目的：建立独活HPLC指纹图谱并测定独活中二氢欧山芹醇、蛇床子素、异欧前胡素、二氢欧山芹醇当归酸酯的含量，为独活的质量控制提供参考。方法：采用SWELL Chromplus^TM C₁₈色谱柱（250 mm&#215;4.6 mm，5 μm），以乙腈（A）-0.2%醋酸水溶液（B）为流动相，梯度洗脱（0~5 min，15%→20% A；5~20 min，20%→27% A；20~45 min，27% A；45~55 min，27%→30% A；55~56 min，30%→41% A；56~60 min，41% A；60~70 min，41%→50% A；70~90 min，50%→55% A；90~95 min，55%→15% A；95~100 min，15% A），流速1.0 mL&#183;min^-1，检测波长325 nm，柱温25℃。采用"中药色谱指纹图谱相似度评价系统"建立指纹图谱并进行相似度评价，利用SPSS 20.0软件进行聚类分析。对二氢欧山芹醇、蛇床子素、异欧前胡素和二氢欧山芹醇当归酸酯的含量测定进行方法学考察。结果：建立了独活的指纹图谱，标定了21个共有峰，18批独活药材与对照图谱的相似度均≥ 0.85，聚类分析将其分为3类。二氢欧山芹醇、蛇床子素、异欧前胡素和二氢欧山芹醇当归酸酯线性范围分别为2.250~36.000、34.500~552.000、1.375~22.000和9.375~150.000 μg&#183;mL^-1，线性关系良好（r ≥ 0.999 7）；重复性试验RSD<2%，平均加样回收率在94.1%~100.6%之间。18批样品中二氢欧山芹醇、蛇床子素、异欧前胡素和二氢欧山芹醇当归酸酯的含量分别为0.009 3%~0.110 1%，0.498 9%~1.664 1%，0.007 1%~0.045 0%和0.065 4%~0.569 0%。结论：独活指纹图谱专属性强，结合4个香豆素类成分的含量测定可较全面控制独活的质量。