2014年, 第34卷, 第10期　
刊出日期：2014-10-25

  

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综述专论
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  附子生物碱化学成分和质量控制的研究进展

  陈思, 李武宏, 陈啸飞, 刘敏, 朱臻宇, 柴逸峰

  药物分析杂志. 2014, 34(10): 1709-1717.

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  附子具有强心、抗炎、抗风湿性关节炎等功效,其主要生物活性成分是生物碱。本综述主要介绍附子生物碱的化学成分和质量控制分析方法的研究进展。特别对用于质量控制的分析方法如光谱法、薄层色谱法(TLC)、高效液相色谱法(HPLC)、液-质联用法(LC-MS)、毛细管电泳法(CE)、高速逆流色谱法(HSCCC)进行了详细的论述,为今后附子的研究与应用提供必要的参考。
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  衍生化技术用于生物基质中性激素LC-MSⁿ检测的进展

  毋丹, 王漪璇, 钱隽

  药物分析杂志. 2014, 34(10): 1718-1726.

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  性激素的定量分析在生命科学、临床医学等研究领域和检验检测工作中起着重要的作用。性激素在生物体内含量极低,由于其化学结构中缺少可离子化的官能团,液相色谱-质谱联用(LC-MSⁿ)分析时检测灵敏度不高。利用衍生化技术对其进行结构修饰是提高质谱响应的有效手段。本文对性激素LC-MSⁿ检测的柱前衍生化方法的研究近况进行综述,并探讨了存在的问题,为今后性激素衍生化的深入研究提供参考。
成分分析
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  白芍化学成分的高效液相色谱-电喷雾质谱研究

  任浚萁, 刘春明, 王乐奇, 张语迟

  药物分析杂志. 2014, 34(10): 1727-1731.

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  目的: 采用高效液相色谱-电喷雾质谱联用技术(LC-ESI/MS)对白芍乙醇提取物中的化学成分进行分析鉴定。方法: 选用反相C₁₈色谱柱,以0.02%醋酸溶液(A)-甲醇(B)作为液相色谱流动相,梯度洗脱(0~2 min,13%B,2~120 min,13%B→100%B),流速0.8 mL·min^-1,检测波长270 nm,柱温30 ℃,进样量10 μL。利用二极管阵列检测器(PDA)和电喷雾质谱(ESI-MS)正离子模式和负离子模式在线检测化学成分,扫描范围m/z 50~1000;离子阱条件:喷雾电压4.5 kV,鞘气辅助气为氮气,金属毛细管温度250 ℃,金属毛细管电压20 V。结果: 共鉴定出8个化学成分,分别为芍药内酯苷、异芍药苷、芍药苷亚硫酸酯、没食子酰基芍药苷、芍药苷、苯甲酰芍药苷、氧化芍药苷和苯甲酰氧芍药苷。结论: 利用液质联用技术对白芍中化学成分进行分析可以快速分析鉴定白芍中的化合物并提供结构信息。
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  HPLC法测定复方醋酸棉酚片中棉酚异构体含量

  姚军^1,2, 李海芳³, 何晓文², 李莉², 鹿毅¹

  药物分析杂志. 2014, 34(10): 1732-1736.

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  目的: 建立测定复方醋酸棉酚片中(-)-棉酚及(+)-棉酚含量的高效液相色谱方法。方法: 以N,N-二甲基甲酰胺为溶剂,(R)-(-)-2-胺基-1-丙醇为衍生化试剂,90 ℃下水浴加热30 min进行衍生化反应。含量测定使用Agilent XDB-C₁₈色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为10 mmol·L^-1 磷酸二氢钾缓冲液(pH=3.0)-乙腈(20:80),流速1.0 mL·min^-1,检测波长247 nm,柱温40 ℃。结果: (-)-棉酚和(+)-棉酚浓度分别在1.88~37.6 μg·mL^-1和1.98~30.7 μg·mL^-1范围内呈良好线性关系;(-)-棉酚及(+)-棉酚的平均回收率分别为101.0%和101.2%,RSD分别为2.3%和2.0%。结论: 该方法可以准确测定复方醋酸棉酚片中(-)-棉酚及(+)-棉酚含量,有效提高其现有标准的质量控制水平。
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  HPLC法测定披针叶黄华不同部位中金雀花碱及其衍生物的含量

  周军辉, 石新卫, 崔新爱, 韩桂军, 谢斌

  药物分析杂志. 2014, 34(10): 1737-1740.

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  目的: 建立披针叶黄华不同部位中金雀花碱及其衍生物的高效液相色谱分析方法。方法: 采用Lichrospher Si-120A色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),以甲醇-乙醚-5%氨水(46:52:2)为流动相,流速1.0 mL·min^-1,检测波长310 nm,柱温为室温。结果: 金雀花碱与其2个衍生物完全分离,金雀花碱、N-甲基金雀花碱和N-甲酰基金雀花碱在各自的线性范围内线性关系均良好(r≥0.9999),最低检测限分别为0.5、0.1、0.3 μg·mL^-1,分别测定了披针叶黄华不同部位中3个成分的含量。结论: 该方法可用于披针叶黄华中金雀花碱及其衍生物的测定,为金雀花碱生产原料的采收提供了依据。
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  HPLC-ELSD及GC-MS法分析参麦注射液及中间体糖类成分

  曹树萍^1,2, 聂黎行², 刘丽娜², 王钢力², 林瑞超¹

  药物分析杂志. 2014, 34(10): 1741-1745.

