2013年, 第33卷, 第11期　
刊出日期：2013-11-25

  

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特约报道
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  方差成分模型在生物活性测定实验中间精密度分析中的应用

  冯国双¹, 谭德讲²

  药物分析杂志. 2013, 33(11): 1836-1839.

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  目的: 探讨方差成分模型在生物活性测定实验中间精密度分析中的应用。方法: 细胞类生物活性测定实验中，考虑实验者、细胞基质、重复实验3个影响因素，利用方差成分模型计算各影响因素的变异，并具体计算中间精密度、操作模式变异等指标。结果和结论: 方差成分模型分析结果显示，不同实验者、重复实验所造成的变异较大，而细胞基质因素造成的变异很小。操作模式变异提示，实验次数越多、每次实验样品重复数越多，变异越小。从本实例可以看到，可通过对实验者的统一培训、增加实验次数等措施，减少实验变异。方差成分模型在多变异来源的生物活性测定实验中具有较好的应用价值。
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  统计区间的作用及在药品质量控制中的应用

  张横, 谭德讲

  药物分析杂志. 2013, 33(11): 1840-1844.

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  目的: 系统介绍统计学区间的几个概念、作用及SAS软件的计算方法。方法: 通过举例阐述其在药品生产、检验工作中的实际应用价值。结果和结论: 统计区间在药品质量控制中具有非常广泛的应用价值，希望人们能更多地使用该方法作为工具，对药品的生产质量进行更好地监控和评估。
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  药品质量控制中常用异常值判别方法辨析

  项荣武², 张潇¹, 谭德讲¹, 杨洋²

  药物分析杂志. 2013, 33(11): 1845-1848.

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  目的: 正确地运用各种异常值判别方法，科学地进行数据分析。方法: 用药品检定实验者2个常见数据集实例，对常用异常值检验方法的敏感性进行比较；对异常值判断的重要性、判别标准等进行分析。结果和结论: 各种异常值判断方法都有其局限性。实验结果的准确一致是判断异常值分析正确性的前提；在实际运用中，要严格按照分析步骤进行操作，最好采用多种异常值检测方法同时分析；当选用一种方法时，应根据具体情况咨询专业统计人员进行选择。
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  四参数log-logistic模型在生物活性测定研究中的应用

  冯国双², 谭德讲¹, 刘韫宁³, 贺庆¹

  药物分析杂志. 2013, 33(11): 1849-1851.

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  目的: 利用数学模型拟合生物反应与药物浓度的S曲线关系，比较不同模型的拟合效果。方法: 分别利用logistic模型与四参数log-logistic模型对目前常见体外生物活性测定中反应液吸光度与药物浓度的S曲线关系进行拟合。结果和结论: 四参数log-logistic模型拟合效果要优于传统的logistic模型，R²分别为1.000和0.9975，误差均方根分别为0.00968和0.1030。在拟合S型曲线方面，四参数log-logistic模型比logistic模型拟合效果更优，且其4个参数更具现实意义，即D和A分别代表S曲线的下限和上限，C代表半数反应浓度，B代表吸光度增长速率参数，相当于S曲线的斜率。
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  生物测定法替代研究中统计学的应用

  贺庆¹, 曹秀堂², 谭德讲¹, 高华¹, 李冠民¹

  药物分析杂志. 2013, 33(11): 1852-1857.

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  目的: 对适用于生物活性测定法替代研究的相关统计学概念和受试者工作特征(receiver operating characteristic，ROC)曲线法进行介绍。方法: 以生物测定中热原检测法的替代研究为例，采用各种热原检测方法对规定样品进行检测，对所获结果进行ROC曲线分析。结果和结论: 4种新的体外热原检测方法(人全血白介素6法、人全血白介素1法、人外周血单个核细胞白介素6法、MM6细胞白介素6法)及家兔热原检查法的灵敏度与特异度分别为88.9%，96.6%；72.7%，93.2%；92.5%，95%；95.5%，89.8%；57.9%，88.3%。ROC曲线表明新方法的诊断效率均优于家兔法。ROC曲线法可以更加直观、清晰地说明各种热原检测法的优劣性，是一种可用于生物测定法桥接研究或替代研究中的实用方法。
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  中国药典生物检定统计实例不同计算方式结果比较和几点修改建议

  张媛, 谭德讲

  药物分析杂志. 2013, 33(11): 1858-1861.

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  目的: 通过比较2010年版中国药典二部附录ⅪV(生物检定统计法)、BS 2000、SAS三者计算的结果，对BS 2000计算软件的有效性进行确认。方法: 将2010年版中国药典二部附录ⅪV生物检定统计法中的实例使用BS 2000、SAS 2种软件分别进行计算，比较二者与中国药典结果的差异。结果和结论: 经确认，BS 2000与SAS软件均可用于中国药典中的生物检定统计。但发现中国药典、BS 2000、SAS所得结果，包括所得效价(P_T)、可信限(FL)、可信限率(FL%)、标准误(S_M)均存在不同程度的差异，对差异产生的原因进行分析并提出修改意见。
代谢分析
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  HPLC-MS/MS测定比格犬血浆中维他昔布浓度及其药代动力学研究

  邢春宇^1,2, 李靖³, 孟志云¹, 吕鹏月³, 马飞¹, 贺艳琳¹, 冯育林², 窦桂芳¹

  药物分析杂志. 2013, 33(11): 1862-1867.

