目的: 研究20名健康受试者单剂量口服2片酚麻美敏片(每片含对乙酰氨基酚325 mg,盐酸伪麻黄碱30 mg,氢溴酸右美沙芬15 mg,马来酸氯苯那敏2 mg)后氢溴酸右美沙芬及其代谢物O-去甲右美沙芬的人体药代动力学。方法: 以盐酸克仑特罗为内标,采用LC-MS/MS法ESI正离子化,选择性反应监测,同时测定人血浆中的氢溴酸右美沙芬及其代谢物O-去甲右美沙芬浓度;并采用β-葡萄糖醛酸酶酶解后测定O-去甲右美沙芬总量浓度,采用DAS 2.0计算药动学参数。结果: 测得血浆中游离氢溴酸右美沙芬和O-去甲右美沙芬的主要药代动力学参数分别为Cmax(4.4±4.6),(9.7±5.4)μg·L-1;Tmax(4.2±3.3),(1.8±0.8)h;AUC0-τ(61.0±84.2),(59.4±25.4)h·μg·L-1;t1/2(9.5±2.9),(6.0±2.8)h;MRT0-τ(13.8±5.5),(7.6±2.8)h。酶解后测得O-去甲右美沙芬的主要药代动力学参数为Cmax(536±165)μg·L-1;Tmax(2.1±0.6)h;AUC0-τ(3504±710)h·μg·L-1;t1/2(6.4±2.7)h;MRT0-τ(7.2±2.3)h。结论: 建立的LC-MS/MS测定法准确灵敏。健康受试者单剂量口服酚麻美敏片后的血浆中葡萄糖醛酸结合型O-去甲右美沙芬的浓度显著高于游离氢溴酸右美沙芬和O-去甲右美沙芬。
目的: 建立HPLC-DAD法同时测定通脉方中3'-羟基葛根素、葛根素、3'-甲氧基葛根素、葛根素芹菜糖苷、大豆苷和大豆苷元6个异黄酮类有效成分的含量。 方法: 采用Dikma DiamonsilTM C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),Dikma EasyGuard C18保护柱(20 mm×4.6 mm,5 μm);以0.5%醋酸乙腈-0.5%醋酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1,检测波长250 nm,柱温为25 ℃。 结果: 6个异黄酮类成分的线性范围分别为: 3'-羟基葛根素,6.25~200 μg·mL-1(r=0.9998);葛根素,31.25~1000 μg·mL-1(r=0.9996);3'-甲氧基葛根素,6.25~200 μg·mL-1(r=0.9999);葛根素芹菜糖苷,6.25~200 μg·mL-1(r=0.9998);大豆苷,6.25~200 μg·mL-1(r=0.9995);大豆苷元,1.25~40 μg·mL-1(r=0.9997)。平均加样回收率均在95.43%~103.9%,RSD均在0.40%~4.3%。 结论: 该方法准确,灵敏度高,重复性好,可用于通脉方中6个主要异黄酮类成分的含量测定。
目的: 测定雷丸中16种氨基酸的含量。 方法: 样品以6 mol·L-1盐酸于150 ℃水解1 h,以异硫氰酸苯酯(PITC)为衍生化试剂衍生后进行HPLC分析。采用Phenomenex Luna C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱,柱温为43 ℃;流动相A为0.1 mol·L-1醋酸钠缓冲液(以醋酸调pH 6.5)-乙腈(93∶ 7),流动相B为乙腈-水(4∶ 1),梯度洗脱,流速为1.0 mL·min-1;检测波长为254 nm。 结果: 16种氨基酸浓度在1.16~47.32 μg·mL-1范围内呈良好的线性关系(r=0.9998~1.000);平均回收率在93.3%~107.2%之间;RSD均小于3.0%。 结论: 本方法灵敏、准确,具有良好的重复性和稳定性,可用于雷丸中氨基酸的检测。
目的: 建立高效液相色谱法同时测定少腹逐瘀汤、少腹逐瘀汤减去蒲黄-五灵脂药对中绿原酸、咖啡酸、芍药苷、阿魏酸、肉桂酸含量,以评价蒲黄-五灵脂配伍对少腹逐瘀汤中化学成分溶出的影响。 方法: 采用SunFireTM C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱,以乙腈-0.5%醋酸水溶液为流动相,进行梯度洗脱,流速0.8 mL·min-1,二极管阵列检测器,检测波长323 nm、230 nm和277 nm,柱温30 ℃,外标法定量。 结果: HPLC-DAD分析测定结果表明,少腹逐瘀汤全方中咖啡酸、芍药苷、阿魏酸和肉桂酸含量均高于全方减去蒲黄-五灵脂药对,而绿原酸在少腹逐瘀汤全方中含量则低于全方减去蒲黄-五灵脂药对。 结论: 经过蒲黄-五灵脂配伍后可使少腹逐瘀汤全方中某些有效成分的溶出增加,为进一步揭示该方效应物质基础及配伍机理提供一定科学依据。
