生物检定

高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法测定b型流感嗜血杆菌结合疫苗多糖及游离多糖的含量

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  • 中国食品药品检定研究院呼吸道细菌疫苗室, 卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室, 北京 100050

网络出版日期: 2024-05-31

Determination of polysaccharide and free polysaccharide contents of Haemophilus influenzae type b conjugate vaccine by high performance anion-exchange chromatography with pulsed amperometric detection

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  • Key Laboratory for Quality Control Method and Standardization of Biotechnical Products, National Institutes for Food and Drug Control, Beijing 100050, China

Online published: 2024-05-31

摘要

目的:建立高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法(HPAEC-PAD)测定b型流感嗜血杆菌(Hib)结合疫苗的多糖及游离多糖含量。方法:将疫苗中的有效抗原成分-Hib多糖,其结构为多聚磷酸核糖基核糖醇(polyribosylribitol phosphate,PRP),用6 mol·L-1盐酸进行水解,得到其核糖醇(ribitol)单体;使用CarboPac® MA1阴离子交换柱(4 mm×250 mm),以580 mmol·L-1氢氧化钠溶液为流动相,流速为0.4 mL·min-1,柱温35℃,进样体积100 μL,脉冲安培检测器收集信号,核糖醇的含量以峰面积计算得到,再根据核糖醇占PRP干重的质量分数(41.3%),计算出Hib结合疫苗中PRP及游离多糖(Free PRP)的含量,并评估该方法的重复性和再现性。结果:核糖醇质量浓度在0.075~1.05 μg·mL-1范围内,与峰面积响应值呈良好的线性关系(r=0.999 9),最低检测限为2.5 ng·mL-1;标准品供试溶液连续进样6次,峰面积及保留时间的RSD均小于5%;核糖醇加标回收率在80%~120%之间;对来自5个企业的4个不同批次的Hib结合疫苗的PRP及Free PRP含量进行测定,结果均符合规定。结论:本方法在测定Hib结合疫苗的PRP及Free PRP含量时,样品前处理简单,分离效果好,且灵敏度高,结果稳定,可靠,对控制该疫苗的质量具有重要意义。

本文引用格式

唐静, 赵丹, 李红, 李亚南, 李茂光, 陈翠萍, 叶强 . 高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法测定b型流感嗜血杆菌结合疫苗多糖及游离多糖的含量[J]. 药物分析杂志, 2016 , 36(10) : 1804 -1809 . DOI: 10.16155/j.0254-1793.2016.10.14

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