/MS同时测定心脑静片中5个生物碱类成分的含量

  何风艳, 郭日新, 武营雪, 张海鸣, 戴忠

  药物分析杂志. 2023, 43(7): 1156-1162. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2023.07.08

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  目的: 建立HPLC-MS/MS同时测定心脑静片中黄柏碱、异去氢钩藤碱、去氢钩藤碱、异钩藤碱和钩藤碱5个生物碱类成分含量的方法。方法: 采用Waters Acquity UPLC BEH C₁₈色谱柱(50 mm×2.1 mm,1.7 μm),以乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速为0.4 mL·min^–1;质谱采用正离子扫描,多反应监测(MRM)模式进行定量分析。结果: 5个成分在一定浓度范围内与峰面积呈良好线性关系,线性相关系数r均＞0.999 5;平均回收率(n=6)在93.4%~104.0%,RSD在1.2%~3.2%。2个厂家14批样品中黄柏碱、异去氢钩藤碱、去氢钩藤碱、异钩藤碱和钩藤碱的含量分别为218.08~716.22、3.24~64.47、6.65~207.74、1.47~39.68、3.87~98.89 μg·g^-1。不同厂家样品中黄柏碱的测定结果较为接近,而异去氢钩藤碱、去氢钩藤碱、异钩藤碱、钩藤碱的含量测定结果差异较大。结论: 本方法灵敏、准确,可用于心脑静片相关药味的质量控制。
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  一测多评法测定防风中6个有效成分的含量

  张军鹏, 庄辉, 刘斌, 周海燕

  药物分析杂志. 2023, 43(7): 1163-1171. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2023.07.09

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  目的: 建立测定防风中升麻素苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷、亥茅酚苷、补骨脂素、欧前胡素6个成分含量的一测多评方法,并验证该方法的准确性和可行性。方法: 采用液相色谱法,应用Agilent ZORBAX SB-C₁₈(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱,以乙腈(A)-0.02%的磷酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL·min^-1,柱温30 ℃,检测波长210 nm。以升麻素苷为内参物,分别建立升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷、亥茅酚苷、补骨脂素、欧前胡素的相对校准因子,利用该相对校准因子计算其他5个成分含量,同时利用外标法测定各成分含量,比较2种测定方法的差异,验证一测多评法的可行性和适用性。结果: 12批不同产地和批号的防风中6个有效成分采用一测多评法与外标法的实测值之间无显著性差异。12批防风中升麻素苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷、亥茅酚苷、补骨脂素、欧前胡素在测定范围内线性良好,含量范围分别为0.21%~0.49%、0.060%~0.16%、0.20%~0.41%、0.11%~0.26%、0.029%~0.093%、0.066%~0.14%。结论: 一测多评法测定防风中升麻素苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷、亥茅酚苷、补骨脂素、欧前胡素6个成分准确可行,可用于防风的质量控制。
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  肾衰宁片的HPLC特征图谱及9个成分的含量测定

  曹舒兴, 宋永周, 王进

  药物分析杂志. 2023, 43(7): 1172-1182. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2023.07.10

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  目的: 建立肾衰宁片的HPLC特征图谱并测定丹参素、橙皮苷、丹酚酸B、小檗碱、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚这9个成分的含量。方法: 采用Agilent Extend C₁₈ (250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱,以乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相,进行梯度洗脱,体积流量为1.0 mL·min^-1,柱温为30 ℃,检测波长为280 nm;通过相似度评价,结合主成分分析(PCA)和聚类分析(HCA),对10批肾衰宁片的指纹图谱进行分析评价,并对指认的9个成分进行定量测定。结果: 建立了肾衰宁片特征指纹图谱,共标定了15个共有峰,各批次样品的相似度均﹥0.99,10批肾衰宁片样品质量存在一定的差异。9个成分分别在各自范围内线性关系良好,平均回收率(n=9)为99.4%~101.1%(RSD在0.49%~1.2%)。10批样品中上述9个成分含量范围依次分别为4.128~4.896、2.684~2.780、8.382~9.806、1.948~2.279、0.327~0.383、0.391~0.457、0.983~1.150、1.191~1.394、0.523~0.612 mg·g^-1。结论: 建立的肾衰宁片HPLC特征图谱方法及其9个成分含量测定的方法简便、准确、可靠,可用于肾衰宁片的质量评价。
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  定量核磁共振氢谱法测定那屈肝素钙中钙离子的含量