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  目的: 对参麦注射液及其中间体的糖类化合物进行定性分析。方法: 首先采用HPLC-ELSD结合Alltech Prevail^TM Carbohydrate ES色谱柱(250 mm×4.6 mm,4 μm)对糖类型做初步判断,流动相为乙腈-水(70:30),再利用Agilent气相色谱-质谱联用仪结合Agilent HP-5MS玻璃毛细管色谱柱(30 m×0.25 mm,膜厚0.25 μm)对含有的糖类化合物进行分析。结果: HPLC-ELSD法可以鉴定出参麦注射液及其中间体仅含三糖以下的糖。GC-MS法进一步分析显示麦冬醇提液主要含葡萄糖、果糖、蔗糖3种糖,红参醇提液和参麦注射液中主要含葡萄糖、果糖、蔗糖、麦芽糖4种糖。结论: 本法可以快速鉴定出参麦注射液及其中间体样品的糖类化学成分。
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  一种重组戊型肝炎疫苗抗原的一级结构分析

  陶磊, 韩春梅, 饶春明, 王军志

  药物分析杂志. 2014, 34(10): 1746-1750.

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  目的: 对一种重组戊型肝炎疫苗抗原的一级结构进行分析。方法: 采用液质联用的方法测定其相对分子质量;采用变性剂使重组戊肝疫苗抗原的空间结构充分打开,用胰蛋白酶对其进行酶解,液质联用测定酶解后样品的液质肽图;结合质谱相对分子质量的测定及液质肽图的解析对其一级结构进行分析。结果: 该抗原的氨基酸序列与理论一致,部分蛋白的N-末端缬氨酸存在乙酰化修饰,修饰率约为40%;链内唯一1个半胱氨酸处于还原状态,未参与链间二硫键的形成。结论: 采用合适的酶解方法结合液质联用技术,对该疫苗抗原的氨基酸序列进行了确证,并对翻译后修饰进行了鉴定,所用方法可为其他重组疫苗抗原的一级结构分析提供参考。
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  高效凝胶色谱法测定角膜接触镜护理液中泊洛沙姆含量

  文燕, 张莉, 陈靖云, 何涛, 王敏珠

  药物分析杂志. 2014, 34(10): 1751-1754.

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  目的: 建立高效凝胶色谱法测定角膜接触镜护理液中有效成分泊洛沙姆含量。方法: 选择市场上含有泊洛沙姆的角膜接触镜多功能护理液及润滑液,以水凝胶色谱柱Shodex OHpak(SB 802.5)为分离柱,柱温30 ℃,流动相为磷酸二氢钠溶液(0.02 mol·L^-1)-乙腈(7:3),流速0.7 mL·min^-1;示差折光检测器测定。结果: 分析显示泊洛沙姆在浓度0.2~3.0 mg·mL^-1范围内线性良好,标准曲线为Y=1.025×10⁴X+1.261×10⁴(r=0.9993);精密度试验(n=6)的RSD为1.1%之间;通过标准加入法测定泊洛沙姆的平均回收率在97%~103%之间。结论: 建立的高效凝胶色谱法经方法学验证,可作为隐形眼镜护理液及润滑液中有效成分泊洛沙姆质量控制的方法之一。
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  三七伤药片超高效液相色谱特征图谱的研究

  胡晓茹¹, 杨美丽², 孙磊¹, 王明娟¹, 李爱华³, 戴忠¹, 马双成¹

  药物分析杂志. 2014, 34(10): 1755-1762.

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  目的: 建立三七伤药片的UPLC特征图谱,为三七伤药片的质量评价提供参考。方法: 采用UPLC法建立特征图谱,通过液质联用对特征峰进行指认。采用ACQUITY UPLC BEH C₁₈(50 mm×2.1 mm,1.7 μm)色谱柱,以乙腈(A)-0.1%甲酸溶液(B)为流动相进行梯度洗脱(0~10 min,4%A→12%A;10~22 min,12%A→16%A;22~35 min,16%A→25%A),流速0.2 mL·min^-1,检测波长230 nm,柱温40 ℃;并采用电喷雾离子源进行正/负离子模式同时扫描,对特征峰进行指认。采用Chempattern^TM软件将三七伤药片的特征图谱生成共有模式,并进行PCA统计分析,以各主要色谱峰的保留时间和峰面积为变量得到Score图和Loading图。结果: 以柚皮苷峰为参照物峰建立三七伤药片UPLC特征图谱,确定了8个共有特征峰,并指认了新北美圣草苷、芍药苷、羟基红花黄色素A和柚皮苷4个特征峰。采用主成分分析(PCA)对特征图谱数据进行分析,结果表明不同样品化学成分存在差异,其中柚皮苷、新北美圣草苷和芍药苷的差异较大。结论: 建立的UPLC特征图谱方法具有较好的稳定性和重现性,能为三七伤药片的质量控制提供参考。
代谢分析
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  液相色谱-电喷雾离子阱质谱法分析人尿中椒苯酮胺及其代谢产物

  史爱欣^1,2, 李可欣^1,2, 胡欣^1,2, 万华印³, 李茹冰⁴

  药物分析杂志. 2014, 34(10): 1763-1770.

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  目的: 建立液相色谱-电喷雾离子阱串联质谱法(LC-ESI-ITMSⁿ)法,对健康受试者静脉推注盐酸椒苯酮胺后尿液中的代谢产物进行研究。方法: 以椒苯酮胺对照品对LC-ESI-ITMSⁿ色谱及质谱条件进行优化,分析其电喷雾质谱的裂解规律,以此作为椒苯酮胺体内代谢物分析鉴定的依据。健康受试者每人静脉推注注射用盐酸椒苯酮胺0.6 mg·kg^-1,分段收集0~24 h尿液,经C₁₈小柱固相萃取后,采用LC-ESI-ITMSⁿ法对人尿中的代谢产物进行分析鉴定。结果: 在人尿中发现了椒苯酮胺及其氧化、还原、葡萄糖醛酸化结合等代谢产物共17个,其中有2个代谢产物结构与对照品对比得到确证。结论: 氧化还原反应、葡萄糖醛酸化是椒苯酮胺在人体内的重要代谢途径。
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  RRLC-MS/MS法测定大鼠血浆中咖啡酸四聚体的含量_及药代动力学研究

  毛艳¹, 张瑞萍², 贺金华¹, 王新堂¹, 王中华², 王惠青², 周帜²

  药物分析杂志. 2014, 34(10): 1771-1776.

