目的：建立气相色谱法测定灵芝孢子油中7个脂肪酸（肉豆蔻酸、十五烷酸、棕榈酸、十七烷酸、硬脂酸、油酸和亚油酸）含量的分析方法。方法：采用HP-FFAP（30 mm×0.32 mm×250 μm）色谱柱，程序升温的方式对灵芝孢子油中7个脂肪酸含量进行测定研究。结果：各脂肪酸线性关系良好，重复性RSD均在3.0%以下，加样回收率（n=9）在96.6%~103.3%之间；样品测定结果显示在灵芝孢子油脂肪酸中，不饱和的脂肪酸约占总量的76.41%，以油酸和亚油酸为主，饱和脂肪酸以棕榈酸和硬脂酸为主，约占总量的18.05%。结论：该方法可作为检测灵芝孢子油中7个脂肪酸的推广方法。