  徐翊雯, 李馨白, 王瑾, 孙会敏, 吴先富

  药物分析杂志. 2023, 43(7): 1183-1188. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2023.07.11

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  目的: 建立采用定量核磁共振氢谱法(qHNMR法)测定那屈肝素钙中钙离子含量。方法: 采集核磁共振氢谱(¹H NMR),zg 30脉冲,弛豫延迟时间为15 s,选择乙二胺四乙酸(EDTA)与钙离子络合物Ca-EDTA的信号峰作为钙离子的定量峰,以马来酸为内标物,对那屈肝素钙中钙离子进行定量分析。结果: Ca-EDTA和马来酸定量峰信号在¹H NMR谱上分离度良好,样品与内标物的质量比在0.546~12.238,与其定量峰面积比呈线性关系(r=0.999 9),精密度RSD为0.65%,重复性RSD为0.77%,平均加样回收率为99.7%(RSD为1.3%),采用qHNMR测定9批那屈肝素钙样品中钙离子含量为9.54%~9.99%,测定结果与电感耦合等离子体发射光谱法(ICP-AES)测定结果基本一致。结论: 建立的qHNMR法操作简便、快速、准确,可用于那屈肝素钙中钙离子含量的测定。
生物检定
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  人干扰素α2b理化对照品质控方法与质量标准研究^*

  裴德宁, 陶磊, 韩春梅, 范文红, 杨靖清, 秦玺, 毕华, 周勇

  药物分析杂志. 2023, 43(7): 1189-1194. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2023.07.12

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  目的: 建立人干扰素α2b(hIFN α2b)理化对照品的质控方法与质量标准。方法: 使用2020年版《中华人民共和国药典》报告基因法测定hIFN α2b理化对照品的生物学活性、福林酚法测定蛋白质含量、电泳法和高效液相色谱法测定纯度、等电聚焦电泳法测定等电点、Edman降解法测定N端氨基酸序列;液质联用法测定相对分子质量,使用C₄(50 mm×2.1 mm,3.5 μm)色谱柱和QTof质谱仪;液质联用法测定质量肽图和二硫键,使用C₁₈(100 mm×2.1 mm,1.7 μm)色谱柱和QTof质谱仪;建立hIFN α2b理化对照品的质量标准;对7批由不同企业提供的理化对照品进行检测。结果: 建立了hIFN α2b理化对照品的质量标准,7批hIFN α2b理化对照品的比活性为1.2×10⁸~2.8×10⁸ IU·mg^-1,电泳纯度均＞96.0%,高效液相色谱纯度均＞95.0%,等电点主区带为5.2~6.6,N端氨基酸序列为(M)CDLPQTHSLGSRRT,相对分子质量、质量肽图和二硫键测定结果均与理论值相符。结论: 建立的质控方法与质量标准可以比较全面地评价hIFN α2b理化对照品的质量,各企业的理化对照品均符合质量标准的要求。
代谢分析
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  增生大鼠体内花生四烯酸代谢的影响^*

  曹晓彤, 江淑琴, 孔维桂, 尚影, 廖俊, 鞠涛, 戴荣华

  药物分析杂志. 2023, 43(7): 1195-1204. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2023.07.13