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  目的: 建立大鼠血浆中咖啡酸四聚体(CAT)的测定方法,并研究其药代动力学。方法: 大鼠尾静脉注射CAT后不同时间经眼静脉采血,血浆样品经液-液萃取后,采用RRLC-MS/MS法,色谱柱为Agilent SB-C₁₈(4.6 mm×100 mm,1.8 μm),流动相为0.1%甲酸溶液(A)-乙腈(B),梯度洗脱(0~3 min,68%A;3~6.5 min,68%A→2%A;6.5~10 min,2%A),流速0.4 mL·min^-1,柱温30 ℃,进样量10 μL;质谱采用电喷雾离子源(ESI源),正离子模式检测,扫描方式为多反应监测(MRM)。结果: 咖啡酸四聚体检测限和最低定量限分别为5.7和11.4 ng·mL^-1;在11.4~1420 ng·mL^-1浓度范围内线性关系良好(r=0.9991);提取回收率为85.2%~97.1%;药动学参数:AUC_0-t为(1.25±0.25)mg·L^-1·h,t_1/2为(4.66±1,07)h^-1,K为(0.15±0.04)h^-1,CLz为(3.19±0.52)L·h^-1·kg^-1,Vz为(1.87±0.59)L·kg^-1。结论: 本方法专属性强、灵敏度高、准确性好,可用于咖啡酸四聚体的血药浓度测定。
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  乳糖脂修饰氧化苦参碱脂质体在家兔体内的药代动力学研究

  张梦, 柯玲玲, 唐直婕, 胡茂华, 周卿, 尚京川

  药物分析杂志. 2014, 34(10): 1777-1781.

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  目的: 建立高效液相色谱法检测乳糖酰磷脂酰乙醇胺修饰的氧化苦参碱脂质体(glycosylation oxymatrine liposome,LML)和普通氧化苦参碱脂质体(oxymatrine liposome,OM-L)在新西兰家兔体内血药浓度。方法: 分别给新西兰家兔耳缘静脉注射LML和OM-L后,于不同时间点从颈静脉取血。血浆经处理后采用高效液相色谱法检测,以槐定碱为内标,采用Hanbon Hedera ODS-2(4.6 mm×150 mm,5 μm)色谱柱,流动相0.05 mol·L^-1磷酸二氢钾-乙腈(93:7),流速1 mL·min^-1,检测波长215 nm。数据使用3P87药代动力学程序进行计算。结果: LML平均包封率为55.48%,平均粒径为80 nm。OM浓度在1.00~120 μg·mL^-1范围内,线性关系良好。血浆中OM提取回收率(n=5)为80.0%~84.0%,RSD≤0.60%。结论: 本方法符合方法学验证基本要求,适合测定OM在新西兰家兔体内的血药浓度;OM在新西兰家兔体内的消除符合二室消除模型。与OM-L相比,LML在体内的AUC值明显增大,清除率明显降低,提高了OM在体内的驻留时间。
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  用HPLC研究α-倒捻子素大鼠灌胃给药的排泄

  赵岩¹, 唐国胜¹, 侯莹莹¹, 蔡恩博¹, 刘双利¹, 杨鹤¹, 张连学¹, 王士杰²

  药物分析杂志. 2014, 34(10): 1782-1786.

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  目的: 研究α-倒捻子素大鼠灌胃给药的排泄特征。方法: 采用大鼠灌胃给予α-倒捻子素的方式,在24 h内收集胆汁,48 h内收集尿液和粪便,建立并采用HPLC测定生物样品中α-倒捻子素含量。生物样品采用甲醇提取;HPLC采用C₁₈(250 mm×4.6 mm,5 μm)反相色谱柱,流动相为甲醇-水(95:5),流速为1.0 mL·min^-1,检测波长为317 nm。结果: HPLC-UV方法测定,胆汁中α-倒捻子素浓度在0.12~120 μg·mL^-1,尿液中α-倒捻子素浓度在0.16~160 μg·mL^-1,粪便中α-倒捻子素浓度在0.26~5200 μg·g^-1,其峰面积与质量呈线性相关,相关系数大于0.999。α-倒捻子素灌胃给药后主要以粪排泄为主,占总药量的78.34%;其次为尿排泄,占总药量的2.32%,胆汁最低为0.10%。α-倒捻子素灌胃给药后原型药物主要通过粪便和尿途径排出体外,未发现其他代谢产物。结论: 所建立的HPLC-UV测定方法符合方法学考核要求,适用于大鼠灌胃α-倒捻子素后生物样品中原型药物的测定及其排泄研究;α-倒捻子素灌胃给药后主要以粪排泄为主,以原型药物排出体外。
生物检定
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  苦碟子注射液的安全性研究

  乔艳玲, 王钧, 王璐茜, 陈天焱, 邵文, 张昦昉

  药物分析杂志. 2014, 34(10): 1787-1791.

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  目的: 从体内和体外两方面探讨苦碟子注射液的安全剂量,为临床剂量提供参考依据。方法: 采用尾静脉注射法考察苦碟子注射液对小鼠的最大给药剂量,采用MTT法检测苦碟子注射液对小鼠成纤维细胞(L929)的半数抑制浓度(IC₅₀)及细胞毒性级别。结果: 苦碟子注射液对小鼠的最大给药剂量为40 mL·kg^-1;2个厂家苦碟子注射液的IC₅₀比较并无显著性差异(P>0.05)。原液对L929的细胞毒性级别为4级,稀释64倍时毒性级别为1级。结论: 苦碟子注射液对小鼠的最大给药剂量为40 mL·kg^-1,当稀释64倍时对L929基本无毒。
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  地衣芽孢杆菌活菌颗粒活菌数测定方法的建立

  郑小玲¹, 阮昊¹, 陈爽¹, 章鑫萍², 王知坚¹, 李珏¹

  药物分析杂志. 2014, 34(10): 1792-1795.

