目的：建立牛黄及代用品中胆汁酸类成分的指纹图谱，并对甘氨胆酸、牛磺胆酸、胆酸和去氧胆酸进行定量研究。方法：采用HPLC-ELSD联用技术，使用Symmetryshield^TM C₁₈色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），以乙腈为流动相A，以0.2%甲酸水溶液（含10 mmol·L^-1醋酸铵）为流动相B，梯度洗脱（0~5 min，2% A→35% A；5~12 min，35% A→37% A；12~23 min，37% A；23~45 min，37% A→50% A），流速1.0 mL·min^-1，ELSD漂移管温度102℃，氮气1.9 mL·min^-1，进行指纹图谱分析和上述甘氨胆酸等4个成分的含量测定；采用电喷雾离子源进行正离子模式扫描，对牛黄指纹图谱中8个特征峰进行指认；并利用Chrompattern软件对测试所得到的色谱数据进行主成分分析，利用国家药典委员会相似度评价软件进行相似度评价。结果：建立了牛黄及代用品的HPLC-ELSD指纹图谱，并指认了甘氨胆酸、牛磺胆酸、胆酸、甘氨鹅去氧胆酸、牛磺去氧胆酸、猪去氧胆酸、鹅去氧胆酸和去氧胆酸8个特征峰；牛黄、体外培育牛黄和人工牛黄中胆汁酸类成分基本相同，但含量存在差异；指纹图谱经相似度和主成分分析，均可用于区分牛黄、体外培育牛黄和人工牛黄。结论：本法可为牛黄、体外培育牛黄和人工牛黄的质量控制提供有效的技术支持。