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  目的: 研究经知母总黄酮干预后前列腺增生(benign prostatic hyperplasia,BPH)大鼠前列腺中花生四烯酸(arachidonic acid,AA)的代谢组学特征。方法: 采用Shim-PACK XR-ODS C₁₈(75 mm×3.0 mm, 2.2 μm)色谱柱,以0.05%的甲酸-水溶液(浓氨试液调节pH至3.3)为流动相A,甲醇-乙腈(20∶80,v/v)为流动相B,梯度洗脱,流速0.3 mL·min^-1,柱温40 ℃,进样量10 μL;质谱采用负离子扫描,多反应监测(MRM)模式。分别收集假手术组、模型组、知母总黄酮组和阳性对照组大鼠的前列腺组织,利用超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)法对其中的11个物质[包括花生四烯酸(AA)、5-羟二十碳四烯酸(5-HETE)、8-羟二十碳四烯酸(8-HETE)、11-羟二十碳四烯酸(11-HETE)、12-羟二十碳四烯酸(12-HETE)、15-羟二十碳四烯酸(15-HETE)、白三烯(LTB₄)、前列腺素D₂(PGD₂)、前列腺素E₂(PGE₂)、前列腺素H₂(PGH₂)、血栓素B₂(TXB₂)]进行定量分析。结果: 待测物均能被很好地检出,在其线性范围内呈现良好的线性关系。组织样品中11个待测成分在高、中、低浓度下的提取回收率均＞75.7%,基质效应为85.5%~106.3%,准确度RSD＜11.2%,日内和日间精密度RSD分别＜11.0%和9.5%。方法的专属性、准确度、精密度、提取回收率、基质效应和稳定性方面均符合要求。研究表明,模型组大鼠前列腺内的AA及其代谢物浓度均显著高于假手术组;知母总黄酮可改变BPH发展过程,有效下调BPH大鼠前列腺中AA及其代谢物的浓度。结论: 知母总黄酮可以通过脂氧合酶(LOX)和环氧合酶(COX)的2条途径来调节AA代谢,抑制BPH中发生的炎症反应。
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  基于UPLC-Q Tof MS/MS的蒙药给喜古讷-3颗粒治疗便秘大鼠尿液代谢组学研究^*

  包泽阳, 孟和, 都丽娜, 宝苏日高, 韩额尔德木图, 孟永梅

  药物分析杂志. 2023, 43(7): 1205-1212. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2023.07.14

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  目的: 观察蒙药给喜古讷-3颗粒对便秘大鼠的尿液代谢组学研究,寻找相关代谢产物及代谢通路。方法: 大鼠随机分为空白组、模型组、给喜古讷-3颗粒组、阳性给药(莫沙必利)组,共4组。皮下注射盐酸洛哌丁胺建立大鼠便秘模型,观察各组大鼠24 h尿量、粪便质量、粒数、含水率,造模成功后给予相应的药物进行治疗。给药7 d后取各组大鼠尿液,利用超高效液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱(UPLC-Q Tof MS/MS)的代谢组学技术,采用 ACQUITY UPLC^®BEH Shield RP 18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7 μm),以0.1%甲酸水-含0.1%甲酸的乙腈为流动相进行梯度洗脱,流速0.35 mL·min^-1,质谱采用电喷雾离子源(ESI),以正负离子模式采集质谱碎片信息,对大鼠尿液进行分析寻找差异代谢物和代谢通路。结果: 与模型组比较,给喜古讷-3颗粒组24 h尿量减少(P<0.05),粪便质量增加(P<0.01),粒数增加(P<0.05),含水率升高(P<0.01)。共鉴定出差异代谢物22个,其中呋喃苯胺酸、聚酯吡喃酮D、尿苷2',3'-环磷酸水平给药后升高,半胱氨酸-赖氨酸、去甲基多塞平、N-葡萄糖酰乙醇胺等水平给药后降低,主要涉及代谢通路为色氨酸代谢、类固醇生物合成、泛醌和其他萜类醌生物合成。结论: 给喜古讷-3颗粒对便秘模型大鼠尿液代谢产物具有调节作用,为进一步对给喜古讷-3颗粒治疗便秘奠定了有效的实验基础。
安全监测
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  微生物挑战法测定注射剂药品包装容器密封完整性^*

  王静, 黄思嘉, 王妮, 张芳芳

  药物分析杂志. 2023, 43(7): 1213-1220. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2023.07.15