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  目的: 建立微生态活菌制品地衣芽孢杆菌活菌颗粒活菌数的测定方法。方法: 稀释液为灭菌生理盐水,采用营养琼脂平皿涂布法37 ℃培养18~24 h。结果: 该方法在2~326 CFU·皿^-1范围内菌落计数结果与预期菌落计数呈良好的线性关系,线性方程为Y=1.0082X-1.8532(r=0.9997);回收率为99.5%(n=9)。结论: 本方法经方法验证,结果准确可靠,重复性好,适用于地衣芽孢杆菌活菌颗粒的质量控制。
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  抗HCV复制调控区药物体外筛选模型的建立

  王玉梅^1,2, 梁璐³, 叶蕴华², 周亚伟³

  药物分析杂志. 2014, 34(10): 1796-1801.

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  目的: 建立抗丙型肝炎病毒(HCV)复制调控区体外药物筛选模型。方法: 将全长HCV的5'非翻译区(5' UTR)的cDNA克隆至启动子探测载体pEGFP-1,构建重组载体p5' NCR-EGFP,并转染至人肝癌细胞系HepG₂。获得的转染细胞以荧光显微镜检测及原位杂交法验证,并经流式细胞术分选。通过干扰素与利巴韦林2种常规抗病毒药物对所构建的模型进行初步应用。结果: 荧光显微镜下观察到绿色荧光蛋白(EGFP)的强表达,原位杂交检测到转染细胞的核区有特异性杂交信号。流式细胞术可检测到表达EGFP的阳性细胞达95%以上。初步运用结果显示,γ干扰素对该模型有明显的抑制作用,而利巴韦林及α-2b干扰素在本模型上的抑制作用较弱。结论: 该细胞模型经验证可以成为体外筛选抗HCV复制调控区药物的模型。
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  纤维蛋白原-凝血酶时间法用于水蛭质量控制方法的研究

  苏斌¹, 王志斌², 郭玉东², 宋程程¹, 胡宇驰², 王碧松²

  药物分析杂志. 2014, 34(10): 1802-1806.

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  目的：建立一种基于用血液凝固分析仪测定纤维蛋白原-凝血酶时间的水蛭生物活性测定方法(Fibg-TT法)，定义效价并建立水蛭标准品。方法：就基源为蚂蟥和日本医蛭的水蛭分别建立了反应体系，水蛭浸提液比空白对照凝固时间延长1 s作为1个效价单位(U)，定义并测得水蛭标准品效价。将高、中、低浓度的水蛭标准品和供试品的浸提液与0.5%的纤维蛋白原混合，加入凝血酶，用血凝仪测定凝固时间，结果进行对数转换后，用生物检定统计法中的量反应平行线3.3法测定供试品的效价。结果：本实验测得蚂蟥和日本医蛭标准品的效价分别为5650 U·g^-1和4130 U·g^-1，当两者浸提液的浓度分别在121.5~1130 U·mL^-1和17.3~66.1 U·mL^-1范围内时，对数凝固时间与浓度线性较好(r=0.9985；0.9965)，准确度(RSD=4.5%，n=6；RSD=3.6%，n=6)、重复性(RSD=3.8%，n=6；RSD=2.4%，n=6)和中间精密度(RSD=1.7%，n=6；RSD=2.4%，n=6)均良好，该方法测定结果可靠。结论：该方法用延长凝固时间来定义水蛭的效价，并建立水蛭标准品，具有可行性。Fibg-TT法，操作简便，人为因素影响小，客观准确，重复性和中间精密度好，能区分和量化不同批次水蛭的效价，可用于水蛭效价的测定，控制其质量。
质量分析
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  2013年度人乳头瘤病毒（HPV）核酸检测试剂盒抽验质量分析

  孙楠, 王玉梅, 刘艳, 于婷, 黄杰, 曲守方, 高尚先

  药物分析杂志. 2014, 34(10): 1807-1811.

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  目的:用4种方法对17家企业17批次的人乳头瘤病毒（HPV）核酸检测试剂盒进行评价性抽验结果分析，考察我国该类试剂的质量现状。方法：依据企业产品注册标准，对准确性、特异性、检测限3个项目进行检验，同时以国家参考品为样本，依据国家参考品说明书，进行探索研究。结果：本次监督抽验中，17批次试剂的准确性、特异性、检测限均符合产品注册标准的要求。在探索研究中发现，仅有10批次试剂符合特异性项目的要求，低危型别参考品交叉反应率最高为32.3%，高危型别参考品交叉反应率最高为10.0%。结论：各企业产品注册标准存在差异，在统一使用国家参考品检验时，存在交叉反应，特异性项目合格率较低，建议企业不断完善产品，将来统一使用国家参考品进行检测。
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  功能性氧化石墨烯-β-环糊精/利多卡因包合物的制备及其质量评价

  申玉坤^1,2, 申玉璞², 张龙娇², 潘一峰²

  药物分析杂志. 2014, 34(10): 1812-1816.