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  目的: 建立快速灵敏的HPLC-MS/MS法测定Beagle犬血浆中维他昔布的浓度，并研究维他昔布在健康Beagle犬体内的药代动力学特征。方法: 血浆样品的处理采用叔丁基甲醚液液萃取方法，内标为塞来昔布。色谱柱：Thermo Syncronic-C₁₈(2.1 mm×100 mm，5 μm)；流动相：甲醇(含0.1%的甲酸)-水(含0.1%的甲酸)，梯度洗脱；流速：200 μL·min^-1；进样量：5 μL；柱温：20℃。质谱采用ESI⁺源，多重反应监测(MRM)模式，毛细管温度350℃，喷雾电压4.5 kV，鞘气压力199.96 kPa，辅气压力165.48 kPa，源内碰撞诱导解离电压：-10 V，碰撞气(氩气)压力0.1995 Pa，选择检测离子反应对为m/z 347.9→269.0(维他昔布)，m/z 382.0→362.0(塞来昔布)。单剂量给药30 mg后，测定Beagle犬血浆中维他昔布的浓度，并计算药代动力学参数。结果: 维他昔布在0.5~1000 ng·mL^-1浓度范围内线性良好(r=0.9980)，定量下限为0.5 ng·mL^-1。提取回收率均高于89%，日间、日内RSD均小于13%，专属性良好，在本实验涉及的条件下样品稳定。Beagle犬血浆中维他昔布的C_max为(94.27±57.18)ng·mL^-1，T_max为(2.08±2.01)h，t_1/2为(5.87±3.37)h，AUC_{0~36 h}为(625.88±375.70)h·ng·mL^-1。结论: 该方法简便、准确，专属性强，适用于维他昔布在Beagle犬体内的药代动力学研究。
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  LC-MS/MS法测定Beagle犬血浆中紫杉醇及其药代动力学研究

  黄鑫^1,2, 汤维维¹, 江振洲¹, 贺明³, 朱瑶俊³, 张陆勇¹, 张尊建²

  药物分析杂志. 2013, 33(11): 1868-1872.

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  目的: 建立LC-MS/MS分析方法用于检测Beagle犬血浆中紫杉醇浓度，并研究注射用紫杉醇脂质体的药代动力学。方法: 12只Beagle犬随机分成2组后分别i.v.给予1 mg·kg^-1受试制剂与参比制剂，在不同时间采集血浆样品，采用C₁₈反相色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相为甲醇-0.1%醋酸水溶液(85∶15，v：v)，以多烯紫杉醇为内标，电喷雾离子化(ESI)，正离子扫描模式，多反应离子检测(SRM)，紫杉醇[M+Na⁺] m/z 876.4→591.3，内标多烯紫杉醇[M+Na⁺] m/z 830.4→303.9，应用DAS 2.0药代动力学计算程序计算药代动力学参数。结果: 紫杉醇的检测浓度范围在3~2000 ng·mL^-1呈线性相关(r=0.9980)；定量下限为3 ng·mL^-1；批内和批间变异均小于15.0%。紫杉醇给药后血药浓度-时间曲线符合二室模型，受试药物和参比制剂的主要药代动力学参数t_1/2、C_max、MRT_0-24、AUC_0-24和AUC_0-∞分别为(7.3±2.0)h和(7.2±2.5)h、(796.1±321.8)ng·mL^-1和(1248.0±178.6)ng·mL^-1、(6.2±1.1)h和(5.3±0.8)h、(948.4±100.2)ng·h·mL^-1和(969.7±322.1)ng·h·mL^-1、(1022.1±232.7)ng·h·mL^-1和(1084.0±304.1)ng·h·mL^-1。结论: 本分析方法对血浆中紫杉醇的检测具有专属性，且灵敏、可靠，对上述药代动力学参数以SAS统计软件进行双侧t检验，结果表明给予受试制剂及参比制剂后犬的主要药代动力学参数差异无统计学意义(P>0.05)。
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  高效液相色谱法测定生物样品中3PO的方法建立与验证

  Yemarshet K.Gebreyohannes, 王旭, Getu Kahsay Weldu, Erwin Adams, Ann Van Schepdael

  药物分析杂志. 2013, 33(11): 1873-1876.

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  目的: 建立并验证用于大鼠血清、脑脊液、大脑和脊髓中3-(3-吡啶)-1-(4-吡啶)-2-丙烯-1-酮(3PO)含量测定的HPLC-UV法。方法: 样品处理使用蛋白沉淀的方法；色谱条件：色谱柱为Chromolith RP-18e(100 mm×4.6 mm)，流动相A为乙腈-水(2.5∶97.5，v/v)添加0.1%TFA，流动相B为乙腈添加0.1%TFA，梯度洗脱[0~2.3 min，0%B→100%B(线性梯度)；2.3~2.6 min，100%B(等度)；2.6~2.7 min，100%B→0%B(线性梯度)；2.7~5 min，0%B(等度)]，流速2 mL·min^-1，检测波长304 nm，进样量10 μL。结果: 大鼠的血清、脑脊液、大脑和脊髓中内源性物质不干扰3PO的测定，在上述4种基质中，该方法的检测限分别为0.2、0.1、0.1、0.1 μg·mL^-1；定量限分别为0.8、0.2、0.5、0.5 μg·mL^-1；线性范围分别为3~150、0.3~150、0.9~150、0.6~150 μg·mL^-1，相关系数均大于0.999；高、低浓度的回收率均在79.9%~100.3%的范围内；方法重复性(n=5)的RSD均大于0.9%。结论: 建立的方法简单，线性范围宽，且选择性、耐用性均佳。
成分分析
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  缬草素及其同分异构体异缬草素的电喷雾多级质谱区分

  王春国, 刘勇, 石晋丽, 刘永刚, 侯文慧, 史淑宁

  药物分析杂志. 2013, 33(11): 1877-1881.