目的: 建立用替代对照品法测定重楼药材中重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅶ 4种重楼皂苷的含量测定方法。 方法: 采用高效液相色谱法,以柴胡皂苷d为替代对照品,使用Waters SymmetryShield RP18(4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱,以乙腈-水为流动相梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1,检测波长203 nm,柱温27 ℃,同时测定重楼药材中4种重楼皂苷的含量。 结果: 以柴胡皂苷d与4种重楼皂苷的峰面积比值和柴胡皂苷d与4种重楼皂苷的浓度比值得到的标准曲线具有良好的线性关系,加样回收率在101.6%~104.2%之间。 结论: 柴胡皂苷d作为替代对照品可同时测定重楼药材中重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅶ 4种重楼皂苷的含量。
目的: 建立乌鳖颗粒的定性定量方法。 方法: 采用薄层色谱法对处方中的制何首乌、白术、续断和枸杞子进行定性鉴别;采用高效液相色谱法测定制剂中2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷和川续断皂苷Ⅵ含量。HPLC色谱条件: 采用Hedera ODS-3 C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱,以乙腈-水为流动相进行梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1,检测波长212 nm,柱温30 ℃; 结果: 薄层色谱鉴别方法专属性强,阴性对照无干扰;含量测定结果表明,2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷进样量在0.04462~0.4462 μg范围内呈良好的线性关系(r=1.000),平均回收率为97.33%(RSD=1.3%,n=6);川续断皂苷Ⅵ进样量在0.6636~6.636 μg范围内呈良好的线性关系(r=1.000),平均回收率为100.3%(RSD=2.7%,n=6)。 结论: 本方法简便、准确,重复性好,可用于乌鳖颗粒的质量控制。
目的: 建立甘草提取物中4个活性成分甘草苷、异甘草苷、甘草素和异甘草素的测定方法,并评价酸水解法对4个黄酮类化合物含量测定的影响。 方法: 采用高效液相色谱法,分别测定乌拉尔甘草乙醇提取液和酸水解提取液中4个活性成分的含量。色谱柱为Agilent HC-C18(150 mm×4.6 mm,5 μm)柱,流动相为pH 3甲酸溶液-乙腈,梯度洗脱,流速0.8 mL·min-1,甘草苷和甘草素检测波长为276 nm,异甘草苷和异甘草素的检测波长为370 nm,柱温为25 ℃(室温)。 结果: 乌拉尔甘草乙醇提取液中甘草苷、异甘草苷、异甘草素占原药材的质量百分数分别为1.29%, 0.33%,0.01%,因药材中甘草素含量过低,未检出;酸水解提取液中甘草苷、异甘草苷、甘草素、异甘草素占原药材的质量百分数分别为0.71%,0.32%,0.26%,0.11%。 结论: 酸水解法能显著提高甘草素和异甘草素的含量测定值。
目的: 建立超高效液相色谱法检测小叶黑柴胡的根中柴胡皂苷a、d含量。 方法: 采用Waters Acquity UPLC系统,使用ACQUITY UPLC BEHTM C18(50 mm×2.1 mm,1.7 μm)色谱柱,流动相为乙腈-水,梯度洗脱,流速0.6 mL·min-1,检测波长203 nm,柱温30 ℃。 结果: 柴胡皂苷a线性范围为0.059~1.180 μg(r=0.9998),平均回收率为96.7%(RSD=1.3%,n=6);柴胡皂苷d线性范围为0.112~2.230 μg(r=0.9997),平均回收率为98.7%(RSD=1.5%,n=6)。 结论: 该方法操作简便,结果准确,可用于小叶黑柴胡的质量控制。
目的: 建立藏药当佐一测多评法,考察不同类型化合物之间采用相对校正因子进行含量测定的准确性和可行性。方法: 以藏药当佐为研究对象,通过建立胡椒碱与其他3个指标成分间的相对校正因子(RCF),并利用校正因子对没食子酸、羟基红花黄色素-A、桂皮醛的含量进行计算,实现一测多评(计算法);同时采用外标法测定当佐中该4个指标成分含量(实测法),并比较计算值与实测值之间的差异。结果: 在一定的线性范围内,胡椒碱与没食子酸、羟基红花黄色素-A、桂皮醛间的RCF分别为1.3686,0.2620,3.1333;且在不同实验条件下重现性良好(RSD分别为3.7%,2.2%,2.1%);不同来源当佐中4个成分含量的计算值与实测值间无明显差异(RSD<5%)。结论: 本研究建立的只用1个对照品同步测定当佐中4个成分的一测多评法是准确的、可行的,可用于不同类型化合物间的含量测定,为民族药物多指标质量评价提供新的思路。
目的: 建立同时测定栀子厚朴汤醇提液中栀子苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、和厚朴酚与厚朴酚含量的高效液相色谱方法。方法: 采用Hypersil C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱,以乙腈-水为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1,检测波长为238 nm(0~12 min)、283 nm(12~30 min)、294 nm(30~40 min),柱温30 ℃。结果: 栀子苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、和厚朴酚、厚朴酚的进样量分别在1.03~10.3 μg(r=0.9996)、0.184~1.84 μg(r=0.9996)、0.880~8.80 μg(r=0.9997)、0.478~4.78 μg(r=0.9996)、0.221~2.21 μg(r=0.9998)、0.538~5.38 μg(r=0.9998)范围内与各自峰面积值呈良好线性关系;平均回收率(n=6)分别为99.4%,99.2%,102.4%,100.3%,102.0%,99.8%。结论: 本方法简便、准确、可靠,可用于栀子厚朴汤醇提液的质量控制。