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  目的:合成新型的功能性氧化石墨烯-β-环糊精(GO-DEX-β-CD)药物载体和功能性氧化石墨烯-β-环糊精/利多卡因(GO-DEX-β-CD/LDH)包合物,并对其进行质量评价。方法:利用电子扫描显微镜(SEM)、原子力显微镜(AFM)对其形貌进行表征;以高效液相色谱法(HPLC)测定利多卡因(LDH)含量,并对生成物的包封率、回收率以及精密度进行评价,以离心法测定GO-DEX-β-CD/LDH包合物的包封率。结果:GO-DEX-β-CD/LDH包合物的平均粒径(n=15)为(121±5.23) nm,LDH检测浓度线性范围为20~100 μg·mL^-1(r=0.9990),平均回收率(n=3)为(100.4±0.44)%,包封率(n=5)为(72.1±1.12)%,GO-DEX-β-CD/LDH包合物具有良好的稳定性,对皮肤无刺激性。结论:GO-DEX-β-CD/LDH包合物制备工艺可行,质量控制方法简便可靠。
安全监测
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  实时直接分析质谱法快速筛查葡萄酒中9种甜味剂

  朱晓月¹, 施捷¹, 张喆¹, 胡琴¹, 车宝泉¹, 丛骆骆²

  药物分析杂志. 2014, 34(10): 1817-1022.

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  目的:建立一种实时直接分析质谱法快速筛查葡萄酒中安赛蜜、阿斯巴甜、纽甜、甘草次酸、麦芽糖醇、异麦芽酮糖、木糖醇、D-山梨醇、D-甘露醇共9种甜味剂。方法:实时直接分析离子源串联三重四极杆质谱,源电压为350 V,载气为氦气,源温度350 ℃,样品传输速度为2 mm·s^-1,采用子离子扫描模式直接分析葡萄酒样品,通过对照品与样品的二级质谱图对比进行非法添加成分的定性鉴别。结果:9种甜味剂检出限为2.5~20 μg·mL^-1,5批样品中检出麦芽糖醇、异麦芽酮糖、D-山梨醇及D-甘露醇,同时阐释了9种甜味剂的二级质谱裂解途径。结论:方法简单快速,每次检测时间仅需几秒,检测效率比液质联用法提高近25倍,适用于大批量葡萄酒中甜味剂类成分的快速筛查。
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  UPLC-MS/MS法测定中成药及保健品中添加的16种降糖类化学药物

  屠婕红¹, 盛静¹, 丁宝月¹, 徐宏祥², 傅应华¹

  药物分析杂志. 2014, 34(10): 1823-1829.

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  目的: 建立快速、准确检测中成药及保健品中非法添加的16种降糖类化学药物的方法。方法: 采用UPLC-MS/MS 法,使用Waters Acquity BEH-C₁₈(1.7 μm,2.1 mm×50 mm),以0.1%甲酸甲醇溶液(A)-0.1%甲酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱(0~3 min,32%A→50%A;3~6 min,50%A→60%A;6~9 min,60%A→70%A;9~11 min,70%A→90%A;11~12 min,90%A→90%A;12~13 min,90%A→32%A);流速:0.2 mL·min^-1;柱温:40 ℃;选择ESI离子源、正离子扫描、多反应离子监测(MRM)模式测定16种降糖类化学药物。通过比较MRM通道中样品峰与对照品峰的分子离子峰,二级碎片离子峰、色谱保留时间等信息确定添加的化学药物,并根据外标法以质谱峰面积计算添加药物的准确量。结果: 在上述色谱及质谱条件下,二甲双胍、丁二胍、苯乙双胍、罗格列酮、小檗碱、吡格列酮、氯磺丙脲、甲苯磺丁脲、妥拉磺脲、格列吡嗪、格列齐特、瑞格列奈、格列苯脲、格列美脲、那格列奈、格列喹酮等16种药物的分离度良好,方法定量下限(LOQ)均在0.2~1.5 ng·mL^-1之间,标准加样回收率均在88.6%~116.9%之间。结论: 本法快速准确,灵敏度高,可作为中成药及保健品中非法添加降糖类化学药物的定量测定方法。
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  聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性法用于检定川贝母掺伪情况的研究

  张文娟, 刘薇, 魏锋, 马双成

  药物分析杂志. 2014, 34(10): 1830-1835.

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  目的: 探讨聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)法在检定川贝母掺伪中的应用。方法: 将川贝母药材DNA与伊贝母药材DNA按不同比例混合,进行PCR扩增,限制性内切酶SmaI作用及琼脂糖凝胶电泳。通过这些实验,可以知道混合样品中伪品的检出限。接着,为了探究本实验中条带灰度与掺伪比例之间的关系,用Image J软件分析凝胶电泳图上的条带,根据未切割条带与切割条带的灰度比,得到标准化值。通过标准化值和掺伪比例2个参数,得到标准曲线,并进行准确性验证。结果: 低至0.5%的掺伪比例即可通过该方法被检测。随着掺伪比例增加,未切割条带逐渐增强,切割条带逐渐减弱,两者条带的灰度比值也逐渐增加,到掺伪50%时,几乎没有肉眼可见的切割条带。根据不同掺伪比例对应的标准化值做出标准曲线,经验证该标准曲线的误差率约为0.94%。结论: PCR-RFLP法用于川贝母掺伪检测的检出限为0.5%,灵敏度高;且可通过条带灰度定量的方法反应掺伪比例大小。本研究为改变川贝母PCR-RFLP检验的取样方式和确定取样量提供了实验依据。
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  超高效液相串联质谱法分析牛肉中残留的β-受体激动剂

  刘敬先, 苗翠, 刘笑, 徐丽佳, 王丽娜

  药物分析杂志. 2014, 34(10): 1836-1841.

