目的：建立重组人促红细胞生成素的理化对照品的质量标准，对8家企业的促红素理化对照品进行质量评价。方法：用正常小鼠网织红细胞计数法测定体内生物学活性，使用LC-MS绘制质量肽图谱。色谱条件：采用BEH300 C₄色谱柱（2.1 mm×50 mm，3.5 μm），流动相为水（A）-乙腈（B）-1%甲酸水溶液（C），梯度洗脱（0~60 min，1% B→60% B，10% C；60~61 min，60% B→90% B，10% C；61~75 min，90% B→1% B，10% C），流速0.2 mL·min^-1，柱温为40℃，样品保存温度为10℃，上样量5 μL；质谱条件：MS^E模式采集数据，毛细管电压3 000 V，Cone电压40 V，去溶剂气体温度350℃，源温120℃，去溶剂气体流速800 L·h^-1，扫描范围m/z 50~2 000。确证一级结构，二硫键链接方式及糖基化位点；绘制N糖图谱，分析寡糖结构；用毛细管区带电泳分析异构体。采用压力进样3.45 kPa；进样时间10 s，分离电压15.4 kV，分离时间80 min，检测波长214 nm。其余检测项目按中国药典2015年版三部方法进行。结果：建立的方法适合促红素理化对照品的检测，各样品的氨基酸序列均与理论一致；二硫键连接方式均为Cys7-Cys161、Cys29-Cys33；O-糖基化位点均为Ser126，N-糖基化位点均为Asn24、Asn38、Asn83；各样品的糖基修饰方式存在差异，不同糖型的相对比例不一致。等电聚焦结果为5~8条电荷异构体条带，不同样品的电荷异构体的组成比例有所差异，蛋白质含量、体内比活性、电泳纯度、液相纯度、等电聚焦、唾液酸含量、N端氨基酸序列、肽图结果均符合拟定的理化对照品质量标准。结论：建立了理化对照品的质量标准，不同企业的理化对照品质量总体稳定一致，但糖基化水平存在一定差异，分析比较了不同企业的促红素理化对照品在生物比活性，糖基化，异构体分布、电荷异质性等方面的差异。