目的: 建立高效液相色谱法测定皖产古尼虫草中核苷和碱基成分(尿嘧啶、虫草素、腺苷、腺嘌呤、尿苷、次黄嘌呤、肌苷和鸟苷)的含量,并比较其与天然冬虫夏草核苷和碱基成分的异同。 方法: 采用Zorbax SB-Aq(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱,以水-乙腈为流动相,梯度洗脱,流速为0.8 mL·min-1,检测波长260 nm,柱温20 ℃。 结果: 尿嘧啶、虫草素、腺苷、腺嘌呤、尿苷、次黄嘌呤、肌苷和鸟苷进样浓度分别在0.38~191.08,0.37~188.48,0.37~189.72,0.37~190.92,0.37~188.55,0.50~168.55,0.37~190.36,0.24~125.00 μg·mL-1范围内线性关系良好,R2为0.9998~0.9999;加样回收率分别为102.1%,102.1%,95.3%,96.2%,96.9%,94.1%,108.7%,101.8%,RSD未超过2.8%。皖产古尼虫草和冬虫夏草均含有核苷和碱基成分,其中: 皖产古尼虫草含有较高的尿嘧啶、尿苷、腺苷,而冬虫夏草中肌苷含量较高;二者的次黄嘌呤、鸟苷、腺嘌呤的含量相近;在该检测限下,两者均未测得虫草素。 结论: 初步认为: 皖产古尼虫草核苷和碱基成分与冬虫夏草具有一定的相似性,但尚有待扩大样本量作进一步的确证。
目的: 通过高分离度快速液相色谱(RRLC)-离子阱质谱联用技术定性分析参麦注射液及其中间体的化学成分。 方法: 色谱分离采用Agilent Rapid Resolution HT Extend-C18色谱柱(2.1 mm×50 mm,1.8 μm),5 mmol·L-1醋酸铵-乙腈梯度洗脱,流速0.4 mL·min-1。质谱条件为电喷雾离子源,负离子模式检测。 结果: 利用多级质谱信息,结合对照品对照和文献分析,确定了数十种化合物的可能结构。 结论: 通过RRLC-离子阱质谱联用技术,为中药注射液的化学成分研究提供了一种快速、灵敏、高效的分析方法。
目的: 建立同时测定芪参益气滴丸中5个丹参活性成分(丹参素、原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B、丹酚酸A)含量的高效液相色谱(HPLC)和超高效液相色谱(UPLC)方法,并对建立的方法进行比较。 方法: HPLC方法色谱柱为Agilent Zorbax SB C18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),UPLC方法色谱柱为Waters Acquity BEH C18柱(2.1 mm×100 mm,1.7 μm),流动相均为乙腈-甲酸-水体系梯度洗脱,2种方法的流速分别为1.0和0.4 mL·min-1,检测波长均为280 nm,柱温均为30 ℃。比较2种方法的分离情况及线性、精密度、重复性、加样回收率、样品测定结果。 结果: UPLC的分析时间少于HPLC;5个物质在一定范围内均呈现良好线性,r均大于0.9998;2种方法的精密度、重复性、加样回收率和样品测定结果无显著性差异。 结论: HPLC和UPLC 2种方法准确性、重复性均较好;UPLC分析比HPLC具有更加快速、高效的优势。
目的: 建立河北道地药材北沙参HPLC-PDA指纹图谱分析方法,并与不同产地北沙参药材指纹图谱特征进行比较,为科学评价与有效控制北沙参药材质量提供新方法。方法: 采用DiamonsilTM C18(250 mm×4.6 mm,5μ m)色谱柱,流动相为甲醇-乙腈-0.05%磷酸水溶液,梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1,柱温30 ℃,检测波长295 nm。结果: 13批道地药材的相似度在0.9以上,化学组成一致性较好;不同产地饮片相似度只在0.1~0.4之间。结论: 本方法操作简便、快速、准确,为北沙参药材的鉴别和质量的全面控制提供了依据。
目的: 建立同时测定北刘寄奴中木犀草素和芹菜素含量的HPLC方法。 方法: 采用Inertsil ODS-3(4.6 mm×150 mm,5 μm)色谱柱,以乙腈-0.5%磷酸(28∶ 72)为流动相,流速1.0 mL·min-1,检测波长340 nm,柱温35 ℃。 结果: 木犀草素和芹菜素进样量分别在0.2168~1.951 μg和0.0684~0.615 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9999);木犀草素和芹菜素平均加样回收率(n=5)分别为99.7%和99.1%,RSD分别为0.99%和1.5%。 结论: 该方法简便、准确、可靠,可用于中药北刘寄奴中木犀草素和芹菜素含量的测定。
