目的：比较盐酸多西环素与其主要有关物质体外抗菌活性及毒性，为制定该品种有关物质控制限度提供参考依据。方法：采用纸片扩散法和常量肉汤二倍稀释法考察盐酸多西环素主要有关物质的抗菌活性；采用中国仓鼠肺细胞（CHL）和斑马鱼动物模型评价其毒性。结果：多西环素主要有关物质的抗菌活性由强至弱顺序为美他环素、4-表多西环素（杂质C）、β-多西环素、2-乙酰-2脱氨甲酰多西环素（杂质F）；细胞毒性由大至小的顺序为杂质F、β-多西环素、杂质C、美他环素；致斑马鱼胚胎死亡和发育畸形由强至弱的顺序为杂质C、美他环素、杂质F、β-多西环素。结论：盐酸多西环素中毒性较强且抗菌作用较弱的杂质C及杂质F应单独的控制。