目的：建立抗菌乳膏药物中痕量地塞米松和倍他米松的超高效液相色谱-串联质谱定性定量分析方法。方法：以泼尼松为内标，抗菌乳膏样品经处理后加乙腈提取，提取液经HLB固相萃取小柱纯化富集，进样2 μL测定。色谱柱：Shim-pack XR-ODS Ⅲ（1.6 μm，50 mm×2.0 mm），流动相：乙腈-水，梯度洗脱，流速0.4 mL·min^-1，分析时间14 min；采用电喷雾离子源（ESI+）、多反应监测模式（MRM），地塞米松和倍他米松定量离子对为m/z 393.2→373.0，内标泼尼松离子对为m/z 359.2→146.9。结果：地塞米松和倍他米松在1~41 ng·mL^-1浓度范围内线性关系良好，定量限为12.5 μg·kg^-1，检出限为5 μg·kg^-1，方法回收率为100%~108%。结论：本方法可用于抗菌乳膏药物中痕量地塞米松和倍他米松的监测。