目的：建立同时测定口腔溃疡散II号中靛蓝和靛玉红含量的HPLC方法，用以检测该制剂的质量。方法：采用正交设计优化超声提取方法，以溶剂体积、提取时间、提取温度为主要影响因素，以靛蓝和靛玉红的提取总量为评价指标。采用ZORBAX SB-C₁₈（4.6 mm×250 mm，5 μm）色谱柱，流动相组成为乙腈-水（65：35），流速1.0 mL·min^-1，检测波长286 nm，柱温20 ℃。结果：确定最佳提取方法为0.3 g供试品用30 mL N，N-二甲基甲酰胺在40~45 ℃条件下超声提取40 min。靛蓝和靛玉红进样量分别在59.77~1 195 ng（r=1.000）和6.300~126.0 ng（r=0.999 8）范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系；平均回收率分别为99.1% 和100.4%，RSD分别为2.8%和2.1%（n=6）。6批样品中靛蓝、靛玉红的含量分别为6.219~6.423、0.495~0.631 mg·g^-1。结论：本文建立的方法经方法验证，可用于口腔溃疡散II号中靛蓝和靛玉红的定量分析。