目的：建立Biacore法测定重组人乳头瘤病毒双价（16/18型）疫苗原液的动力学常数。方法：分别将HPV 16·V5中和单抗与HPV 18·J4中和单抗偶联到CM5芯片上，然后根据Biacore X-100 Kinetics/Affinity控制软件将 HPV 16L1和HPV 18L1原液分别稀释至适当的不同浓度，采用50 mmol·L^-1 氢氧化钠溶液作为再生液进行动力学分析。根据Biacore X-100 Evaluation分析软件进行拟合，得到样品的动力学常数K_D值。结果：Biacore法测定重组人乳头瘤病毒16型、18型原液动力学常数K_D分别为4.844×10^-10 mol·L^-1和1.67×10^-10 mol·L^-1，HPV 16L1和HPV 18L1原液在浓度为0.625~40 μg·mL^-1时线性关系良好（HPV16L1：Y=17.77X-0.0184，r=1.000；HPV 18L1：Y=18.73X+5.282，r=0.9957）。HPV 16L1和HPV 18L1原液精密度和稳定性试验的RSD均<20%。并且Biacore法测定的结合常数k_a值和体外相对效力测定（IVRP法）的EC₅₀值之间具有一定的相关性。结论：该方法实时、简便、快速、准确、灵敏，适用于重组人乳头瘤病毒原液的动力学分析。