目的：建立稳定表达含无义突变位点荧光素酶的细胞株，用以筛选新的无义突变通读剂。方法：酶切质粒pGL4-WT和pGL4-MUT，得到野生型和无义突变荧光素酶编码cDNA，分别插入到慢病毒载体pLVX-IRES-Neo多克隆位点。酶切及PCR鉴定后，将重组载体包装成慢病毒颗粒，感染HEK 293细胞，单克隆细胞抗性筛选获得稳定细胞株，提取总RNA，经逆转录PCR方法验证荧光素酶mRNA表达。最后用已知阳性无义突变通读剂G 418处理细胞，Western blot方法检测处理前后荧光素酶蛋白表达水平，同时分析荧光素酶活性。结果：经酶切获得2.7 kb长野生型和无义突变荧光素酶编码cDNA，与pLVX-IRES-Neo连接获得重组慢病毒载体pLVX-WT、pLVX-MUT，EcoR Ⅰ单酶切、Nhe Ⅰ与BamH Ⅰ双酶切结果证明序列正确插入，PCR也扩增出目的片段；稳定感染慢病毒的HEK293WT和HEK293MUT细胞经逆转录PCR方法成功检测到荧光素酶mRNA表达；阳性通读剂G 418处理细胞后发现，HEK293WT细胞在处理前后均表达荧光素酶蛋白，荧光素酶活性也基本相同，而HEK293MUT细胞在处理前不表达荧光素酶蛋白，无荧光素酶活性，处理后恢复了部分荧光素酶蛋白表达，其荧光素酶活性相当于HEK293WT细胞的20%。结论：成功建立了稳定表达无义突变荧光素酶的细胞株，可用于筛选新的无义突变通读剂。