目的：建立HPLC法同时测定钩吻茎中胡蔓藤碱丙、钩吻素甲、钩吻素子、钩吻素己、钩吻绿碱和胡蔓藤碱乙的含量，并比较评价各产地钩吻生物碱含量的差异。方法：采用外标法进行测定，色谱柱为ZORBAXBonus-RP Analytical（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相为甲醇-0.1%甲酸水梯度洗脱，流速1.0 mL·min^-1，检测波长254 nm，柱温30℃。分别测定32批钩吻茎，并进行聚类分析。结果：胡蔓藤碱丙、钩吻素甲、钩吻素子、钩吻素己、钩吻绿碱、胡蔓藤碱乙6个成分的线性范围分别为1.00~50.06 μg·mL^-1（r=1.000 0）、1.13~50.85 μg·mL^-1（r=0.999 8）、1.16~52.20 μg·mL^-1（r=1.000 0）、1.16~52.20 μg·mL^-1（r=0.999 7）、1.06~50.88 μg·mL^-1（r=0.999 7）和1.01~50.50 μg·mL^-1（r=1.000 0），平均加样回收率为93.1%~103.8%（RSD为2.0%~2.9%）。不同产地样品中钩吻茎中胡蔓藤碱丙、钩吻素甲、钩吻素子、钩吻素己、钩吻绿碱和胡蔓藤碱乙含量范围分别为0.136~2.202、0.564~2.686、0.718~3.553、0.160~2.025、0.151~3.493、0.288~4.700mg·g^-1。结果显示不同产地的钩吻6个成分含量均有差异，32批不同产地钩吻药材可聚为6大类。结论：该法可为钩吻多指标成分的质量评价提供参考。不同产地钩吻的各个化学成分的含量呈现明显分类特点，为钩吻地区鉴定提供依据。