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  目的：对缬草素(valtrate)和异缬草素(isovaltrate)在电喷雾质谱下的裂解途径进行探讨。方法：采用高效液相色谱-电喷雾离子阱质谱对样品进行系统研究，正离子模式下进行检测，毛细管电压为3.5 kV。液相色谱条件：色谱柱为Agilent XDB-C₁₈柱(50 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相为水-乙腈(32∶68)，流速1 mL·min^-1。结果：缬草素和异缬草素在正离子模式下，8，10位环氧结构均存在2种裂解途经：一是环氧基团(CH₂O)丢失，二是环氧基团异构化形成醛基结构；此外，由于11位取代基及7位酯基所处空间效应和诱导效应的不同使缬草素和异缬草素在正离子模式下会形成不同的特征碎片离子，如缬草素会形成m/z为219和m/z 415的特征碎片，而异缬草素会出现m/z 261和m/z 385的特征碎片。结论：该质谱检测方法可以区分同分异构体缬草素和异缬草素，并为含有环氧结构的这类环烯醚萜化合物的快速鉴定提供参考。
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  GC法同时测定肤舒止痒膏中5个有效成分的含量

  柳立伟¹, 乙引², 潘卫³, 毕晓洁³, 伍庆¹

  药物分析杂志. 2013, 33(11): 1882-1886.

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  目的: 利用气相色谱-质谱联用仪鉴定出肤舒止痒膏中5个有效成分(异龙脑、龙脑、苦参碱、槐定碱、槐果碱)，并建立气相色谱-氢火焰离子法同时测定肤舒止痒膏中这5个有效成分的分析方法。方法: 样品经氨水碱化后，用乙酸乙酯萃取，以水杨酸甲酯和邻苯二甲酸二辛酯作为双内标，采用HP-INNOWAX毛细管色谱柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm)，检测器为FID检测器，进样口温度为260℃，检测器温度为260℃。分流进样，分流比为10∶1。升温程序为初始温度100℃，保持2 min；以5℃·min^-1升至250℃，保持20 min。结果: 异龙脑、龙脑、苦参碱、槐定碱、槐果碱浓度分别在0.0373~0.0869 mg·mL^-1(r=0.9997)、0.0547~0.128 mg·mL^-1(r=0.9999)、0.0444~0.133 mg·mL^-1(r=0.9999)、0.00224~0.0448 mg·mL^-1(r=0.9998)、0.0335~0.100 mg·mL^-1(r=0.9998)质量浓度范围内线性关系良好，平均回收率(n=9)分别为97.8%、98.0%、98.4%、97.8%、98.1%。结论: 该方法简单、灵敏，准确度高，可用于同时测定肤舒止痒膏中的异龙脑、龙脑、苦参碱、槐定碱、槐果碱的含量。
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  矿物药芒硝中无机元素的ICP-MS分析

  李沁¹, 吴春敏¹, 邹义栩¹, 林秉诗²

  药物分析杂志. 2013, 33(11): 1887-1892.

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  目的: 测定矿物药芒硝中无机元素的含量。方法: 采用电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法测定芒硝中的无机元素，并使用统计学软件SPSS 18.0对数据进行分析。结果: 测定了矿物药芒硝中的24种元素，除了Na元素外，Mg、K、Ca、Fe等元素的含量亦较高。另外，重金属及有害元素Pb、Cd、Cu、As亦有检出。建立了芒硝无机元素的指纹图谱。结论: 为矿物药芒硝的安全性评价及其质量标准的制定提供了科学的参考依据。
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  一测多评法在肿节风注射液6个成分检测中的应用研究

  吴铁荣^1,2, 罗跃华¹, 许妍¹

  药物分析杂志. 2013, 33(11): 1893-1898.

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  目的: 将一测多评方法应用于肿节风注射液中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、异嗪皮啶、迷迭香酸6个成分的HPLC含量测定，并建立其方法学的考察模式。方法: 以乙腈(A)-0.1%甲酸(B)为流动性，梯度洗脱(0~8 min，8%A；8~60 min，8%A→30%A；60~75 min，8%A)，流速1.0 mL·min^-1，柱温30℃，检测波长330 nm。在一定的线性范围内以异嗪皮啶为对照品，建立肿节风注射液中该成分与新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、迷迭香酸的相对校正因子(分别为1.0657、1.0559、1.0621、1.8497、0.8797)，利用相对校正因子计算新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、迷迭香酸的含量，同时用外标法测定6个成分的绝对含量；以验证一测多评的准确性和科学性。结果: 建立的校正因子经不同厂家的仪器及色谱柱在不同的实验室考察，重现性良好，肿节风注射液中采用校正因子计算的含量与外标法实测值之间没有明显差异(P>0.05)，且2种方法所得的含量值相对偏差都在3%以内。结论: 在对照品缺乏的情况下，该方法可以作为新模式用于中药制剂的多成分定量，为肿节风注射液的多指标质量评价及控制提供科学依据。
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  HPLC波长切换法同时测定桂枝、白芍药对提取物中8个成分的含量

  何秀菊, 张振秋, 王婧宁, 郝淞瑶

  药物分析杂志. 2013, 33(11): 1899-1903.

