目的：对猴头菌丝固体培养物中尿苷、鸟苷、腺苷3个核苷类成分进行含量测定，同时建立HPLC指纹图谱。方法：采用SunFire^TM C₁₈色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相为甲醇-水，梯度洗脱，流速1.0 mL·min^-1，检测波长260 nm，柱温30℃。采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件（2004A）进行指纹图谱分析。结果：10批猴头菌丝固体培养物样品中尿苷、鸟苷、腺苷3个核苷类成分线性范围分别为2.4~38.9、1.9~29.6、1.7~26.9 μg·mL^-1，平均加样回收率分别为97.8%、98.4%、99.0%，含量分别在127.17~481.88，68.36~282.36，91.10~280.47 μg·g^-1范围内。建立了10个批次猴头菌丝固体培养物的共有图谱，提取了21个色谱峰作为指纹图谱共有峰，指纹图谱相似度在0.93以上。结论：建立的猴头菌丝固体培养物含量测定及指纹图谱方法简便可靠，重复性好，可为猴头菌丝固体培养物质量控制和评价提供依据。