目的：建立反相高效液相色谱法测定半夏及其主要伪品掌叶半夏、水半夏与天南星中尿嘧啶、胞苷、次黄嘌呤、尿苷、腺嘌呤、次黄嘌呤核苷、鸟苷、胸苷和腺苷含量。方法：采用Diamonsil C₁₈色谱柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），以水-甲醇为流动相，梯度洗脱，流速0.8 mL·min^-1，检测波长262 nm，柱温25℃，进样量50 μL。结果：尿嘧啶、胞苷、次黄嘌呤、尿苷、腺嘌呤、次黄嘌呤核苷、鸟苷、胸苷和腺苷质量浓度分别在0.12~5.80 μg·mL^-1（r=1.000 0）、0.17~8.40 μg·mL^-1（r=0.999 9）、0.17~8.48 μg·mL^-1（r=0.999 9）、0.16~8.08 μg·mL^-1（r=1.000 0）、0.16~8.16 μg·mL^-1（r=0.999 9）、0.15~7.68 μg·mL^-1（r=0.999 8）、0.16~7.84μg·mL^-1（r=0.999 9）、0.17~8.72 μg·mL^-1（r=1.000 0）、0.16~8.24 μg·mL^-1（r=0.999 8）范围内线性关系良好；平均加样回收率（n=6）分别为102.31%（RSD=1.08%）、101.67%（RSD=0.33%）、101.77%（RSD=1.37%）、99.24%（RSD=0.85%）、99.98%（RSD=0.73%）、96.73%（RSD=4.05%）、102.11%（RSD=0.47%）、103.56%（RSD=1.97%）、97.01%（RSD=1.62%）；不同来源与产地的半夏与其伪品（掌叶半夏、水半夏、天南星）的各核苷含量差别较大，其中胸苷在天南星中未检出。半夏中9种核苷总量在626.7~1 063 μg·g^-1之间，掌叶半夏在638.6~1 132 μg·g^-1之间，水半夏核苷总量为107 6 μg·g^-1，天南星为756.2 μg·g^-1。结论：本法初步建立了测定半夏及其伪品中9种核苷类成分含量的方法，可用于半夏药材的质量控制。