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  目的: 建立同时测定桂枝、白芍药对提取物中8个成分(没食子酸、氧化芍药苷、芍药内酯苷、芍药苷、1，2，3，4，6-五没食子酰葡萄糖、香豆素、肉桂酸、苯甲酰芍药苷) 含量的高效液相色谱法。方法: 采用Agilent Eclipse XDB-C₁₈色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，以乙腈(A)-0.1%磷酸水溶液(B)为流动相，梯度洗脱，流速为1.0 mL·min^-1，检测波长为267 nm(0~13 min，检测没食子酸)、258 nm(13~20 min，检测氧化芍药苷)、230 nm(20~35 min，检测芍药内酯苷、芍药苷)、274 nm(35~47 min，检测1，2，3，4，6-五没食子酰葡萄糖)、280 nm(47~61 min，检测香豆素、肉桂酸)、230 nm(61~70 min，检测苯甲酰芍药苷)，柱温为30℃。结果: 桂枝、白芍药对提取物中8个成分没食子酸、氧化芍药苷、芍药内酯苷、芍药苷、1，2，3，4，6-五没食子酰葡萄糖、香豆素、肉桂酸、苯甲酰芍药苷进样量分别在0.0936~0.936 μg(r=0.9995)、0.005320~0.05320 μg(r=0.9991)、0.1365~1.365 μg(r=0.9996) 、0.1456~1.456 μg(r=0.9996)、 0.0939~0.939 μg(r=0.9997)、 0.02678~0.2678 μg(r=0.9992)、 0.1336~1.336 μg(r=0.9993)，0.01938~0.1938 μg(r=0.9992)与峰面积呈良好的线性关系；平均回收率(n=5)分别为99.8%、99.2%、99.0%、99.1%、98.3%、100.0%、98.1%、99.9% 。结论: 该方法准确可靠、重复性好，可用于桂枝、白芍药对提取物的质量控制。
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  一测多评法测定槐角中异黄酮类成分的含量

  陈翔^1,2, 郑国平², 于治国¹

  药物分析杂志. 2013, 33(11): 1904-1909.

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  目的: 采用一测多评，建立槐角中异黄酮类成分的含量测定方法。方法: 采用Agilent Extend C₁₈色谱柱 (250 mm × 4.6 mm，5 μm)，以甲醇-乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相，流速为1.0 mL·min^-1，柱温为30℃，检测波长为260 nm，建立槐角苷与槐属双苷、染料木苷和染料木素的相对校正因子，并以相对保留时间作为目标峰的定位标准。结果: 色谱峰分离度良好，槐角苷在0.374~7.49 μg、槐属双苷在2.16 × 10^-2~0.432 μg、染料木苷在2.61 × 10^-2~0.522 μg、染料木素在1.02×10^-2~0.203 μg呈良好线性关系，平均加样回收率槐角苷为100.7%、槐属双苷为96.3%、染料木苷为98.6%、染料木素为100.8%。槐角苷对槐属双苷、染料木苷和染料木素的相对校正因子分别为0.80、1.03、1.61。相对保留时间分别为0.42、0.81、1.26。结论: 采用一测多评法测定槐角中异黄酮类成分的含量是准确、可行的。
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  苍耳子炮制前后羧基苍术苷和苍术苷的含量比较

  安靖, 王耀登, 盛昌翠, 王光忠

  药物分析杂志. 2013, 33(11): 1910-1913.

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  目的: 考察苍耳子炮制前后羧基苍术苷和苍术苷的含量变化。方法: 采用清炒法对3个不同来源的苍耳子药材进行炮制，通过HPLC法测定苍耳子炮制前后的羧基苍术苷和苍术苷的含量。结果: 3批苍耳子炮制前后羧基苍术苷的含量降低，而苍术苷的含量升高。结论: 该方法简便、快速准确。研究结果为炒苍耳子的质量标准制定及炮制机理的阐明提供科学依据。
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  小硅藻培养过程中游离脂肪酸的GC-NCI-MS分析

  徐慧青, 王秀娟, 陈娇, 杨帆, 陆娟, 王晨菡, 徐继林, 周成旭, 严小军

  药物分析杂志. 2013, 33(11): 1914-1919.

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  目的: 以小硅藻(Nitzschia closterium f.minutissima)为研究对象建立海洋微藻体内及其培养液中游离脂肪酸的高灵敏度分析方法。方法: 小硅藻培养2周，4000 r·min^-1离心收集后冷冻干燥，乙酸乙酯提取藻粉中的游离脂肪酸；培养液经0.45 μm膜过滤后，用三氯甲烷-正己烷(1∶4，v/v)萃取出培养液中的游离脂肪酸。游离脂肪酸样品经五氟苯甲基溴(PFBBr)衍生后进行气相色谱质谱联用分析。色谱分离起始温度150℃，保持3.5 min后以20℃·min^-1升至200℃，200℃中保持5 min后以5℃·min^-1升至280℃，280℃中保持18 min；质谱检测在负化学源SIM模式下进行。结果: 以游离脂肪酸C 14∶0、C 16∶0、C 18∶0、C 20∶4为研究对象，游离脂肪酸PFB衍生物在SPB-1色谱柱上得到良好分离；方法在0~100 μmol·L^-1浓度线性良好；检测限均小于0.05 μmol·L^-1，远优于其他常规的衍生检测方法；方法的平均回收率在藻粉中达到75.3%~87.8%，在藻液中达到66.0%~77.4%，RSD小于5%；小硅藻藻粉中检测出的游离脂肪酸含量在0.39~1.72 μmol·g^-1范围内，而培养液中游离脂肪酸含量在0~399.3 nmol·L^-1范围内。结论: 该方法灵敏高，重现性好，可用于海洋微藻体内及其培养液中游离脂肪酸的定性定量分析。
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  在线固相萃取-HPLC测定复方甘草片中吗啡的含量

  杨艳羚, 李效宽, 李玉桑, 刘敏, 奉黎静, 唐和斌

  药物分析杂志. 2013, 33(11): 1920-1923.

