目的：建立超快速液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱法（RRLC-Q-TOF-MS法）快速鉴定三叶青叶化学成分，根据鉴定的黄酮成分建立相适应的紫外-可见分光光度法（UV-Vis法），测定三叶青叶中总黄酮的含量。方法：RRLC-Q-TOF-MS法采用CORTECS C₁₈色谱柱（2.1 mm×100 mm，1.6 μm），流动相为乙腈（A）-0.1%甲酸水溶液（B），梯度洗脱，流速0.25 mL·min^-1，柱温45℃；飞行时间质谱采用负离子全扫描模式，数据采集范围m/z 50~1 000，通过一级质谱和二级质谱、相关文献及对照品推测鉴定化学成分。根据鉴定的黄酮进行3种总黄酮显色方法比较，确定三乙胺法显色，以UV-Vis法在400 nm波长处测定三叶青叶总黄酮含量。结果：采用RRLC-Q-TOF-MS共鉴定了三叶青叶中异荭草苷、荭草苷、异荭草素鼠李糖苷、荭草素鼠李糖苷、牡荆苷、异牡荆苷、牡荆素鼠李糖苷、异牡荆素鼠李糖苷共8个主要黄酮类成分；采用UV-Vis法测定三叶青叶总黄酮含量，以牡荆苷计，质量浓度在1.956~9.780 μg·mL^-1范围内与吸光度值呈良好线性关系（r=0.999 5），平均加样回收率99.8%（RSD=3.4%），三叶青叶总黄酮含量范围为13.38~28.67 mg·g^-1。结论：本文建立RRLC-Q-TOF-MS联用技术，为鉴定三叶青叶的黄酮成分提供了一种快速、高效的定性分析方法；建立以三乙胺显色的UV-Vis法定量分析三叶青叶总黄酮方法准确，为综合评价三叶青叶的质量提供参考。