目的：为临床研究依维莫司人体药动学建立一种特异、灵敏、快速、重现性好的在线固相萃取（onlineSPE）-液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）方法，并将其应用于依维莫司在中国健康人群药动学研究。方法：200 μL含依维莫司全血样本与20 μL内标混合后经0.4 mol·L^-1硫酸锌80%甲醇水溶液处理，取上清液经在线固相萃取，以含0.1%甲酸5 mmol·L^-1甲酸铵水溶液-含0.1%甲酸甲醇溶液（10：90）为流动相，Waters SunFire^TM C₁₈色谱柱（4.6 mm×150 mm，3.5 μm）为分析柱，进样量50 μL，室温下测定；采用正离子模式，MRM扫描，依维莫司m/z 975.8→908.6，内标m/z 809.6→756.7，分析时间为5 min。12例健康受试者口服1.5 mg依维莫司片，于不同时间点分别采集静脉血进行药代动力学分析。结果：依维莫司质量浓度在0.201~100.7 ng·mL^-1的范围内线性良好（r=0.999 8±0.000 2），最低定量限为0.201 ng·mL^-1，回收率在99.2%~105.4%之间，以RSD表示的日内与日间精密度均小于8%，过程效率良好，所有稳定性考察项目结果均符合要求。药动学结果显示，健康受试者口服依维莫司片1.5 mg后，依维莫司在人体内平均达峰时间t_max为0.69 h，平均药峰浓度C_max为10.56 ng·mL^-1，0~96 h时间段药时曲线下面积AUC为AUC_{0-96 h} 65.70 ng·mL^-1·h，平均半衰期t_1/2 36.50 h。结论：本法经方法学验证，可用于依维莫司的药动学研究和血药浓度监测。