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  目的: 对微生物挑战法在注射剂药品包装系统密封完整性检测中的灵敏度进行研究与讨论。方法: 选择中性硼硅玻璃注射剂瓶和5层共挤输液用袋2种较为典型的“刚性”和“柔性”注射剂药品包装系统,分别通过激光打孔和微量管制备的方法制作不同尺寸缺陷的阳性样品后在加压条件下进行微生物挑战试验。通过二分类Logistic回归方法对不同孔径阳性样品的泄漏情况进行统计分析。结果: 采用本研究建立的微生物挑战法模拟条件进行试验时,中性硼硅玻璃注射剂瓶的检测灵敏度为2 μm,5层共挤输液用袋的检测灵敏度为1.5 μm。结论: 不同注射剂包装系统可通过适宜方法制备不同尺寸缺陷阳性样品模拟泄漏情况,并通过密闭容器加压模拟实际运输等条件进行浸没式微生物挑战试验。采用二分类Logistic回归统计分析可以对不同包装系统采用浸没式微生物挑战法进行密封完整性检测时的灵敏度进行确定,为包装容器密封完整性检查方法的关联比较研究提供技术基础。
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  基于QSAR模型、紫外光谱法和分子对接技术研究杂质5-羟甲基糠醛及其二聚体和代谢产物与DNA的相互作用^*

  林铌, 张佳宁, 刘丽, 靳洪涛, 王三龙, 刘颖

  药物分析杂志. 2023, 43(7): 1221-1228. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2023.07.16

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  目的: 研究杂质单体5-羟甲基糠醛(5-hydroxymethylfurfural,5-HMF)及其二聚体5,5'-二甲酰基呋喃二甲醚[5,5'-oxydimethylenebis(2-furfural),OMBF]、单体代谢产物5-磺基氧甲基糠醛(5-sulfooxymethylfurfural,5-SMF)与DNA的相互作用方式,为3种杂质潜在的DNA损伤风险和遗传毒性机制研究提供理论基础。方法: 采用QSAR模型预测5-HMF、OMBF和5-SMF与DNA结合的可能性及遗传毒性警示结构,然后采用紫外光谱法对3种杂质与小牛胸腺DNA(ctDNA)相互作用后的光谱学变化评估可能的作用方式,最后用分子对接技术将3种杂质与双链DNA分子模拟对接,直观地呈现三者与DNA的作用方式,并比较3种杂质与DNA结合的稳定性。结果: 4种QSAR模型预测结果提示5-HMF、OMBF和5-SMF 3种杂质均可能与DNA结合,且均具有潜在致突变或致癌性。5-HMF、OMBF和5-SMF均能使ctDNA的紫外吸收光谱发生减色效应(减色程度分别为8.2%、22.6%和8.7%)和蓝移(位移距离分别为1.2、3.5和1.0 nm),说明3种杂质均可能以小沟槽结合的方式与ctDNA发生相互作用,且均可能与碱基对发生π-π相互作用。通过分子对接模拟验证了3种杂质与DNA均可能发生小沟槽结合,并与碱基对产生氢键作用,OMBF和5-SMF还可能与碱基发生π-π相互作用。通过比较杂质小分子与DNA的平均结合能,结果证明OMBF最强,5-SMF次之,5-HMF最弱。结论: 3种杂质均可能与DNA分子相互作用产生范德华力(小沟槽结合方式)、氢键和π-π相互作用,且均可能与DNA以非共价结合方式形成杂质-DNA复合物,从而对DNA结构造成一定的损伤。本研究从分子水平对5-HMF、OMBF和5-SMF与DNA可能的相互作用方式及其潜在致DNA损伤和遗传毒性的机制进行了探索性研究,为杂质小分子的遗传毒性研究提供了新思路。
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  柠檬酸苹果酸钙25种元素杂质的含量测定^*

  景奕文, 张巧, 杨秀云, 王维, 张威风, 朱俐, 肖超强

  药物分析杂志. 2023, 43(7): 1229-1237. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2023.07.17

