目的：建立重组人促卵泡激素（rhFSH）N端不均一性的分析方法，并对不同企业样品rhFSH原液的N端不均一性进行比对研究。方法：通过对亚基的还原与烷基化处理方法、糖苷酶切条件及RP-HPLC条件的优化，将完整与N端缺失氨基酸的亚基有效分离，建立了2种rhFSH的N端不均一性分析方法，并利用质谱分别对目的蛋白进行定性鉴别。以国内外企业的rhFSH原液为样品进行N末端不均一性比较。结果：建立的2种RP-HPLC方法均可实现完整与缺失β亚基的有效分离，各样品rhFSH的N端不均一性基本一致。结论：rhFSH国内生物类似药与国外参照药的N端不均一性比较有较高的相似性；本实验建立的2种RP-HPLC方法可评价产品质量，为生物类似药的可比性研究提供技术支持。