目的：建立同时测定荆防败毒口服液中4个有效成分（升麻素苷、紫花前胡苷、二氢欧山芹醇当归酸酯和欧当归内酯A）含量的LC-ESI/MS方法。方法：通过优化，建立了如下方法同时测定荆防败毒口服液中4个有效成分（升麻素苷、紫花前胡苷、二氢欧山芹醇当归酸酯和欧当归内酯A）：采用ACQUITY UPLCBEH C₁₈色谱柱（2.1 mm×50 mm，1.7 μm），柱温为30℃，以0.1%甲酸水溶液（A）-乙腈（B）为流动相，梯度洗脱（0~10 min，90% A → 0% A；10~11 min，0% A → 90% A；11~13 min，90% A），流速0.2 mL·min^-1，分析时间为13 min，进样量1 μL；采用ESI正负离子模式，多反应监测（MRM），应用Masslynx V4.1软件进行数据分析。结果：升麻素苷、紫花前胡苷、二氢欧山芹醇当归酸酯和欧当归内酯A能够在13 min内完全分离，质量浓度在一定范围内与峰面积呈良好的线性关系（r²>0.998），日内精密度RSD为0.19%~0.68%，日间精密度RSD为0.74%~1.9%，重复性RSD为0.11%~1.9%，稳定性RSD为3.3%~8.6%，加样回收率在97.7%~102.3%（RSD为0.50%~2.7%）；测得的4批样品中升麻素苷、二氢欧山芹醇当归酸酯、紫花前胡苷和欧当归内酯A的含量范围分别为2.27~2.52、6.35~7.06、143.14~180.534和0.076~0.186 μg·mL^-1。结论：该方法可以用于荆防败毒口服液中4个有效成分的含量测定和质量控制。