目的: 针对盐酸罂粟碱注射液现行标准中采用非水滴定进行含量测定且未对注射液中有关物质进行控制,建立了一种同时测定含量和有关物质的HPLC方法,并对注射液中存在的杂质用HPLC-MS联用技术进行结构推断。方法: 采用C18色谱柱(SepaxGP,250 mm×4.6 mm,5 μm),以0.005 mol·L-1庚烷磺酸钠的0.01 mol·L-1磷酸二氢钾溶液(以磷酸调pH至3.0)-甲醇(50∶50)为流动相,流速1.0 mL·min-1,检测波长254 nm。结果: 在本文色谱条件下,主峰和杂质峰能得到良好的分离;盐酸罂粟碱浓度在0.5~150 μg·mL-1范围内与峰面积呈良好线性关系,r=0.9997;平均回收率(n=9)为101.7%。用HPLC-MS对注射液中杂质分析的结果表明: 注射液的杂质为光氧化产物,它可能是注射液颜色变深的原因之一。结论: 该法专属性强,灵敏、准确,耐用性好,可作为盐酸罂粟碱注射液的质量控制方法。
目的: 建立检测大蒜素原料药有关物质的气质联用方法,并对大蒜素的稳定性进行研究。 方法: 采用DB-5MS毛细管色谱柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm);柱温: 起始温度60 ℃,保持5 min,以10 ℃·min-1升至220 ℃,保持5 min;EI源温度: 200 ℃。 结果: 2批大蒜素原料中的有关物质分别为7.20%和10.11%,主要杂质为一硫二丙烯、二硫二丙烯和四硫二丙烯。 结论: 该方法简便、快速,专属性好,灵敏度高,可用于大蒜素中有关物质的定性定量检测,并可用于大蒜素的稳定性研究。
目的: 建立测定呋喃唑酮中5-硝基糠醛二乙酸酯及其他相关物质的方法。 方法: 采用反相高效液相色谱法,色谱柱为Alltima C18(150 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为水-乙腈,梯度洗脱 ,流速1.0 mL·min-1,检测波长为303 nm(5-硝基糠醛二乙酸酯)和210 nm(其他相关物质)。 结果: 呋喃唑酮与5-硝基糠醛二乙酸酯及其强制破坏产生的降解产物均分离良好;5-硝基糠醛二乙酸酯线性范围为0.2516~3.744 μg·mL-1,平均回收率(n=9)为100.7%;呋喃唑酮和5-硝基糠醛二乙酸酯最低检测量分别为1.53 ng和0.20 ng;供试品溶液至少8 h内稳定。 结论: 本法专属性强,操作方便,测定准确,灵敏度高,可作为呋喃唑酮的质量控制方法。
目的: 按质量源于设计(QbD)的理念,采用实验设计的方法,优化洛伐他汀有关物质的HPLC分析方法。方法: 对洛伐他汀原料进行HPLC色谱系统的筛选与优化。用析因设计筛选色谱柱系统。采用中心组合设计,优化梯度洗脱时间、流速和柱温。最优色谱条件为: C18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),以乙腈-0.01%磷酸溶液(65∶35)为流动相,流速1.0 mL·min-1,梯度洗脱时间为40 min,检测波长为238 nm,柱温为30 ℃。结果: 洛伐他汀色谱保留时间约为10 min,与其有关物质分离良好;最低检测限为0.25 ng。结论: 确立的色谱条件,集目前各国药典测定洛伐他汀有关物质分析方法的优势为一体,测定结果准确,操作方便,可有效地控制药品质量。
目的: 建立一种运用拉曼光谱技术快速鉴别、检查和测定盐酸左氧氟沙星注射液的方法。方法: 以氧氟沙星、左氧氟沙星、盐酸左氧氟沙星以及盐酸左氧氟沙星注射液为研究对象,运用拉曼光谱技术对盐酸左氧氟沙星注射液进行快速鉴别、检查和含量测定。结果: 拉曼光谱法可以鉴别出氧氟沙星消旋体和左氧氟沙星,辨别出不同pH的左氧氟沙星注射液的图谱差异并可用于盐酸左氧氟沙星注射液的含量测定。结论: 本方法操作简便、快速无损,可成为注射剂快速检测的分析方法。
目的: 研究马来酸罗格列酮在不同激发光波长以及不同酸碱度条件下的表面增强拉曼光谱,对表面增强拉曼光谱中的分子振动模式进行识别。 方法: 用3种不同的激发光波长对不同pH条件下马来酸罗格列酮的表面增强拉曼散射(SERS)进行考察,推测分子在纳米颗粒上的吸附取向、成键方式,对增强机制作出推断。 结果: 研究表明,药物分子-银胶体系的pH对马来酸罗格列酮的增强效应有较大的影响,这是pH对药物分子-银胶体系的凝聚状态和马来酸罗格列酮分子存在状态综合影响的结果。另外,激发光波长对马来酸罗格列酮的SERS效应也有很大的影响,这体现了光源对药物分子-银胶体系的选择性激发。 结论: 本方法简单、快速、可靠,专属性强,可以作为分析马来酸罗格列酮分子在纳米表面吸附情况的方法。
