目的：建立可同时检测育发液中斑蝥素、米诺地尔、雌三醇、雌二醇、睾酮、甲睾酮、雌酮、己烯雌酚、黄体酮9种禁限用物质的液相色谱-质谱法。方法：采用CAPCELL PAK MG C₁₈色谱柱（150 mm×2 mm，5 μm）进行分离，以10 mmol·L^-1醋酸铵溶液（A）-乙腈（B）为流动相进行梯度洗脱（0~12 min，90%A→50%A；12~13 min，50%A→60%A；13~20 min，60%A；20~30 min，60%A→20%A；30~31 min，20%A→90%A；31~40 min，90%A），流速0.2 mL·min^-1；使用加热电喷雾离子源，正负离子检测，采用选择反应监测扫描方式。结果：斑蝥素、米诺地尔、雌三醇、雌二醇、睾酮、甲睾酮、雌酮、己烯雌酚、黄体酮质量浓度分别在1~100、0.001~0.05、0.25~25、15~300、0.05~5、0.1~5、0.06~3、0.02~2、0.05~5 μg·mL^-1范围内均有良好的线性关系（r≥0.998）；最低检出浓度分别为1.25、0.001、0.25、15、0.05、0.1、0.08、0.02、0.05 μg·g^-1，最低定量浓度分别为5、0.005、1.25、75、0.25、0.5、0.3、0.1、0.25 μg·g^-1。在12批育发液样品中检出2批非法添加了米诺地尔。结论：本研究建立的方法可同时定性定量检测育发液中性激素、斑蝥素与米诺地尔等9种禁限用物质。