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  目的: 建立在线固相萃取(Online SPE)结合HPLC测定复方甘草片中吗啡含量的方法。方法: 采用Thermo Fisher Ultimate 3000双三元梯度液相色谱，以Acclaim C₁₈(4.3 mm×10 mm，5 μm)小柱对样品进行前处理和在线富集，后转载到分析柱Acclaim C₁₈(4.6 mm×250 mm，5 μm)上进行分离检测，流速为1.0 mL·min^-1，检测波长220 nm。结果: 吗啡在0.0239~0.239 mg·mL^-1(r=0.999 9)范围内线性关系良好，平均加样回收率为99.19%。结论: 该方法简便快捷，重现性好，节省大量时间与成本，方法精密度和准确度都有所提高，可为复方甘草片的质量控制提供方法。
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  气相色谱内标法测定香料用鸢尾中的鸢尾酮

  韩桂军, 李思锋, 祁桦, 周军辉

  药物分析杂志. 2013, 33(11): 1924-1927.

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  目的: 建立测定香料用鸢尾中鸢尾酮含量的气相色谱内标法。方法: 样品经索式提取后，以α-紫罗兰酮为内标物，以毛细管气相色谱内标法测定样品中α-鸢尾酮与γ-鸢尾酮的含量。色谱条件：采用Rtx^®-1毛细管柱(30 m×0.25 mm，0.25 μm)，程序升温(起始温度70℃，以5℃·min^-1速率升到340℃，保持5 min)，载气为氮气，检测器为FID，检测器温度220℃，进样口温度200℃。结果: 在选定色谱条件下，α-鸢尾酮和γ-鸢尾酮浓度分别在5.45~174.4 μg·mL^-1(r=0.9995)及6.10~183.0 μg·mL^-1(r=0.9998)范围内有良好的线性关系。平均回收率(n=6)分别为96.53%和97.16%。结论: 该方法简便、灵敏、准确，可用于香料用鸢尾中鸢尾酮含量的测定。
安全监测
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  C57-ras转基因小鼠模型的建立

  周舒雅, 左琴, 刘甦苏, 胡培丽, 吕建军, 杨艳伟, 张頔, 李保文, 岳秉飞, 范昌发

  药物分析杂志. 2013, 33(11): 1928-1934.

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  目的: 建立用于临床前药物安全性致癌评价的人类原癌基因c-Ha-ras转基因小鼠模型。方法: 通过PCR方法克隆人的原癌基因c-Ha-ras，全长6.5 kb，含有4个外显子，以及该基因本身的启动子、调控序列和poly A信号序列；并将其通过原核注射注入C57BL/6J小鼠受精卵雄原核。通过PCR，real-time RT PCR和反转录cDNA测序比对等手段鉴定c-Ha-ras基因的插入和表达，并结合病理切片分析自发肿瘤的发生。结果: 人类原癌基因c-Ha-ras在原核注射后的基因整合率达到1.6%，共得到人类c-Ha-ras基因的插入的首建鼠6只，其中3只得以成活，并且人类c-Ha-ras基因能够稳定遗传，建成C57-ras转基因小鼠系；C57-ras转基因小鼠反转录cDNA测序比对与人源c-Ha-ras一致；3个转基因小鼠系c-Ha-ras基因的表达分别是野生型小鼠的70.53、59.07和99.68倍；病理切片分析，6只首建鼠中3只有自发肿瘤发生。结论: 本研究成功建立了C57/B6J背景的人类c-Ha-ras转基因小鼠模型。该C57-ras转基因小鼠的制作和用途已申请专利(CN101532018A)，这是我国首个以临床前药物致癌性实验为目的的c-Ha-ras转基因小鼠，也是在我国建立符合ICH规范的、拥有自主知识产权的临床前药物安全性致癌评价替代方法体系的基础。
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  C57-ras转基因小鼠模型的MNU验证实验

  吕建军^1,2, 刘甦苏^1,3, 左琴^1,3, 周舒雅^1,3, 杨艳伟^1,2, 张頔^1,2, 汪巨峰^1,2, 范昌发^1,3

  药物分析杂志. 2013, 33(11): 1935-1941.

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  目的: 建立国内用于药物临床前安全评价致癌性实验替代方法的C57-ras转基因小鼠模型，并通过甲基亚硝基脲(N-methyl-N-nitrosourea，MNU)进行初步验证。方法: C57-ras转基因雄性小鼠与BALB/c雌性小鼠杂交，子代通过PCR进行基因型检测，获得C57-ras转基因和野生型小鼠。实验设定2个剂量，75 mg·kg^-1 MNU和150 mg·kg^-1 MNU单次腹腔注射给药，共5个组，其中75 mg·kg^-1 MNU设3个组：(1)转基因小鼠MNU组； (2)野生型小鼠溶媒组；(3)野生型小鼠MNU组；150 mg·kg^-1 MNU设2个组：(1)转基因小鼠MNU组；(2)野生型小鼠MNU组。其中溶媒组给予同等体积柠檬酸缓冲液，给药后观察29周，观察动物一般症状、生存率、肿物出现时间及大体剖检观察并进行组织病理学检查。结果: 75 mg·kg^-1 MNU给药组小鼠生存率高于150 mg·kg^-1 MNU。75 mg·kg^-1 MNU给药后诱发C57-ras转基因小鼠发生淋巴瘤；150 mg·kg^-1 MNU给药后诱发C57-ras转基因小鼠发生淋巴瘤、肺脏腺瘤和直肠纤维肉瘤。野生型动物溶媒组和野生型动物MNU组均无肿瘤发生。结论: 初步验证了自主建立的C57-ras转基因小鼠模型，该模型是临床前药物安全性评价致癌性实验快速替代实验候选模型之一。
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  HPLC法对胸腺法新及其制剂中杂质检查

  程磊¹, 唐洋明², 殷果³, 毕开顺¹, 陈晓辉¹, 王铁杰³

  药物分析杂志. 2013, 33(11): 1942-1947.