目的: 建立测定中药中桔青霉素含量的高效液相色谱-串联质谱法,对市售中药材及其制品中的桔青霉素进行检测。 方法: 样品用70%甲醇提取,经免疫亲和柱净化,采用高效液相色谱-串联质谱法测定其中桔青霉素的含量,采用多反应监测(MRM)方式分别监测离子对m/z 251→233(桔青霉素)和m/z 472→m/z 436(内标特非那定)。 结果: 以桔青霉素和内标特非那定峰面积的比值对桔青霉素的浓度作线性回归,桔青霉素浓度在0.1~50 ng·mL-1范围内线性关系良好(r=0.9994),日内和日间精密度以RSD表示均低于5.4%,方法的定量限为2.5 μg·kg-1,平均回收率在81.2%~93.3%的范围内。 结论: 该方法快速、灵敏,结果准确,适用于复杂中药基质中桔青霉素的检测。
目的: 建立高灵敏度测定蜂蜜中四环素总量的电化学发光法。 方法: 基于四环素、土霉素、金霉素、强力霉素对钌联吡啶的电化学发光具有几乎完全相同的增强效应,建立本方法,并阐明其机理。 结果: 在最优实验条件下,钌联吡啶的电化学发光增强值与四环素、土霉素、金霉素、强力霉素的浓度的对数呈线性关系,线性范围为1.0×10-12~5.0×10-10 mol·L-1,检测限约为3×10-13 mol·L-1。精密度和准确度好。机理研究表明: 四环素的电化学氧化产物增强了钌联吡啶的电化学发光。 结论: 该方法灵敏度极高,测定结果准确可靠,可用于蜂蜜中四环素总量的测定。
目的: 探讨中药单体吉九里香碱体外诱导HCT-15细胞凋亡的分子作用机理。 方法: 采用Western Blotting、体外Bcl-xL蛋白竞争结合检测实验及RT-PCR对吉九里香碱诱导细胞凋亡的机制进行研究。 结果: 结果显示50 μmol·L-1吉九里香碱分别作用HCT-15细胞6 h、12 h及24 h,P53蛋白表达水平基本没有变化;Cyto c呈时效性的从线粒体释放到胞质中,Bcl-2蛋白表达基本没有变化,Bcl-xL的表达被抑制在较低水平,吉九里香碱处理细胞6 h后Bax表达开始增加,Bax与Bcl-xL蛋白表达的相对比例上调;与死亡受体通路中相关的FADD表达未见异常,同时线粒体通路中的蛋白包括Caspase-7、Caspase-8、Caspase-9、Caspase-3等均没有被剪切,但相应的凋亡标志物PARP和Rb等以时间依赖形式被剪切;RT-PCR检测结果显示Bcl-2的mRNA水平基本不变,而Bax的mRNA水平随时间的增加而略有增加,说明吉九里香碱从基因水平影响Bax靶基因的转录表达;另外,吉九里香碱能明显竞争BH3与Bcl-xL蛋白的结合,强度甚至强于阳性药HA14-1。 结论: 吉九里香碱诱发HCT-15细胞凋亡的分子机制在于从基因水平影响Bax靶基因的转录表达,同时通过与Bcl-xL蛋白的BH3结构域特异性结合置换出Bax蛋白以增加Bax同源二聚体的浓度,进而影响二者的蛋白表达水平比例,最终导致线粒体功能紊乱来发挥其诱导HCT-15细胞凋亡的效应,且为P53和Caspases非依赖型。
目的: 探讨重组人乳头瘤病毒双价(16/18型)候选疫苗免疫原性评价方法。 方法: 对以假病毒为基础的中和实验 (ZsGreen法)测定血清中和滴度,以微球为基础建立的Luminex法测定中和滴度和ELISA法测定抗体滴度的3种方法进行相关性研究以及体内效价测定(ED50法)和体外相对效力测定(IVRP法)的相关性分析,同时对5种免疫原性的评价方法进行重复性验证。 结果: ZsGreen法、Luminex法测定的中和滴度和ELISA法测定的抗体滴度检测结果表明: 滴度值呈明显的剂量效应以及侯选疫苗具有良好的免疫原性。采用SPSS统计软件分析,对于HPV 16L1 ZsGreen法、Luminex法和ELISA法的相关系数分别为0.791,0.800,0.747(Spearman相关系数)和HPV 18L1的相关系数分别为0.734,0.625,0.634(Spearman相关系数)。并且 ED50法和IVRP法具有一定的相关性。5种方法重复性验证的RSD分别为: 5.3%(ZsGreen)、5.2%(Luminex)、8.0%(ELISA)、32.3%(ED50)、6.3%(IVRP)。 结论: 建立的HPV 16和HPV 18型疫苗评价方法为快速准确地评价免疫原性提供了多种解决方法。
目的: 建立重组人血清白蛋白-干扰素α2a融合蛋白(rHSA-IFNα2a)的质控方法和质量标准。 方法: 分别使用抗HSA抗体和抗IFNα2a抗体、采用免疫印迹法对成品进行鉴别试验,采用WISH细胞病变抑制法测定成品和原液的生物学活性,原液以胰蛋白酶酶切后,用HPLC分析肽图,其余项目按2010年版中国药典(三部)的规定进行检测。 结果: 样品与抗HSA抗体和抗IFNα2a抗体均呈阳性反应,比活性＞1.5×105 IU·mg-1,其肽图与参考品的一致,其余项目均符合2010年版中国药典(三部)的规定,根据检测结果建立了rHSA-IFNα2a的质量标准。 结论: 建立的质控方法和质量标准可以保证rHSA-IFNα2a的安全、有效和质量可控,可以用于rHSA-IFNα2a的常规检定。
目的: 建立人用狂犬病疫苗快速鉴别试验并进行验证。 方法: 采用双抗体夹心ELISA,以4株抗狂犬病毒核蛋白单抗包被微孔板,通过捕捉检品中狂犬病病毒核蛋白进行快速鉴别试验,对该方法进行特异性、灵敏度、重复性和适用性验证。 结果: 采用双抗体夹心ELISA进行鉴别试验,验证结果显示该方法具有较高的特异性和灵敏性,RSD<15%,对于不同疫苗生产毒株均可有效鉴别。 结论: 双抗体夹心ELISA可以替代传统效力试验对人用狂犬病疫苗进行快速鉴别。
