目的：建立护肝片的HPLC指纹图谱，并测定其主要成分的含量，为护肝片的质量控制提供可靠方法。方法：采用Agilent Zorbax SB-C₁₈色谱柱（250 mm&#215;4.6 mm，5 μm），以乙腈（A）-0.05%磷酸水溶液（B）为流动相，梯度洗脱（0~6 min，6% A；6~9 min，6% A→40% A；9~30 min，40% A→50% A；30~45 min，50% A；45~65 min，50% A→75% A），流速1.0 mL&#183;min^-1，检测波长250 nm，柱温30℃；建立护肝片HPLC指纹图谱，并对（R，S）-告依春、柴胡皂苷a、五味子醇甲、柴胡皂苷d、五味子酯甲、五味子甲素和五味子乙素的含量测定方法进行方法学考察。结果：在指纹图谱研究中，共确定护肝片HPLC指纹图谱20个共有峰，通过与混合对照品比较，指认其中7个指标成分，分别是（R，S）-告依春（1号峰）、柴胡皂苷a（3号峰）、五味子醇甲（5号峰）、柴胡皂苷d（6号峰）、五味子酯甲（8号峰）、五味子甲素（17号峰）和五味子乙素（20号峰），利用相似度软件对23批样品指纹图谱进行分析，各批样品相似度均在0.95以上。在建立的色谱条件下测定7个成分，分离度良好，方法精密度和重复性的RSD均<1.5%，供试品溶液在24 h内稳定，各成分具有良好的线性关系和较宽线性范围；6批护肝片中（R，S）-告依春、柴胡皂苷a、五味子醇甲、柴胡皂苷d、五味子酯甲、五味子甲素和五味子乙素质量分数分别为0.07~0.12、0.13~0.20、0.51~0.58、0.06~0.13、0.07~0.14、0.10~0.17和0.18~0.23 mg&#183;片^-1。结论：所建立的护肝片HPLC指纹图谱检测和定量测定分析方法快速、准确，可以有效地评价护肝片的质量。