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  目的: 探索复杂基质样品电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)分析方法的专属性考察方式,建立定量测定柠檬酸苹果酸钙中25种潜在元素杂质镉、铅、砷、汞、钴、钒、镍、铊、金、钯、铱、锇、铑、钌、硒、银、铂、锑、锂、钡、钼、铜、锡、铬和铝的ICP-MS方法。方法: 取样品25 mg,置25 mL量瓶(PP)中,加硝酸1 mL和盐酸溶液0.25 mL,轻微摇晃使溶解后,用超纯水稀释。Agilent 7900 ICP-MS配合自动进样器进行样品测定,以He模式进样检测,采用同心雾化器,雾化气流速1.05 L·min^-1,雾化室温度2 ℃,样品提升速度0.1 r·s^-1,射频功率为1 550 W,采样深度10 mm,氦气流速5 mL·min^-1,能量歧视5.0 V,内标校正的标准曲线法对样品中的元素杂质进行定量分析。以各元素杂质的同位素比值进行专属性考察,选择各元素的特征同位素(质量数),并参考USP 41<233>完成方法验证。结果: 25种元素杂质的检测限为0.002~6.97 μg·L^-1,定量限为0.01~3.25 μg·L^-1,加样回收率均在70%~150%,重复性RSD不大于20%,精密度良好。依据ICH Q3D方法1通用允许浓度限度法进行评估,多批次原料和制剂样品中24种元素杂质均符合限度要求,但存在个别元素超出控制阈值(30%PDE)的情况,样品中铝风险较低。考虑原料来源的不确定性,从保证产品安全的角度,应建立方法对本品原料和制剂进行质控。结论: 同位素比法是ICP-MS方法专属性研究的有效手段,所建立方法专属性强,准确度高,简便可行,可以为柠檬酸苹果酸钙及其他复杂基质中的元素杂质方法验证提供参考。本研究所建立的方法能够满足柠檬酸苹果酸钙的质控。
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  注射用奥扎格雷钠的有关物质研究

  叶晓霞, 江文明, 张雪, 曹文, 金薇, 乐健

  药物分析杂志. 2023, 43(7): 1238-1244. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2023.07.18

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  目的: 对市场抽检的注射用奥扎格雷钠开展有关物质研究。方法: 首先建立注射用奥扎格雷钠有关物质的高效液相色谱评价方法,选用Inertsil ODS C₁₈色谱柱,以0.01 mol·L^-1醋酸铵缓冲液-甲醇(80∶20)为流动相A,以甲醇为流动相B,梯度洗脱,流速1.0 mL·min^-1,检测波长272 nm,进样体积20 μL。采用所建方法对46批注射用奥扎格雷钠开展有关物质评价。含量＞0.1%的杂质采用Q-TOF高分辨质谱以ESI+模式进行质谱扫描。结果: 所建方法检测限为0.010 μg·mL^-1,破坏性试验结果表明该条件下,奥扎格雷与杂质分离良好。研究发现所有样品杂质总量均＜1.0%,有5批样品检出含量为0.16%~0.23%的单个最大杂质(杂质Ⅰ),这5批样品杂质总量达到0.61%~0.69%%。加速试验前后各样品的单个最大杂质无明显变化,杂质总量的差异值均＜0.06%。0.9%氯化钠注射液和5%葡萄糖注射液配伍使用对有关物质水平无影响。经高分辨质谱解析,结合生产工艺文献,推测杂质Ⅰ为奥扎格雷原料合成中间体(E)-4-(1-咪唑甲基)肉桂酸甲酯。结论: 市场上的注射用奥扎格雷钠有关物质均符合我国该品种现行质量标准要求。但研究发现,现行质量标准中,有部分杂质未被有效监控。本文所建方法能够有效监控注射用奥扎格雷钠的杂质,获得全面的杂质信息。该方法还可进一步推广应用于奥扎格雷原料药和其他奥扎格雷制剂的产品质量监控。
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  UPLC-MS/MS检测全粉投料中成药制剂中柴胡掺杂藏柴胡成分方法的研究

  陈馥, 黄俊忠, 李华, 刘潇潇

  药物分析杂志. 2023, 43(7): 1245-1254. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2023.07.19