目的: 构建了29种人类EGFR基因突变体质控品,为人类EGFR基因突变检测试剂盒的性能评价提供了可靠的质控物质。方法: 根据人类EGFR全基因序列,应用Primer Premier 5.0软件在选取的序列区域设计引物,通过PCR介导的定点突变技术引入突变位点、PCR产物与克隆载体连接,转化感受态细菌,筛选阳性克隆等,建立了包含不同人类EGFR基因突变体的质控品。结果: 对29种人类EGFR基因突变体质控品进行序列测定,并将测序结果进行BLAST比对,结果表明成功建立了人类EGFR基因突变体质控品。结论: 本研究建立的EGFR基因突变体质控品涵盖了EGFR基因的29种突变位点,覆盖了目前最常见的EGFR基因突变类型,能够用于评价国内大多数EGFR基因突变检测试剂盒。
目的 : 将不同等级(普通级与SPF级)的家兔用于生物制品、细菌内毒素国家标准品的热原检测,研究普通级与SPF级家兔适应期对环境的适应能力、体温的均一性及对热原质的敏感性上是否存在差异,最终选择出更适合于热原检测的等级家兔。 方法: 按照中国药典2005版三部附录ⅫD热原检查法,分别对SPF级与普通级家兔进行适应期与筛选实验的比较、对细菌内毒素(G-)的敏感性比较以及对生物制品热原检测准确性的比较。 结果: 适应期、筛选合格率、筛选实验体温分布情况及筛选实验体温波动情况比较存在显著性差异;对内毒素敏感性和同一制品热原检查无显著性差异。 结论: SPF级家兔在适应期中的适应性优于普通级家兔;SPF级家兔筛选合格率优于普通级家兔;SPF级家兔与普通级家兔对内毒素敏感性无明显差异;SPF级家兔与普通级家兔对同一制品热原检查准确性无明显差异。
目的: 建立特异、敏感、快速检测支原体的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法。 方法: 针对支原体16S rRNA基因的保守区设计特异性引物和探针,建立支原体TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方检测方法,验证方法的特异性、敏感性和稳定性。对2008~2010年期间在北京采集的680份小型猪、小鼠、大鼠样本中的支原体进行检测,同时进行分离培养和常规PCR检测。 结果: 建立的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法对支原体的检测具有高度的特异性,对空肠弯曲菌、支气管鲍特杆菌、肺炎克雷伯杆菌、侵肺巴斯德氏菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、肺炎链球菌、乙型溶血性链球菌均无交叉反应,检测的灵敏度达9.2拷贝。标准曲线显示各浓度范围内具有良好的线性关系,相关系数为0.999,斜率为-3.328,TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR效率为100%。对680份动物样本进行检测,结果TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR和常规PCR均能检出77份支原体阳性样本,但分离培养未能检出支原体阳性样本。结果显示,建立的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法比细菌分离培养方法更敏感,能够直接从动物样本中检出支原体DNA,检测时间仅为2 h。 结论: 本研究建立了一种可靠、快速、灵敏的检测支原体的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法,并且成功应用于小型猪、小鼠、大鼠样本中支原体的检测。该技术为动物源性药品和生物制品中支原体的快速检测提供了实用的工具。
目的: 建立同时测定藿香正气胶囊中甘草苷、柚皮苷、橙皮苷、麝香草酚、欧前胡素、和厚朴酚、异欧前胡素及厚朴酚共8个主要化学成分的HPLC分析方法。方法: 采用C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱,流动相为水-甲醇-乙腈,梯度洗脱(0.01~20 min,68∶30∶2→60∶38∶2;20~50 min,60∶38∶2→34∶64∶2;50~65 min,34∶64∶2;65~75 min,34∶64∶2→28∶70∶2;75~85 min,28∶70∶2→68∶30∶2),流速1.0 mL·min-1,检测波长283 nm。结果: 在各自的线性范围内甘草苷、柚皮苷、橙皮苷、麝香草酚、欧前胡素、和厚朴酚、异欧前胡素、厚朴酚8个化合物的标准曲线呈良好的线性关系;平均加样回收率分别为97.4%,98.5%,97.4%,98.6%,97.8%,99.2%,97.0%,97.5%;所有化合物的精密度和重复性试验的RSD均＜3.0%。结论: 该分析方法简单、灵敏、准确,重复性好,可同时分析藿香正气胶囊中的主要成分。
