目的：建立HPLC波长切换法同时测定佛手药材中柚皮苷、橙皮苷、6，7-二甲氧基香豆素、5，7-二甲氧基香豆素和佛手柑内酯的含量。方法：采用Diamonsil C₁₈色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为乙腈（A）-0.1%醋酸水（B），二元梯度洗脱（0~15 min，18% A→26% A；15~18 min，26% A→49% A；18~25 min，49% A；25~28 min，49% A→100% A），流速1.0 mL·min^-1，柱温30℃，波长切换（0~15 min，在283 nm波长下检测柚皮苷和橙皮苷；15~28 min，在320 nm波长下检测6，7-二甲氧基香豆素、5，7-二甲氧基香豆素和佛手柑内酯）。结果：柚皮苷、橙皮苷、6，7-二甲氧基香豆素、5，7-二甲氧基香豆素和佛手柑内酯的进样量分别在9.3~186.6 μg（r=0.999 8）、40.6~812.8 μg（r=0.999 8）、8.4~167.7 μg（r=0.999 9）、80.6~1 612.8 μg（r=0.999 9）和4.3~86.4 μg（r=0.999 9）范围内呈良好的线性关系；平均回收率（n=6）分别为95.5%、98.9%、95.8%、100.2%、97.7%，RSD分别为3.0%、2.6%、1.8%、2.6%、3.0%。11批佛手样品中柚皮苷、橙皮苷、6，7-二甲氧基香豆素、5，7-二甲氧基香豆素和佛手柑内酯含量测定结果分别为0.019%~0.068%、0.028%~0.275%、0~0.075%、0.094%~0.501%、0.002~0.034%。结论：本法可用于佛手药材中柚皮苷、橙皮苷、6，7-二甲氧基香豆素、5，7-二甲氧基香豆素和佛手柑内酯的含量测定。