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  目的: 以藏柴胡特征成分尼泊尔柴胡皂苷k为指标,建立超高效液相色谱-质谱法检测全粉投料中成药制剂中柴胡掺伪藏柴胡成分。方法: 采用Agilent Eclipse Plus C₁₈(100 mm×3 mm,1.8 μm)色谱柱,以水(A)-乙腈(B)为流动相,二元梯度洗脱(0~3 min,75%A→70%A;3~12 min,70%A→68%A;12~12.5 min,68%A→10%A;12.5~15.5 min,10%A),流速0.3 mL·min^-1,柱温40 ℃,进样量1 μL。采用电喷雾负离子化,多反应监测(MRM)模式,选择m/z 943.5→797.5、943.5→781.5和943.5→635.4为检测离子对。结果: 尼泊尔柴胡皂苷k质量浓度在0.05~5 μg·mL^-1范围与峰面积呈现出良好的线性关系(r=0.996 5),仪器精密度RSD(n=6)为1.4%,掺伪10%藏柴胡参比溶液重复性RSD(n=6)为1.8%,掺伪检测限为1%。对代表性品种逍遥丸、加味逍遥丸、补中益气丸、龙胆泻肝丸进行筛查,结果9批逍遥丸中有2批,8批加味逍遥丸中有4批,10批补中益气丸中有1批,10批龙胆泻肝丸中有2批含尼泊尔柴胡皂苷k超过拟定限度。结论: 本方法经过方法学验证,专属性强,灵敏度高,可应用于全粉投料中成药制剂中柴胡掺杂藏柴胡成分的检查。
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  超临界流体色谱法同时测定骨化三醇软胶囊中骨化三醇及抗氧剂

  战冰, 金薇, 李丹, 杨永健, 乐健

  药物分析杂志. 2023, 43(7): 1255-1262. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2023.07.20

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  目的: 建立一种超临界流体色谱方法同时分离测定骨化三醇软胶囊中骨化三醇及抗氧剂叔丁羟甲苯(BHT)和丁基羟基苯甲醚(BHA)。方法: 采用ACQUITY UPC² Torus DIOL(100 mm×3.0 mm,1.7 μm)色谱柱,以超临界二氧化碳-甲醇为流动相,进行梯度洗脱,流速为1.0 mL·min^-1,背压为13.8 MPa,柱温为40 ℃,进样量为2 μL,在检测波长265 nm处同时检测骨化三醇及BHT、BHA。结果: 抗氧剂BHT、BHA和主成分骨化三醇在5 min内分离完全,辅料中油酯不影响分离测定。BHT、BHA和骨化三醇质量浓度分别在17.0~85.1、17.1~85.3和0.34~1.71 μg·mL^-1范围内与峰面积呈良好线性关系,相关系数分别为0.999 9、0.999 7和0.999 6 (n=5);三者的定量限分别为3.5、2.5和0.2 ng (S/N为10);低、中、高3个浓度水平的平均回收率(n=9)分别为101.5%、101.8%和98.3%,RSD分别为1.8%、2.1%和1.2%。3批样品,平均每粒含骨化三醇0.266、0.264和0.272 μg,含BHT 15.6、15.6和15.8 μg,含BHA 17.0、16.9和17.0 μg。结论: 该方法绿色环保,专属性强,准确性高,分析速度快,可有效用于脂溶性软胶囊中主成分和抗氧剂的同时质量控制。
快速分析
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  基于环介导等温扩增技术的中药材蕲蛇真伪鉴别方法的建立^*

  邓华明, 徐晓可, 黄启红, 李子行, 梁林源, 余至兴, 梁永恒

  药物分析杂志. 2023, 43(7): 1263-1269. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2023.07.21

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  目的: 建立基于环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)的蕲蛇快速检测方法,实现中药蕲蛇的可视化快速鉴定。方法: 依据《中华人民共和国药典》收录的蕲蛇特异性序列设计4条LAMP引物(2条内引物、2条外引物),建立蕲蛇LAMP的鉴别方法,对比《中华人民共和国药典》收录的聚合酶链式反应 (polymerase chain reaction,PCR)方法的检测结果,评价LAMP的鉴别方法的特异性和灵敏度,并采用LAMP鉴别方法和PCR方法鉴别市售蕲蛇的真伪。结果: 使用该引物建立的蕲蛇LAMP鉴别方法对蕲蛇对照药材和4份市售蕲蛇样本产生扩增,对1份市售蕲蛇样本和8种蕲蛇混淆品样本无扩增,与PCR鉴别结果一致,说明蕲蛇的LAMP鉴别方法具有良好的特异性。LAMP检测的灵敏度在DNA水平上达到0.004 ng·μL^-1,PCR检测的灵敏度为0.4 ng·μL^-1,因而LAMP检测具有较高的灵敏度。结论: 本研究建立的LAMP检测方法可以应用于中药材蕲蛇真伪的快速鉴别。