目的：建立对照品替代法测定缓解视疲劳片中叶黄素的含量。方法：采用HPLC法，在不同条件下测定替代对照品苏丹Ⅰ对叶黄素对照品的校正因子，利用相对校正因子f和替代对照品进行叶黄素的含量测定。色谱条件：采用Shim-pack CLC-ODS色谱柱（6.0 mm×150 mm，5 μm），以甲醇-水（95：5）为流动相，流速1.0 mL·min^-1，检测波长473 nm，柱温30 ℃。结果：叶黄素和苏丹Ⅰ浓度均在0.001~0.05 mg·mL^-1范围内线性关系良好，相关系数分别为0.9999和0.9996；相对校正因子f=0.46；波长、流动相及不同色谱柱对f值没有显著影响；用对照品外标法和替代对照品法2种方法测定的结果无显著性差异，测得平均回收率均在95.6%~103.6%，RSD≤4.0%。结论：采用苏丹Ⅰ代替叶黄素作为对照品，用HPLC法测定叶黄素含量，进行产品质量控制，是经济、可行、实用的。