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  目的: 建立牛肉中9种β-受体激动剂的UPLC-MS/MS分析方法,为食品安全监测提供数据支撑。方法: 样品用β-葡萄糖醛苷酶酶解4 h,高氯酸沉淀除杂,调节pH后,过MCX固相萃取小柱净化,氮气吹干后甲酸溶液复溶,进行UPLC-MS/MS分析。色谱柱:BEH C₁₈(50 mm×2.1 mm,1.7 μm);流动相:0.1%甲酸乙腈溶液(A)-0.1%甲酸水溶液(B),梯度洗脱(0~1 min,维持5%A;1~3 min,5%A线性变化至50%A;3~4 min,50%A线性变化至60%A;4~5 min,60%A线性变化至99%A;5~5.5 min,99%A线性变化至5%A;5.5~7.5 min,维持5%A);流速:0.4 mL·min^-1;柱温:30 ℃;进样量:10 μL。结果: 9种β-受体激动剂在0.5~10.0 μg·kg^-1添加浓度范围内线性关系良好,相关系数r≥0.9990,较高浓度时回收率范围为62.7%~107.9%,定量下限(LLOQ)规定为添加回收试验中S/N≥10时的最低添加浓度,结果均小于0.5 μg·kg^-1。结论: 经方法学验证,本方法专属性好,简便、准确、快速,适用于牛肉中β-受体激动剂的检测。
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  X-射线荧光元素分析技术快速筛查化妆品中铅、汞、砷、锑

  朱俐, 刘明理, 尹利辉, 王瑾

  药物分析杂志. 2014, 34(10): 1842-1846.

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  目的: 用X-射线荧光元素分析技术建立快速筛查化妆品中铅、汞、锑、砷的方法。方法: 本方法采用便携式X射线荧光元素分析仪,研究了乳液、霜及粉底对待测元素的基体影响,研究了元素间的干扰,考察了测量模式、测试时间和样品厚度对测量结果的影响。结果: 样品不需预处理,采用校正工作曲线法,均获得了非常好的线性,铅、汞、锑、砷回收率分别为98.3%、94.0%、89.1%、102.6%,检出限为铅2 mg·kg^-1、砷2 mg·kg^-1、汞3 mg·kg^-1、锑4 mg·kg^-1。对12种市售样品进行检测,并与ICP-AES数据比较,数据结果t检验分别为0.107、0.134,大于0.05,2种方法无显著性差异。结论: 该方法适用于快速筛查化妆品中的铅、汞、砷、锑。
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  胰酪胨大豆肉汤培养基和改良马丁培养基在药品无菌检查中的比较研究

  蔡芷荷¹, 严纪文², 卢勉飞¹, 杨宁¹, 吴清平³, 李艳嫦¹

  药物分析杂志. 2014, 34(10): 1847-1852.

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  目的:观察胰酪胨大豆肉汤培养基(TSB)和改良马丁培养基(MM)对真菌和需氧菌检测效果的差异。方法:选用3株细菌和3株霉菌试验菌株,用定性和定量2种方法分别测试培养基对试验菌株的促生长能力和检测灵敏度;定性方法参照现行中国药典;定量方法采用平板计数法。结果:定性和定量2种检测方法所得的实验结果基本一致,除腊叶芽枝霉外,在规定的条件下TSB和MM培养基对试验菌株的促生长能力比较,经统计学分析,差异无显著性(P>0.05);TSB培养基对所有试验菌株的检测灵敏度均可达到<1 CFU,下限可达到<0.1 CFU,与MM培养基比较,差异无显著性(P>0.05)。结论:在现行中国药典规定的接种和培养条件下,TSB培养基对试验菌株的促生长能力和检测灵敏度与MM培养基基本等同,能满足我国现行药典的检测要求。
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  二氧化钛催化光解法制备盐酸格拉司琼注射液光解产物及其有关物质检查方法探讨

  黄朝辉, 周征

  药物分析杂志. 2014, 34(10): 1853-1855.

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  目的: 解决2010年版中国药典(ChP 2010)二部所载盐酸格拉司琼注射液系统适用性溶液光解产物制备困难的问题。方法: 采用二氧化钛(TiO₂)催化光解法制备光解产物,并比较美国药典36版(USP 36)和ChP 2010所载2种HPLC色谱条件对有关物质的检查效果。结果: 100 mg TiO₂与0.2 mL盐酸格拉司琼注射液混合,在4500 lx照射4 h即能产生明显的目标光解产物。相比ChP 2010,USP 36所载色谱条件对光解产物有更好的分离效果。主要光解产物的保留时间在2种色谱条件下都比盐酸格拉司琼的长,这与ChP 2010所述相反。结论: TiO₂催化光解法解决了ChP 2010所载盐酸格拉司琼注射液系统适用性溶液光解产物制备困难的问题,提高了检测效率。USP 36的色谱条件更适合盐酸格拉司琼注射液有关物质的检查。主要光解产物在盐酸格拉司琼主峰后出峰。
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  蔓生百部质量标准研究

  张亚中^1,2, 袁杰¹, 班永生¹, 宗镇², 黄丽丹¹, 谢晓梅², 金斌¹

  药物分析杂志. 2014, 34(10): 1856-1860.

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  目的: 为控制蔓生百部药材的质量,建立蔓生百部药材的显微和薄层鉴别、水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物以及含量测定标准。方法: 从全国范围内收集10批蔓生百部药材,采用横切面及粉末进行显微鉴别;TLC法对生物碱类成分进行薄层鉴别;采用中国药典附录方法,对水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物进行测定;HPLC法测定蔓生百部中原百部碱含量,采用Phenomenex Gemini C₆-phenyl色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈-0.1%三乙胺(34:66),流速1.0 mL·min^-1,检测波长306 nm,柱温为30 ℃。结果: 与中国药典2010年版一部相比增加了质地、断面、气味、根被细胞的特征、中柱中韧皮部束与木质部束的个数和粉末特征等内容。增加的薄层色谱鉴别色谱斑点清晰,分离度较好。含量测定,原百部碱浓度在10.9~218.7 mg·L^-1范围内线性关系良好(r=1.0000),平均回收率为99.7%(RSD为1.6%,n=6)。结论: 本文建立的显微鉴别、检查、TLC鉴别及含量测定方法,可用于蔓生百部药材的质量标准。
标准研讨
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  HPLC法同时测定暴马子皮中紫丁香苷、橄榄苦苷的含量

  李明华¹, 程显隆^1,2, 陆以云², 余坤子², 魏锋^1,2, 吴清¹, 马双成²

  药物分析杂志. 2014, 34(10): 1861-1863.

