目的：建立碱处理微量黄芪药材测定黄芪皂苷Ⅳ、毛蕊异黄酮葡萄糖苷和芒柄花苷含量的方法，表征碱处理提高上述指标成分收率的有关物质转化特征。方法：取传统采收期黄芪根0.15 g，按1∶30的比例加入70%乙醇（内含不同浓度的氨水），超声提取，进行碱处理体系的优化。利用UPLC-QTRAP-MS多反应离子监测模式，采用BEH C₁₈（2.1mm×50 mm，1.7 μm）色谱柱，以0.1%甲酸水（A）-乙腈（B）为流动相，梯度洗脱，流速：0.2 mL·min^-1，柱温：30℃，测定黄芪皂苷IV含量；采用2015年版《中华人民共和国药典》黄芪含量测定项下毛蕊异黄酮葡萄糖苷色谱条件，HPLC法测定毛蕊异黄酮葡萄糖苷和芒柄花苷含量；UPLC-Q-TOF-MS法进行有关化合物的指认。结果：用含4%氨水的70%乙醇提取时，三质控指标成分收率最高，对应的检测线性范围分别为10.70~85.60 μg·mL^-1、1.039~72.73 μg·mL^-1和1.051~73.57 μg·mL^-1。该优化体系中，黄芪皂苷Ⅰ、酰基化毛蕊异黄酮葡萄糖苷和酰基化芒柄花苷转化较为完全，黄芪皂苷Ⅱ部分转化；此外，还存在一未知化合物向黄芪皂苷Ⅳ的明显转化。采用该优化体系分析发现，根施外源正己醛组黄芪药材中黄芪皂苷Ⅳ含量明显高于对照，但两异黄酮组分组间无显著差异。结论：建立了一种碱处理微量黄芪测定黄芪皂苷Ⅳ、毛蕊异黄酮葡萄糖苷和芒柄花苷含量的方法，该方法显著提高了黄芪药材中3个质控指标成分的收率，可应用于微量黄芪的质量评价与品质形成研究。