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  目的: 测定胸腺法新及其制剂中的杂质并对含量超过0.1%的杂质进行结构鉴定。方法: 建立一种高效液相色谱法测定胸腺法新及其制剂中的杂质。含量超过ICH规定质控限度(0.1%)的杂质分别接取流分，脱盐富集之后使用MALDI-TOF/TOF质谱仪分析，推测其结构。合成杂质对照品后确证其结构，并进行杂质测定的方法学研究，测得各杂质相对于胸腺法新的校正因子。结果: 通过对上市的多批胸腺法新及其制剂的分析可知，含量高于0.1% 的杂质主要有4种。杂质1为胸腺法新肽序脱除第3个丙氨酸的多肽；杂质2为第1个丝氨酸右消旋化的多肽；杂质3为最后1个天冬酰胺右消旋化的多肽；杂质4为最后1个天冬酰胺水解为天冬氨酸的多肽。本法精密度、重复性、稳定性、耐用性好。杂质1、2、3、4在各自的线性范围内线性关系均良好(r≥0.9997)，相对于胸腺法新的校正因子分别为0.98、1.06、1.24、1.30。杂质1、2、3、4的检测限分别为0.083、0.077、0.080、0.080 μg·mL^-1；定量限分别为0.25、0.23、0.24、0.24 μg·mL^-1；平均回收率分别为99.2%、100.0%、100.1%、98.8%，RSD分别为1.3%、1.2%、1.0%、0.90%(n=9)。结论: 该方法可用于检查胸腺法新及其制剂中的杂质。
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  液质联用法检测知柏地黄丸中氯霉素残留的研究

  黄红萍, 郑建洪

  药物分析杂志. 2013, 33(11): 1948-1952.

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  目的: 建立高效液相色谱串联质谱技术测定知柏地黄丸中残留氯霉素的含量。方法: 采用高效液相-电喷雾-串联四极杆质谱法(HPLC-ESI^--MS-MS)测定知柏地黄丸中残留氯霉素的含量。选用Thermo C₁₈(250 mm×4.6 mm，5 μm)色谱柱，流动相为甲醇-水(起始比例为40∶60，梯度洗脱)，流速为0.5 mL·min^-1，进样量为20 μL，定量离子对为m/z 152(负离子)，监测模式为多重反应监测(MRM)。结果: 测定的检出限为0.2 μg·kg^-1，线性范围为1.0~200 ng·mL^-1，回收率为87.64%~94.23%，RSD为1.7%~13%。结论: 该方法操作简便、灵敏、准确，能够满足残留检测的要求。
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  硝酸甘油片有关物质方法的辅料扣除及质谱定性研究

  王琳¹, 余倩¹, 张喆¹, 郑洁¹, 古海锋¹, 车宝泉¹, 丛骆骆²

  药物分析杂志. 2013, 33(11): 1953-1957.

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  目的: 建立液质联用法鉴别硝酸甘油片中的辅料，解决硝酸甘油片质量标准中有关物质辅料峰的判定和扣除问题。方法: 采用Lichro CART C₁₈色谱柱，流动相为乙腈-水(50∶50)，大气压化学电离源，一级质谱全扫描，考察辅料峰的归属。通过重复性、稳定性和耐用性实验，以及水分的测定，考察辅料峰面积的稳定性。结果: 样品色谱图中保留时间2.8min前的色谱峰为辅料峰，且该辅料峰在紫外检测和质谱检测中的响应值均主要源自聚维酮K 29/32。辅料峰的保留时间和峰面积均具有较好的重复性、稳定性和耐用性。扣除辅料峰后，3批硝酸甘油片样品的有关物质结果均符合规定。结论: 本研究建立的液质联用法测定硝酸甘油片中的辅料，操作简单，结果准确，为相关辅料的研究提供了技术依据。根据辅料峰的归属和耐用性考察结果，为中国药典2010年版二部中硝酸甘油片质量标准修订提供了参考。
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  离子色谱法测定注射用融合蛋白中磷酸根的含量

  蔡鹏, 钱保勇

  药物分析杂志. 2013, 33(11): 1958-1960.

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  目的: 建立注射用融合蛋白中磷酸根的含量测定方法。方法: 采用AG-11HC保护柱和AS11-HC分析柱(250 mm×4 mm，5 μm)以30 mmol·L^-1KOH为流动相，流速1 mL·min^-1，电导检测器，柱温为30℃。结果: 磷酸根在1.0~100.0 ug·mL^-1浓度范围内线性关系良好，相关系数为0.9999(n=6)；定量限为0.02 μg·mL^-1(S/N≥10)，检测限为0.004 μg·mL^-1(S/N≥10)；回收率为102.3%(n=6)。结论: 本方法选择性高，灵敏度好，测定结果较为准确，可用于注射剂中磷酸盐的测定。
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  复方蜂胶胶囊中添加格列波脲的检测

  黄海燕¹, 饶伟文¹, 何轶², 赵书林³

  药物分析杂志. 2013, 33(11): 1961-1963.

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  目的: 对保健食品复方蜂胶胶囊中非法添加的格列波脲进行定性。方法: 采用薄层色谱法、高效液相色谱法、液相色谱质谱联用法，对复方蜂胶胶囊中非法添加的格列波脲进行定性分析。结果: 薄层色谱样品和对照品斑点位置与颜色相同；HPLC样品色谱图中出现与对照品保留时间一致的色谱峰；HPLC-PAD-MS中，样品与对照品保留时间和PAD光谱一致，一级质谱、二级质谱相同。结论: 发现该保健食品中非法添加新组分格列波脲。
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  复方醋酸甲地孕酮片有关物质测定方法的建立

  李洁¹, 党楠²

  药物分析杂志. 2013, 33(11): 1964-1970.

