目的：建立同时测定莨菪浸膏片中阿托品、东莨菪碱、山莨菪碱含量的一测多评法。方法：采用Phenomenex C₁₈色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相为甲醇（A）-0.05%磷酸水溶液（B），梯度洗脱，流速为1.0 mL·min^-1，柱温为30℃，检测波长为218 nm。以硫酸阿托品为内参物，计算阿托品、东莨菪碱、山莨菪碱的相对校正因子，采用一测多评法和外标法分别测定3个生物碱含量，并比较两者测定结果的差异。结果：经方法学验证，分离度、精密度、重复性、稳定性良好，4批莨菪浸膏片中阿托品、东莨菪碱、山莨菪碱质量浓度分别在分别在22.00~66.01、9.48~28.45、6.32~18.97 μg·mL^-1范围内线性关系良好。阿托品、东莨菪碱、山莨菪碱的相对校正因子分别为0.855 1、0.950 3、0.760 5，各相对校正因子重现性良好。一测多评法测得批号为1509559、151004、151005、151006的样品中阿托品含量分别为15.788、26.008、26.254、26.518μg·片^-1，东莨菪碱含量分别为7.765、1.117、1.121、1.009 μg·片^-1，山莨菪碱含量分别为0.605、0.823、0.654、0.482 μg·片^-1，其结果与外标法测定结果基本一致。结论：本法可用于莨菪浸膏片中莨菪烷类生物碱的质量控制。