目的：利用亲水色谱-质谱联用技术对人尿中15个内源性糖类化合物进行快速测定。方法：分别对色谱条件、质谱条件和样品前处理方法进行优化，最终以含内标的甲醇-乙腈（50∶50，v/v）为沉淀剂，按体积比5∶1加入到尿液中除杂，以含10 mmol·L^-1醋酸铵的水-乙腈（95∶5，v/v）和含10 mmol·L^-1醋酸铵的乙腈-水（95∶5，v/v）为流动相，梯度洗脱，样品经ACQUITY UPLC BEH Amide（2.1 mm×100 mm，1.7μm）色谱柱分离，在多反应监测（MRM）模式下，采用电喷雾离子化源、负离子扫描模式进行定量分析。结果：人尿中糖类物质线性关系良好，大部分糖类物质r>0.99，最低检测限在0.075~30 nmol·L^-1之间；日内、日间精密度范围分别为2.5%~7.6%和3.3%~7.3%，均小于15%；回收率范围为85.5%~115%；大部分化合物的基质效应在80%~120%之内，样品上清液4℃稳定性好，72 h内浓度变化范围为93.1%~106%，最终测得20例健康人尿液中各糖的含量分别为（平均值±标准误差）：楝二糖（2 668.1±134.4）nmol·L^-1，蔗糖（5 070.6±277.6）nmol·L^-1，麦芽糖（15 214.5±442.5）nmol·L^-1，麦芽三糖（849.7±42.6）nmol·L^-1，葡萄糖（173 965.0±4 918.9）nmol·L^-1，果糖（22 172.5±1 463.6）nmol·L^-1，棉子糖（292.1±17.6）nmol·L^-1，肌苷（2 083.5±93.4）nmol·L^-1，腺苷（2 645.5±78.2）nmol·L^-1，甘露糖醇（83 925.0±3 938.6）nmol·L^-1，赤藓糖醇（375 805.0±12 094.6）nmol·L^-1，阿拉伯糖醇（192 921.1±5 689.2）nmol·L^-1，麦芽四糖、木糖和核糖均低于定量限（分别低于60、600和3 000 nmol·L^-1）。结论：该方法能快速测定人尿液中15个内源性糖类化合物含量，对代谢组学后期的靶标验证、代谢机理研究等具有重要意义。