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  目的:建立测定暴马子皮药材中2个成分(紫丁香苷、橄榄苦苷)的高效液相色谱分析方法。方法:采用Shiseido CAPCELL PAK-C₁₈(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱,流动相为0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B),梯度洗脱(0~45 min,5%B→40%B),流速1.0 mL·min^-1,DAD检测器,检测波长280 nm,柱温25 ℃。结果:紫丁香苷、橄榄苦苷线性范围分别为0.25~0.74 μg(r=0.9987)和0.9~13.1 μg(r=1.0000),平均加样回收率(n=6)分别为97.5%(RSD=1.3%)和98.2%(RSD=1.1%)。结论:不同来源的暴马子皮药材中紫丁香苷、橄榄苦苷含量均存在显著性差异。本方法操作简单快速,重复性好,为暴马子皮药材的质量控制研究奠定了良好的基础。
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  HPLC法同时测定柏药灌肠液中盐酸小檗碱和乌药醚内酯的含量

  李燕¹, 赵利刚², 彭宏峰³, 王春艳¹, 于桂兰¹, 王慧丽¹

  药物分析杂志. 2014, 34(10): 1864-1867.

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  目的: 建立同时测定柏药灌肠液中盐酸小檗碱和乌药醚内酯的HPLC方法。方法: 采用ZORBAX SB-C₁₈色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),以乙腈(A)-0.1%磷酸溶液(B)为流动相,梯度洗脱(0~5 min,40%A;5~10 min,40%A→60%A;10~15 min,60%A;15~20 min,60%A→40%A),流速1.0 mL·min^-1,检测波长235 nm,柱温30 ℃。结果: 盐酸小檗碱和乌药醚内酯的线性范围分别为21.20~212.0 μg·mL^-1(r=0.9995)和10.72~107.2 μg·mL^-1(r=0.9997);回收率(n=6)分别为98.8%和98.6%,RSD分别为1.4%和1.6%。结论: 该方法灵敏度高,专属性强,可用于柏药灌肠液的质量控制。
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  基于近红外光谱技术的蜂胶总黄酮含量分析

  陈慧真¹, 夏正燕²

  药物分析杂志. 2014, 34(10): 1868-1873.

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  目的: 应用可见/近红外光谱技术结合特征波长提取方法研究快速无损测定蜂胶毛胶中主要活性成分总黄酮含量的方法。方法: 对112个蜂胶样本进行光谱扫描,并采用紫外分光光度法测得蜂胶总黄酮的化学值。经过平滑、变量标准化、一阶及二阶求导、去趋势等预处理,选择最优预处理方法。采用3种有效波长提取方法:连续投影算法(SPA)、载荷系数法(x-LW)和回归系数法(RC),将提取的有效波长作为最小二乘-支持向量机(LS-SVM)、偏最小二乘法(PLS)和多元线性回归(MLR)的输入变量,分别建立了各种线性和非线性模型。结果: 以预测集的预测相关系数(R_p),预测标准误差(RMSEP)和相对分析误差(RPD)作为评价指标比较各模型。结果表明,蜂胶毛胶中总黄酮含量预测的最优模型为SPA-PLS模型,R_p=0.954,RMSEP=9.32,RPD=4.02。结论: 基于光谱技术和化学计量学方法的检测模型具有较好的检测效果,可作为蜂胶毛胶中有效成分的快速测定新方法。
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  盘龙七的质量标准研究

  冯永辉¹, 郭耀武², 李蔓鹭¹

  药物分析杂志. 2014, 34(10): 1874-1877.

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  目的:建立盘龙七药材的质量标准。方法:测定不同采收期或不同采集地盘龙七的水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物、重金属、砷盐的含量;采用TLC对盘龙七进行理化鉴别;采用HPLC测定盘龙七中岩白菜素的含量。结果:盘龙七的质量标准确定为:水分不得过14.3%,总灰分不得过15.2%,酸不溶性灰分不得过4.6%,水浸出物不得低于4.8%,95%乙醇浸出物不得低于3.7%,挥发性醚浸出物不得低于4.9%,铅的含量小于0.002%,砷盐含量小于0.0001%,岩白菜素含量应不少于2.3%。结论:本文建立的方法可作为评价盘龙七质量的标准。
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  金莲花的薄层鉴别与含量测定研究

  杨天寿¹, 肖新月², 安瑜¹, 张晓云³

  药物分析杂志. 2014, 34(10): 1878-1882.

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  目的: 建立金莲花的薄层鉴别与含量测定方法。方法: 比较甲醇、乙醇、70%乙醇等不同提取溶剂、不同展开系统在硅胶G板上的分离效果,建立金莲花的薄层色谱鉴别方法;比较不同溶剂的提取效果、不同流动相的分离效果,流速1.0 mL·min^-1,检测波长340 nm,ODS色谱柱柱温30 ℃,建立HPLC法测定金莲花中荭草苷、牡荆素的含量。结果: 建立的TLC法能很好分离各成分,HPLC法能够准确测定金莲花中荭草苷、牡荆素的含量。结论: 本文所建立的TLC、HPLC法可用于金莲花质量检测。
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  右旋糖酐铁注射液给药后注射部位未吸收铁含量检查方法改进研究

  石劲敏, 孙杰, 范俊沛, 唐黎明

  药物分析杂志. 2014, 34(10): 1883-1888.

