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基于ITS2条形码的玛咖药材鉴别及9种元素的测定

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  • 1. 成都中医药大学药学院, 教育部中药材标准化重点实验室, 中药资源系统研究与开发利用省部共建国家重点实验室培育基地, 成都 611137;2. 成都市食品药品检验研究院, 成都 610000;3. 成都汇众成生物科技公司, 成都 611137

网络出版日期: 2024-05-31

Identification of Lepidium meyenii Walp. based on ITS2 sequence analysis and determination of 9 elements

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  • 1. Pharmacy College, Chengdu University of TCM, The Ministry of Education Key Laboratory of Standardization of Chinese Herbal Medicine, The Breeding Base of State Key Laboratory of Resources Systems Research and Development Utilization of Chinese Herbal Medicines Constructed by The Ministry of Science and Technology of the PRC and Sichuan Province, Chengdu 611137, China;
    2. Chengdu Institute for Food and Drug Control, Chengdu 610000, China;
    3. Chengdu Huizhong of Biological Technology Company, Chengdu 611137, China

Online published: 2024-05-31

摘要

目的:利用DNA分子鉴别技术,从分子水平快速、准确鉴别玛咖药材及其同科混伪品植物;采用石墨炉原子吸收分光光度法(GFASS)和火焰原子吸收分光光度法(FASS)测定不同产地玛咖中镉(112Cd)、铜(63Cu)、铅(207Pb)、铬(52Cr)4种有害重金属元素以及钙(40Ca)、镁(24Mg)、钠(23Na)、钾(39K)、铁(56Fe)5种元素的含量,并进行安全性评价。方法:利用DNA试剂盒提取玛咖及其混伪品(萝卜、芫根)样本共9个,PCR扩增其提出的DNA并进行双向测序,应用CodonCode Aligner V 6.0.2软件对峰图进行校对拼接,比较其内转录间隔区2(ITS2)的GC含量,结合在GenBank上下载的7条序列,采用MEGA 6.0软件计算种内、种间Kimura 2-parameter(K2P)遗传距离,最后构建邻接树(NJ tree)进行系统聚类分析。采用微波消解进行前处理,使用石墨原则吸收法和火焰原子吸收法分别对不同产地玛咖中的9种元素进行测定,对比《药用植物及制剂进出口绿色行业标准》,对玛咖的安全性进行评价。结果:玛咖的ITS2序列长度为190bp,其中GC含量为54.7%,同时其二级结构明显与其混伪品存在差异,可以根据NJ tree将其与其他混伪品区分开来。微量元素标准曲线线性相关度均大于0.999 0,Cd、Cu、Pb、Cr、Ca、Mg、Na、K、Fe元素的回收率分别为93.2%、96.7%、95.4%、102.7%、94.3%、95.7%、105.9%、96.4%、98.1%。参照《药用植物及制剂进出口绿色行业标准》中的重金属元素限量标准,部分产地玛咖中的Cd元素含量超标,并且不同产地玛咖中各个元素的含量有一定的差异。结论: ITS2可以作为DAN条形码对玛咖与其混伪品进行准确、快速的鉴别,为玛咖的鉴定提供准确的分子依据。GFASS法快速、准确,灵敏度高,无背景影响,成本低廉,可较好地用于中药材中重金属残留量的测定,并且通过对玛咖中元素的研究,对确保其质量和安全性有着重要的意义。

本文引用格式

王江瑞, 陈文仿, 许莉, 方成鑫, 刘红梅, 郭力, 王岚 . 基于ITS2条形码的玛咖药材鉴别及9种元素的测定[J]. 药物分析杂志, 2017 , 37(4) : 677 -687 . DOI: 10.16155/j.0254-1793.2017.04.19

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