吉九里香碱体外诱导人大肠癌HCT-15细胞凋亡的机理研究
王三龙1, 罗红梅2, 蔡兵3, 崔承彬4, 阎少羽5, 吴春福5
药物分析杂志 ›› 2011, Vol. 31 ›› Issue (9) : 1736-1742.
吉九里香碱体外诱导人大肠癌HCT-15细胞凋亡的机理研究
Mechanism study on induction of apoptosis by girinimbrine in HCT-15 cell in vitro
目的: 探讨中药单体吉九里香碱体外诱导HCT-15细胞凋亡的分子作用机理。 方法: 采用Western Blotting、体外Bcl-xL蛋白竞争结合检测实验及RT-PCR对吉九里香碱诱导细胞凋亡的机制进行研究。 结果: 结果显示50 μmol·L-1吉九里香碱分别作用HCT-15细胞6 h、12 h及24 h,P53蛋白表达水平基本没有变化;Cyto c呈时效性的从线粒体释放到胞质中,Bcl-2蛋白表达基本没有变化,Bcl-xL的表达被抑制在较低水平,吉九里香碱处理细胞6 h后Bax表达开始增加,Bax与Bcl-xL蛋白表达的相对比例上调;与死亡受体通路中相关的FADD表达未见异常,同时线粒体通路中的蛋白包括Caspase-7、Caspase-8、Caspase-9、Caspase-3等均没有被剪切,但相应的凋亡标志物PARP和Rb等以时间依赖形式被剪切;RT-PCR检测结果显示Bcl-2的mRNA水平基本不变,而Bax的mRNA水平随时间的增加而略有增加,说明吉九里香碱从基因水平影响Bax靶基因的转录表达;另外,吉九里香碱能明显竞争BH3与Bcl-xL蛋白的结合,强度甚至强于阳性药HA14-1。 结论: 吉九里香碱诱发HCT-15细胞凋亡的分子机制在于从基因水平影响Bax靶基因的转录表达,同时通过与Bcl-xL蛋白的BH3结构域特异性结合置换出Bax蛋白以增加Bax同源二聚体的浓度,进而影响二者的蛋白表达水平比例,最终导致线粒体功能紊乱来发挥其诱导HCT-15细胞凋亡的效应,且为P53和Caspases非依赖型。
细胞凋亡;HCT-15细胞;分子作用;中药;生物碱;黑果黄皮;吉九里香碱;线粒体途径;死亡受体途径 {{custom_keyword}} /
apoptosis;HCT-15 cell;molecular action;traditional Chinese medicine;alkaloid;Clausena dunniana Levl.;girinimbrine;mitochondrial pathway;death receptor pathway {{custom_keyword}} /
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