目的: 建立测定复方红景天胶囊中红景天苷和紫丁香苷含量的HPLC法。方法: 采用Phenomenex C18 (250 mm×4.6 mm,10 μm)色谱柱测定红景天苷的含量,流动相为甲醇-水(10∶55),流速1.0 mL·min-1,检测波长225 nm,柱温30 ℃;采用Discovery C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱测定紫丁香苷的含量,流动相为乙腈(A)-水(B),梯度洗脱[0~35 min,A-B(6∶94);35~50 min,A-B(60∶40);50~60 min,A-B(6∶94)],流速1.0 mL·min-1,检测波长265 nm,柱温35 ℃。结果: 红景天苷进样量在0.115~0.920 μg(r=0.9999)范围内线性关系良好,平均回收率(n=5)为98.53%(RSD=1.1%);紫丁香苷进样量在0.0643~0.515 μg(r=0.9999)范围内线性关系良好,平均回收率(n=5)为99.06%(RSD=0.74%)。结论: 本方法操作简便,结果准确可靠,重复性好。
目的 : 研究建立斑蝥(Mylabris)、青娘子(Lytta)、红娘子(Huechys)3个毒性药材的鉴别分析方法。该3个药材具有特殊的药理活性如抗体活性、抗子宫颈癌等。 方法 : 除形态外观和显微鉴别外,本文研究建立气相色谱和毛细管电泳鉴别特征成分指纹图谱的方法。气相色谱分析主要测定药材中斑蝥素成份而毛细管电泳指纹图谱则集中药材的氨基酸分布。 结果: 所建立的方法可为验证该3个药材的质量提供参考。 结论: 研究发现青娘子与斑蝥一样含有斑蝥素但含量很低,而红娘子不含斑蝥素。
目的: 建立测定莪术油聚氰基丙烯酸正丁酯毫微粒(ZTO-PBCA-NP)中莪术油的主要成分β-榄香烯、莪术酮、莪术醇和莪术二酮含量的气相色谱-质谱方法。 方法: 采用HP-5MS毛细管色谱柱(30.0 m×250 μm×0.25 μm),进样温度250 ℃,不分流;程序升温: 初始65 ℃恒温2 min,以5 ℃·min-1升至90 ℃恒温3 min,以20 ℃·min-1升至103 ℃恒温3 min,以8 ℃·min-1升至150 ℃恒温15 min,以20 ℃·min-1升至280 ℃。 结果: β-榄香烯、莪术酮、莪术醇和莪术二酮进样浓度在4.00~40.00 μg·mL-1范围内与峰面积呈良好线性关系(r=0.9979~0.9997);平均回收率(n=4)分别为98.3%(RSD=2.8%),99.4%(RSD=2.1%),95.5%(RSD=1.6%),101.2%(RSD=2.5%)。 结论: 该方法专属性强,准确度高,重复性好,可用于ZTO-PBCA-NP的质量控制。
目的: 采用反相高效液相色谱法测定钻山风糖浆中瓜馥木碱甲的含量。 方法: 使用Agilent ZORBAX SB-C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱,流动相为乙腈-三乙胺醋酸溶液(取三乙胺8 mL,冰醋酸30 mL,加水稀释至1000 mL)(14∶ 86),流速1.0 mL.min-1,检测波长300 nm。 结果: 瓜馥木碱甲的进样量在0.048~1.19 μg范围内,与峰面积呈良好线性关系;瓜馥木碱甲的平均回收率(n=6)为99.8%,RSD为1.7%。 结论: 本法简便、准确,重复性好,可为钻山风糖浆的质量控制提供实验依据。
目的: 评定HPLC法测定人血浆中奥硝唑浓度的不确定度。 方法: 对奥硝唑浓度测定过程中各影响因素,包括测定精密度、称量、标准溶液的配制、含药血浆的配制、血浆提取、仪器、标准曲线拟合等进行分析评定,计算各变量的不确定度和合成不确定度,最终计算扩展不确定度。 结果: 人血浆中低(0.5 μg·mL-1)、中(5 μg·mL-1)浓度奥硝唑的扩展不确定度分别为0.088 μg·mL-1、0.324 μg·mL-1(P=95%,k=2)。 结论: HPLC法测定人血浆中奥硝唑浓度的不确定度主要由标准曲线拟合(尤其是低浓度)、标准溶液和血浆样品制备处理及仪器允差引入。
目的: 建立薄层色谱法(TLC)和高效液相色谱法(HPLC),对紫锥菊不同部位中的菊苣酸进行分析,为紫锥菊质量标准的建立提供依据。 方法: TLC鉴别紫锥菊根、茎、叶、花中的菊苣酸;HPLC测定以上各部位中菊苣酸的含量,色谱柱为XTerra C18柱(150 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液(23 : 77),流速为1.0 mL·min-1,紫外检测波长为326 nm。 结果: TLC中菊苣酸的斑点清晰可辨,Rf值为0.72;HPLC测得菊苣酸的进样浓度在0.5~100 μg·mL-1范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9999),方法的平均回收率(n=3)为95.3%(RSD=3.6%),紫锥菊根、茎、叶、花中的菊苣酸含量分别为12.1,0.68,5.60,2.47 mg·g-1。 结论: 该检测方法简便可行,可用于紫锥菊中菊苣酸的质量控制。
