目的：建立气相色谱-质谱联用法测定乳酶生菌种的脂肪酸成分，并对各试样菌株间的同源性进行分析。方法：应用14%三氟化硼-甲醇法对菌株进行脂肪酸甲酯化，采用HP-5MS毛细管色谱柱（30 m×0.250 mm×0.25 μm），载气为氦气，程序升温（120℃，5 min；6℃·min^-1升至240℃，10 min；10℃·min^-1至260℃，2 min），进样口温度250℃，选择EI离子源，溶剂延迟3 min，质谱扫描m/z 35~450。结果：肠球菌属的菌株均具有十四碳烷酸、十六碳烷酸、十六碳烯酸、十八碳烷酸、十八碳烯酸及十九碳烷酸特征峰；批号为20100922和20101001的乳酶生片菌株与海氏肠球菌CGMCC1.595之间，6家生产企业的其他乳酶生片菌株与粪肠球菌140623和屎肠球菌CGMCC1.131之间，具有相似的气相色谱图及相近的脂肪酸组分比值。结论：本方法可用于乳酶生菌种的快速鉴定及同源性分析。