目的：采用二维液相色谱法检测注射用核糖核酸Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ中苯酚的残留量，并对方法进行验证。方法：一维色谱采用ACQUITY UPLC BEH200SEC（150 mm×4.6 mm，1.7 μm；填料：亚乙基桥杂化二醇包膜颗粒）色谱柱，流动相为0.1 mol·L^-1 磷酸二氢钠溶液（pH 7.0），流速0.2 mL·min^-1，检测波长267 nm，柱温30 ℃；二维色谱采用Inertsil ODS SP（4.6 mm×250 mm，5 μm；填料：高纯硅胶）色谱柱，以ZORBAXSB-Aq 保护柱（4.6 mm×20 mm，5 μm；填料：经二异丙基修饰的硅氧烷键合硅胶）作为富集柱，流动相为25% 甲醇，流速1.0 mL·min^-1，检测波长267 nm，柱温30 ℃。检测核糖核酸（RNA）样品分别为来自健康猪肝脏的核糖核酸Ⅰ，来源于牛胰脏的核糖核酸Ⅱ，以及来源于猪脾脏的核糖核酸Ⅲ。结果：苯酚质量浓度在0.246 6~2.219 4 μg·mL^-1 范围内与峰面积呈良好线性（r=0.999 7），回收率在99.7%~100.3%；企业A的注射用核糖核酸Ⅰ和企业D 的注射用核糖核酸Ⅲ样品中均未检出苯酚，企业B 的注射用核糖核酸Ⅰ样品中苯酚残留量为0.002%，企业C 的注射用核糖核酸Ⅱ样品中苯酚残留量为0.008%。结论：本实验建立的二维液相色谱方法能用于注射用核糖核酸Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ中苯酚残留量的检测。