目的：建立加速溶剂萃取-高效液相色谱法同时测定全叶千里光药材中绿原酸、芦丁和金丝桃苷3种活性成分的含量。方法：运用正交设计试验优化加速溶剂萃取法（ASE法）的提取工艺，提取样品中的有效成分，比较ASE法、回流提取法和超声辅助提取法的提取效果；采用C₁₈色谱柱，以乙腈-0.3%磷酸水溶液为流动相，梯度洗脱，流速为1.0 mL·min^-1，柱温为25 ℃，检测波长为350 nm，以高效液相色谱进行分析。结果：正交试验设计优化ASE法，优化得到的最佳萃取条件为：以体积分数60%甲醇为提取溶剂，在4.8 MPa和65 ℃下，静态提取2次，每次17 min，提取液经旋转蒸发浓缩近干，以甲醇溶解并定容。经条件优化后ASE萃取得到的全叶千里光药材中3种主要活性成分的提取效果均高于传统的回流提取法和超声提取法；全叶千里光中绿原酸、芦丁和金丝桃苷3种被测成分的质量浓度分别在1.5~100.0、0.5~80.0和0.5~80.0 mg·L^-1范围内与其峰面积呈良好的线性关系，线性相关系数均大于0.999 0，检出限为0.08~0.15 mg·L^-1，样品的加标平均回收率为93.5%~102.0%，RSD为0.73%~3.47%（n=3）。变种全叶千里光和原变种麻叶千里光中绿原酸、芦丁和金丝桃苷的平均含量分别为1.65和0.77、0.09和0.10、0.68和0.45 mg·g^-1。结论：该方法可用于全叶千里光药材中3种主要化学成分的含量测定，其结果可为全叶千里光药材质量控制、合理用药及进一步研究开发提供参考。