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  目的: 采用微波消解法替代湿消解法对中国药典中右旋糖酐铁注射液品种的注射部位未吸收铁含量检查方法进行改进研究。方法: 参照中国药典方法,分别采用非自身对照加湿消解法、自身对照加湿消解法和自身对照加微波消解法来考察未吸收铁含量。家兔右后腿注射0.2 mL·kg^-1右旋糖酐铁注射液,7 d后处死,取出呈色肌肉,分别采用湿消解法或微波消解法对肌肉进行消化,消化完全的样品溶液采用 紫外分光光度法测定其530 nm的吸收度,计算未吸收铁含量。结果: 对微波消解法进行加样回收率测定,标准溶液和右旋糖酐铁注射液的平均加样回收率均在91.1%~113.1%之间,RSD在2.6%~14.4%之间。采用微波消解法检查右旋糖酐铁注射液给药后注射部位的未吸收铁含量,样品消化完全,空白对照OD值与湿消解法相比下降(OD值由0.2022下降为0.0413)并且稳定(SD值由0.1811下降为0.0253),未吸收铁含量结果批内变异减小(含量由30.2%下降为20.8%,p<0.001),结果更加可靠和可重复(SD值由20.2%下降为11.5%),并且提高实验效率约80%,节省硫酸、硝酸用量达95%。结论: 采用微波消解法替代湿消解法检查右旋糖酐铁注射液给药后注射部位的未吸收铁含量简便易行,准确性和可重复性好,可提高实验效率,并保护实验人员安全和环境安全。
抗菌肽
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  抗菌肽LL-37功能研究综述

  喻 钢, 田万红

  药物分析杂志. 2014, 34(10): 1890-1896.

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  目的: 抗菌肽LL-37是人类天然免疫系统中唯一的cathelicidin家族成员。不仅具有广谱的抗微生物活性,还具有调节免疫系统、促进损伤修复以及抗肿瘤等功能。随着人们对LL-37功能的深入研究,将为相关感染性疾病、免疫性疾病的新药研发和临床治疗提供扎实的理论基础和良好的应用前景。
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  体外拮抗幽门螺杆菌抑菌方法的研究

  喻钢, 田万红, 王斌, 许文香, 王军志, 曾明

  药物分析杂志. 2014, 34(10): 1897-1901.

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  目的: 建立和优化针对幽门螺杆菌的体外抑菌方法,为筛选拮抗幽门螺杆菌的菌株和活性物质提供简单有效的操作方法。方法: 将幽门螺杆菌NCTC 11637国际标准株作为指示菌,比较研究打孔扩散法、纸片法、点状覆盖法、共培养活菌计数法等常规抑菌方法,对各种方法在体外拮抗幽门螺杆菌实验的适用性、操作难度、判定时间等方面进行评价。结果: 纸片法样品装载量少,点状覆盖法无法检测,活菌计数法操作烦琐,批处理量小,而优化后的打孔扩散法具有简单高效,判定时间短,观察结果直观等特点。结论: 优化后的打孔扩散法符合幽门螺杆菌体外拮抗实验方法的要求,适用于多样品检测,为筛选拮抗幽门螺杆菌菌株和分离纯化活性物质过程中的各步骤间活性检测提供了极大的帮助。
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  枯草芽孢杆菌抗菌肽的分离纯化及质谱检测

  喻钢, 田万红, 董思国, 王军志, 曾明

  药物分析杂志. 2014, 34(10): 1902-1906.

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  目的: 研究枯草芽孢杆菌拮抗幽门螺杆菌的能力及分离纯化其抑菌活性物质。方法: 以幽门螺杆菌国际标准株NCTC11637为指示菌,采用打孔法检测枯草芽孢杆菌抑制幽门螺旋杆菌能力;挑选拮抗能力最强菌株,对其活性物质进行分离纯化;质谱检测活性物质分子量。结果: 枯草芽孢杆菌发酵上清液具有显著抑制幽门螺旋杆菌的能力,其中枯草芽孢杆菌KM抑制幽门螺旋杆菌的能力最强;活性物质经分离纯化后,质谱检测分子量为3402.524D,推测为Subtilosin A结构类似物;10株枯草芽孢杆菌Subtilosin A的前体基因的表达水平与抗幽门螺旋杆菌的能力呈正相关。结论: 枯草芽孢杆菌具有不同程度体外拮抗幽门螺旋杆菌能力,其抑菌机制与分泌抗菌肽Subtilosin A结构类似物相关,该类物质可作为治疗幽门螺杆菌感染的候选药物。
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  2株枯草芽孢杆菌全基因组重测序分析

  喻钢, 田万红, 董思国, 王军志, 曾明

  药物分析杂志. 2014, 34(10): 1907-1911.

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  目的: 研究枯草芽孢杆菌的野生菌株(environmental strain)和驯化菌株(domesticated strain)基因组差异,为后续研究枯草芽孢杆菌分泌抗菌相关物质能力提供数据支持。方法: 对2株枯草芽孢杆菌野生菌株Km及CMCC63528进行全基因组测序,并与实验室驯化菌株B.subtilis 168进行序列比较。利用进化树分析菌株的关系;利用皮尔逊相关系数分析菌株间蛋白基因的序列变化关系;用错义突变和同义突变频率计算转化相关基因的序列变化。结果: 2株野生菌株与B.subtilis 168相比各有20000多个单核苷酸多态性位点(single nvcleotide polymorphism,SNP),其中9217个SNP是2株野生菌共有的。进化分析发现2株菌属于subtilis亚种,其错义突变基因显著相关,前100个高度变化的错义突变基因有1/3是相同的。2株野生菌中comG operons,comC,comEC和nucA等与转化及分泌相关基因的序列与B.Subtilis 168相比均发生了显著改变。结论: 2株枯草芽孢杆菌野生菌株和驯化菌株之间有明显的序列差异,2株野生菌株之间相对于驯化菌株其序列变异的基因高度相关。野生菌株和驯化菌株间与蛋白分泌及DNA提取相关的基因序列变化明显。该数据为研究和改造枯草芽孢杆菌以提高其生产和分泌抗菌物质的能力提供一定的序列依据。