目的：建立柱前衍生-高效液相色谱法测定茯苓中18种氨基酸的含量。方法：以6 mol·L^-1盐酸150℃水解1 h，以异硫氰酸苯酯为柱前衍生化试剂衍生后进样分析。采用C₁₈110A色谱柱（250 mm×4.6mm，5 μm），柱温43℃，流动相A为0.1 mol·L^-1醋酸钠缓冲液（以醋酸调pH 6.5）-乙腈（93：7），流动相B为乙腈-水（4：1），进行梯度洗脱，流速1.0 mL·min^-1，检测波长254 nm。结果：天冬氨酸（Asp）、谷氨酸（Glu）、丝氨酸（Ser）、甘氨酸（Gly）、组氨酸（His）、精氨酸（Arg）、苏氨酸（Thr）、丙氨酸（Ala）、脯氨酸（Pro）、酪氨酸（Tyr）、缬氨酸（Val）、蛋氨酸（Met）、异亮氨酸（Ile）、亮氨酸（Leu）、苯丙氨酸（Phe）、赖氨酸（Lys）、胱氨酸（Cys）、色氨酸（Trp）共18种氨基酸质量浓度在5.889~119.0 μg·mL^-1范围内呈良好线性关系（r=0.999 9~1.000）；平均回收率在93.3%~106.2%之间，RSD均小于3.0%。各产地均以脯氨酸、蛋氨酸和丝氨酸含量为最高；聚类分析将12个产地分为三类。结论：本方法可用于茯苓药材的质量控制。