目的: 优选暴马丁香树皮中紫丁香苷的提取工艺。 方法: 采用星点设计-效应面法,以乙醇浓度、提取时间、溶媒比为主要影响因素,紫丁香苷提取率为评价指标,通过对各因素的多元线性回归及二项式拟合,采用效应面法和岭嵴分析优选最佳提取工艺,并进行预测分析。 结果: 确定紫丁香苷最佳提取工艺为46%乙醇20倍量超声提取85 min。 结论: 星点设计–效应面法优选暴马丁香树皮中紫丁香苷的提取工艺,实际值与预测值吻合度高,预测性良好,方法简便易行,为更好地开发利用暴马丁香树皮中紫丁香苷提供参考依据。
目的: 建立一种红花如意胶囊中胡椒碱的RP-HPLC含量测定方法。 方法: 采用Kromasil C18(150 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱,以甲醇-水(64∶ 36)为流动相,流速1.0 mL·min-1,检测波长343 nm,柱温30 ℃; 结果: 胡椒碱在0.0416~0.228 μg范围内呈良好的线性关系(r=0.9998);平均回收率(n=6)为98.82%,RSD为1.1%。 结论: 所建立的方法便捷、准确,重复性好,可以为藏药红花如意胶囊的质量控制提供一定的参考。
目的 : 测定苜蓿素在正辛醇-水和正辛醇-缓冲液体系中的表观油水分配系数。 方法: 采用HPLC法测定苜蓿素的浓度,使用Hypersil ODS色谱柱(5 μm,4.6 mm×200 mm),以甲醇-水(65∶ 35)为流动相,流速为1.0 mL·min-1,检测波长270 nm,摇瓶法测定苜蓿素的表观油水分配系数。 结果: 苜蓿素的表观油水分配系数log P=1.66。 结论: 以HPLC法测定苜蓿素的表观油水分配系数简便、快捷。
目的: 建立桔梗中甲氰菊酯、高效氯氟氰菊酯、溴氰菊酯、氰戊菊酯、氯菊酯、联苯菊酯共6个拟除虫菊酯类农药残留的提取、净化及其残留量测定的方法。 方法: 样品运用石油醚提取,商品CARB/NH2小柱净化,乙腈-二氯甲烷(5∶ 95)洗脱,HPLC-DAD检测。色谱条件: 采用Hypersil BDS C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱,流动相为乙腈-水(70∶ 30),流速1 mL·min-1,检测波长230 nm。 结果: 样品4水平添加时的6个拟除虫菊酯类化合物回收率在75.63%~107.5%范围内,RSD在2.3%~9.9%范围内,可以满足农药残留分析的要求。 结论: 该方法灵敏度高,选择性强,操作简单、快速,净化效果好。可应用于桔梗药材中痕量农药残留的检测。
目的: 建立苦参总碱中三氯甲烷残留的检测方法。 方法: 采用气相色谱顶空进样法,聚乙二醇(DB-WAX)毛细管柱,FID检测器,柱温采用程序升温,初始温度为60 ℃,保持6 min,然后以15 ℃·min-1升温速率升至180 ℃,保持5 min。 结果: 各个峰的分离效果好,三氯甲烷浓度在12.4~1236.6 μg·mL-1的范围内呈良好的线性关系(r=0.9940),平均回收率为94.5%。 结论: 本方法结果准确、灵敏度高、重复性好,可以作为苦参总碱中三氯甲烷残留的检测方法。
目的: 比较光纤法与药典法对氨茶碱片溶出度测定的相关结果,探索光纤法替代药典法的可能性。方法: 对25个批次氨茶碱片用光纤法进行溶出度测定,并与药典法所得结果进行比较。结果: 光纤法较药典法所得结果普遍偏高,光纤法能够监测药物的实时溶出过程,反映氨茶碱片的完整溶出行为。结论: 在氨茶碱片溶出度测定中,光纤法更为方便、快捷,并能客观反映药物溶出的全过程,但是该方法尚不能替代药典法。
目的: 建立应用高效液相色谱-串联质谱技术快速鉴定头孢地嗪中异构体杂质的方法。 方法: 以5 mmol·L-1醋酸铵溶液-乙腈为流动相,经C18柱(200 mm×4.6 mm,5 μm)分离,通过串联ESI质谱在线检测,获得相关的色谱和质谱信息。 结果: 在所建立的条件下,头孢地嗪及其异构体杂质获得有效分离,头孢地嗪、反式异构体及Δ3异构体的保留时间分别为11.38,14.26,10.95 min,通过质谱中特征碎片离子的差异可区分反式异构体及Δ3异构体。 结论: 本法可快速、准确地分离鉴定头孢地嗪中的反式和Δ3异构体杂质,进而可以对药品质量进行质量控制。
目的: 建立在线微生物浊度法测定多维元素片中微量维生素B12的含量。方法: 以莱士曼氏乳酸杆菌为实验菌,以缺乏维生素B12的培养基为检测培养基,采用浊度法在线检测。结果: 维生素B12浓度在0.02~0.10 ng·mL-1范围内呈现良好线性关系(r=0.9985),平均回收率为101.8%。结论: 该方法快速、简便、灵敏,在线检测结果准确可靠,适用于多维元素片中微量维生素B12的含量测定。
目的: 采用LC-MS／MS联用技术,建立乌蛇葛根胶囊中非法添加双氯芬酸的鉴别方法。 方法: 色谱柱为Shimadzu Shim-pack VP-ODS(250 mm×4.6 mm,5 μm),0.02 mol·L-1醋酸铵-0.1%醋酸水溶液及乙腈(55∶ 45)为流动相,流速1.0 mL·min-1,检测波长为280 nm;Agilent 6310离子阱质谱仪,电喷雾离子源(ESI),雾化气压力27.6 kPa,干燥气温度350 ℃,流速9 mL·min-1,扫描范围m/z 150~500。 结果: 在高效液相色谱、质谱中,样品出现与双氯芬酸成分一致的色谱峰、质谱峰。 结论: 本方法简单可行,结果准确可靠,可用于乌蛇葛根胶囊中添加双氯芬酸成分的定性鉴别。
