目的：建立采用超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）同时测定中药材及饮片中29种合成着色剂的方法。方法：中药材以70%乙醇为提取溶剂进行超声提取，离心后取上清液以Acquity TM UPLC BEH C₁₈色谱柱（1.7 μm，2.1 mm×100 mm）进行分离，以0.02 mol·L^-1醋酸铵溶液和甲醇为流动相进行梯度洗脱，流速为0.2 mL·min^-1。采用电喷雾离子源进行正离子模式监测，选择反应监测模式（SRM）用于定量分析。结果：在相应的浓度范围内，29种色素的质量浓度与峰面积呈良好的线性关系，r ≥ 0.95；检测下限在0.1~0.26 ng之间；平均回收率范围为86.3%~116.3%，方法的相对标准偏差为0.61%~3.76%。结论：该方法分析速度快，灵敏度高，检测的色素种类较为全面，可用于中药材中非法染色的筛查。