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  目的: 建立复方醋酸甲地孕酮片有关物质测定方法。方法: 采用LC-MS-UV联用技术对复方醋酸甲地孕酮片中最大杂质(杂质B)和次大杂质(杂质A)进行结构确证，并采用HPLC法对其定量，对其他杂质按自身对照法计算。采用Agela Vensuil XBP C₁₈(L)色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流动相：乙腈-水(50∶50)，流速：1.0 mL·min^-1，检测波长：243 nm(杂质A、杂质B)，291 nm(其他杂质)，柱温：30℃，进样量：20 μL。结果: 杂质A和杂质B的浓度分别在0.308~10.28 μg·mL^-1和1.137~113.7 μg·mL^-1范围内线性关系良好，相关系数(n=5)均为1.000，平均回收率分别为101.9%和99.6%(n=9)，RSD为0.83%和1.1%(n=3)，最低检出限分别为0.5 ng和1.1 ng。结论: 所建立的方法简便、快速，可准确测定该制剂中杂质含量。
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  热原检测的3种方法在非肠道用制品检测中的适用性比较研究

  杜颖, 蔡彤, 刘倩, 张横, 贺庆, 裴宇盛, 张媛, 高华, 谭德讲

  药物分析杂志. 2013, 33(11): 1971-1978.

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  目的: 选用3种含不同类别热原的非肠道用制品对家兔热原检查法(RPT)、细菌内毒素检查法(BET)和新的体外热原检查法(IPT)3种不同原理的热原检测方法进行比较研究，以期评价它们在制品检测中的准确性、可靠性和适用范围，为今后制品选择适宜的检查方法提供科学的依据，确保制品临床使用的安全性。方法: 用3种热原检测方法分别对b型流感嗜血杆菌结合疫苗(Hib)、卡介菌多糖核酸注射液(BCG-PNA注射液)和红花注射液3种制品进行检测，以药典规定的人用热原限量标准为判断依据，比较3种方法所测制品中致热物质含量(相当于内毒素标准单位)之间的差异。结果: 3种检查法检测Hib的结果均一致(为合格)[RPT法(<50 EU·mL^-1)、BET法(4.63·mL^-1)和IPT法(<1 EU·mL^-1)]，但检测BCG-PNA注射液[在RPT法(<50 EU·mL^-1)和IPT法(46.50 EU·mL^-1)的结果均为合格，但BET法(4455.5 EU·mL^-1)的结果为不合格]和红花注射液[RPT法(>2.5 EU·mL^-1)的检测结果为不合格，而BET法(<0.3 EU·mL^-1)和IPT法(<0.9 EU·mL^-1)的结果均为合格]的结果却有所不同。结论: Hib适用于3种检测方法，可考虑选用IPT法或BET法替代RPT法；BCG-PNA注射液适用于RPT法与IPT法，不适用于BET法，所以今后可能只有考虑选用IPT法替代RPT法；红花注射液目前最好还是使用RPT法对其进行热原检测。本研究也证明，对于BET法和IPT法的广泛应用还需要更多的研究与评价。
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  药品包装材料检验标准中安全性检查有关问题的探讨

  徐晓月, 何燕, 殷飞, 杨海燕

  药物分析杂志. 2013, 33(11): 1979-1983.

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  安全性检查是药品包装材料检验标准的重要内容之一，是确保药品质量安全不可缺少的检验项目。近几年来，笔者在进行药品包装材料生物试验方面的检验工作中发现，药品包装材料现有检验标准有待进一步完善、提高和统一，尤其是与生物安全性检查相关的方法，如细胞毒性、热原、急性全身毒性、皮肤致敏、不溶性微粒、细菌内毒素和无菌检查方法。现将有关问题进行探讨，供药品包装材料标准制修订参考，并提请检验人员、生产企业及药监部门注意。
标准研讨
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  不同加工方法对泸州山银花品质影响的研究

  刘艳¹, 何兵¹, 熊伟², 李春红¹, 田吉¹

  药物分析杂志. 2013, 33(11): 1984-1988.

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  目的: 探讨不同加工方法对泸州山银花品质的影响，为泸州山银花加工方法的筛选提供依据。方法: 采用阴干、晒干、真空干燥、远红外干燥、微波干燥、烘干6种方法加工山银花，对外观性状进行描述，采用高效液相色谱法测定山银花中新绿原酸、绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸C的含量。色谱柱为Kromasil C₁₈柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液，梯度洗脱；检测波长326 nm；柱温30℃；流速1 mL·min^-1；进样量10 μL。结果: 6种加工方法中，真空干燥样品中新绿原酸、绿原酸、异绿原酸A及异绿原酸C的含量分别为0.094%、2.982%、1.804%、0.255%，高于其他5种方法所得样品；外观颜色和油润度均比其他5种方法好。结论: 真空干燥方法得到的样品外观品相好，测得的新绿原酸、绿原酸、异绿原酸A及异绿原酸C含量高，明显优于其他干燥方法。
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  可吸收性明胶海绵的质量研究及控制

  骆红宇¹, 张丽梅¹, 黄清泉², 刘斌¹

  药物分析杂志. 2013, 33(11): 1989-1994.

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  目的: 对可吸收性明胶海绵产品质量进行研究和控制。方法: 采用凯氏定氮法测定明胶海绵的蛋白含量、氯胺T法测定羟脯氨酸含量、变色酸钠法测定甲醛残留量，采用中国药典2010版方法测定干燥失重、硫酸盐灰分、重金属、铬含量等性能，同时还对产品的酸碱度、可消化性实验方法进行阐述。结果: 进口及国产共5批可吸收性明胶海绵样品中，1~4^＃样品明胶海绵中蛋白含量按干燥品计，均大于95%；羟脯氨酸含量按干燥品计均大于12%；2~5^＃样品单包装样品中甲醛残留量最高约为160 μg；1^＃、3^＃、4^＃样品干燥失重的测定结果约为15%；硫酸盐灰分不大于2.0%；重金属不大于30 mg·kg^-1；水浸提液的pH测定结果均在4.0~5.5之间；铬含量不大于2 mg·kg^-1；液体吸收量不少于自身重量的35倍；同一实验条件下1~4^＃样品可消化性实验表明，国产产品的消化时间明显高于进口产品，且均一性不如进口产品。结论: 本文所采用及建立的质量研究方法，可较全面地评价可吸收性明胶海绵的质量，从而对其质量进行有效控制。
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  土牛膝及广东土牛膝的性状、显微比较研究

  余坤子, 张继, 魏锋, 马双成

  药物分析杂志. 2013, 33(11): 1995-2000.

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  目的: 对市场上出现的土牛膝混淆品进行鉴定，并建立土牛膝及其混淆品的性状及显微鉴别方法。方法: 在植物分类学鉴定的基础上，对土牛膝的混淆品广东土牛膝进行鉴定，并使用性状与显微的研究方法，对采集及市场上收集土牛膝及广东土牛膝样品进行比较分析。结果: 通过研究发现，土牛膝与广东土牛膝可以通过性状、根横切面及粉末的显微特征进行区分，两者区别明显。结论: 土牛膝与广东土牛膝可以通过性状、显微等方面进行鉴别；通过对两者性状、显微的细致研究，为相关标准的修订及提高提供依据。
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  气相色谱法测定盐酸美金刚胶囊的含量

  吴成杰, 潘正斐

  药物分析杂志. 2013, 33(11): 2001-2004.

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  目的: 建立盐酸美金刚胶囊剂含量测定的GC分析方法。方法: 样品先碱化后用甲苯萃取。色谱系统采用HP-5气相色谱柱(30 m×0.32 mm，膜厚0.25 μm)，柱温为程序升温，起始温度50℃，以20℃·min^-1的速率升至145℃，再以30℃·min^-1的速率升至250℃，保持5 min，氢火焰离子化检测器(FID)，分流比为10∶1。用盐酸金刚烷胺作为内标物，按内标法以峰面积计算。结果: 盐酸美金刚浓度在10~60 μg·mL^-1范围内，与主成分峰与内标峰面积比值呈良好的线性关系，r=0.9998；定量限(S/N=10)为4 ng；平均回收率(n=9)为99.8%；精密度RSD(n=6)为0.25%；重复性试验，样品含量的平均值(n=6)为102.3%，RSD为0.90%。结论: 该方法简单、准确，重复性好且专属性强，可用于盐酸美金刚胶囊剂的含量测定。
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  首批盐酸西布曲明2个去甲基衍生物化学对照品的研制

  吴先富, 张娜, 马玲云, 肖新月

  药物分析杂志. 2013, 33(11): 2005-2008.

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  目的: 建立供含量测定用的盐酸西布曲明两个去甲基衍生物(盐酸N-单去甲基西布曲明和盐酸N，N-双去甲基西布曲明)的首批化学对照品。方法: 应用UV、IR、NMR和ESI-MS对盐酸N-单去甲基西布曲明和盐酸N，N-双去甲基西布曲明对照品进行结构鉴定，并采用HPLC法、醇中碱电位滴定法和高氯酸非水电位滴定法进行纯度分析和含量测定。结果: HPLC测得两者的纯度分别为99.15%和99.33%；醇中碱电位滴定法测得两者的含量分别为101.3%和101.2%；高氯酸非水电位滴定法测得两者的含量分别为101.2%和100.6%。结论: 本文中建立的醇中碱滴定法简便、准确、无汞污染，适用于盐酸西布曲明2个去甲基衍生物的含量测定。盐酸N-单去甲基西布曲明和盐酸N，N-双去甲基西布曲明对照品的建立为减肥类保健食品中非法添加西布曲明衍生物的检测和监督提供有力支持。
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  美日参比制剂目录的介绍与我国参比制剂目录遴选原则的探讨

  黄海伟, 牛剑钊, 林兰, 张启明

  药物分析杂志. 2013, 33(11): 2009-2012.

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  美国和日本对参比制剂都有明确的规定，并建立了详细的参比制剂目录，也可称之为"橙皮书"，而在我国，尚未建立参比制剂目录。此次《国家药品安全"十二五"规划》仿制药质量一致性评价正好是我国药品参比制剂目录(橙皮书)建立的契机。本文对美国和日本参比制剂目录进行了介绍，进一步探讨如何在我国建立参比制剂目录，对参比制剂的遴选方式和遴选流程提出建议。
综述专论
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  微流控芯片技术在药物活性研究中的应用进展

  蔡亚梅, 洪战英, 朱臻宇, 柴逸峰

  药物分析杂志. 2013, 33(11): 2013-2018.

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  微流控芯片技术作为近年来最前沿的分析技术之一，具有微型化、高通量、高内涵、多功能集成等特点，在药物活性研究领域中得到广泛的关注。本文简单介绍了微流控芯片的原理和相关技术，从细胞、“器官”、模式生物3个层面综述微流控芯片技术在药物活性研究中的应用进展，并展望了微流控芯片的发展前景。
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  生物样品中化学药物定量分析方法验证的进展与解读

  于敏, 张双庆, 李佐刚

  药物分析杂志. 2013, 33(11): 2019-2024.

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  建立可靠的和可重现的定量分析方法是进行药代动力学、毒代动力学、生物等效性、生物利用度等研究的关键之一。为了保证分析方法可靠，必须进行方法验证。本文通过分析总结国内外指导原则、文献、会议报告等，介绍了生物分析领域的若干重要会议和指导原则颁布实施过程，综述了小分子化学药物生物分析方法验证应当包括的内容和具体验证方法，总结了我国与美国和欧盟的指导原则在某些细节规定上的差异，以及将来的全球一致化进程。