2014年, 第34卷, 第5期　
刊出日期：2014-05-25

  

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综述专论
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  柱后衍生化技术及其在药物与食品分析中的应用与进展

  高恩泽¹, 于小涵¹, 刘婷¹, 于孔宪², 于治国¹

  药物分析杂志. 2014, 34(5): 747-759.

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  柱后衍生化技术是分析化学中常用的一种在线处理技术。该技术为介质中痕量药物的分析和弱紫外吸收物质的分析开辟了广阔的应用前景，并且已经发展为提高传统HPLC法检测水平的一种常用技术。在中药与食品中残留农药检测、氨基酸分析、无机离子分析、生物毒素检测、兽药分析及体内药物分析等领域有着广泛的应用；近年来，共振瑞利散射光谱技术的应用为柱后衍生化技术拓宽了应用范围和发展前景。本文综述了近10年国内外广泛应用的典型的柱后衍生化反应及其在药物与食品分析中的应用，并展望了新技术在药物与食品分析领域的应用前景。
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  农药残留检测标准体系概述及其分析方法进展

  达晶, 王刚力, 曹进, 张庆生

  药物分析杂志. 2014, 34(5): 760-769.

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  农药（pesticides）主要是指用来防治危害农林牧业生产的有害生物（害虫、害螨、线虫、病原菌、杂草及鼠类）和调节植物生长的化学药品。但对其过度应用，也会给人们的健康生活带来安全隐患，尤其在药物原材料的生产栽培中，农药残留更加受到政府和医药界公众广泛的关注。本文概述国际食品法典委员会（CAC）、欧盟、美国、日本以及中国的农药残留检测相关标准体系，介绍农药残留分析前处理方法和分析方法，展望分析技术发展趋势。
生物检定
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  人参皂苷Rh₁人工抗原的合成及免疫原性分析

  王艳¹, 屈会化², 赛佳洋¹, 张越¹, 孙晔¹, 孔慧¹, 赵琰¹, 王庆国¹

  药物分析杂志. 2014, 34(5): 770-774.

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  目的：合成人参皂苷Rh₁（GsRh₁）的人工抗原，为获得其单克隆抗体奠定基础。方法：采用高碘酸钠氧化法分别合成GsRh₁免疫抗原（GsRh₁-BSA）和包被抗原（GsRh₁-OVA）；用紫外光谱法和薄层色谱法鉴定人工抗原的合成是否成功；利用GsRh₁-BSA免疫小鼠制备血清多抗；通过优化封闭液和包被原工作浓度，建立酶联免疫吸附分析法（ELISA）的最佳工作条件，并检测血清中抗体效价及特异性。结果：紫外光谱和薄层色谱法鉴定结果表明，GsRh₁与BSA/OVA偶联成功，免疫后小鼠血清中产生了能特异性地与GsRh₁结合的抗体，效价达到1：32000，线性范围为10~10000 ng·mL^-1，经分析确定ELISA的最佳包被浓度为1：4000，最佳封闭液为10 mg·mL^-1的明胶溶液。结论：成功合成了GsRh₁人工抗原，并诱发小鼠产生了抗GsRh₁的抗体，可用于下一步单克隆抗体的制备。
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  采用16S_rDNA全长序列分析和生化反应鉴定乳酶生菌株

  厉高慜¹, 赵立², 聂亮¹, 邵泓¹, 陈钢¹

  药物分析杂志. 2014, 34(5): 775-781.

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  目的：对乳酶生菌株进行鉴定，对质量标准修订提供依据。方法：采用16S rDNA全长序列测定，对从不同来源的乳酶生制剂中分离的菌株，生产菌株140623和其他参考菌株进行鉴定，并进行系统发生树分析，同时采用生化反应对鉴定结果进行验证。结果：从乳酶生制剂中分离获得的菌株和生产菌株140623均鉴定为屎肠球菌（Enterococcus faecium），且相互之间具有很高的同源性。结论：现行乳酶生质量标准中的“肠链球菌（Streptococcus faecalis）”建议改名为“屎肠球菌（Enterococcus faecium）”。
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  硫代乙酰胺诱导的斑马鱼急性肝损伤模型

  齐玉娟, 张靖溥

  药物分析杂志. 2014, 34(5): 782-789.

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  目的：研究斑马鱼幼体是否适于作为药源性肝损伤的评价模型并探讨其毒理机制。方法：将发育正常的3-dpf斑马鱼幼鱼暴露于不同浓度的硫代乙酰胺溶液中72 h，显微镜下活体观察斑马鱼幼鱼给药后的畸形表型和肝脏形态的变化；通过油红O染色观察肝脏脂肪含量变化；通过组织切片和H&E染色观察幼鱼肝脏细胞结构的变化；用RT-PCR方法检测幼鱼肝脏病理标志基因和凋亡相关基因转录水平的变化。结果：活体观察显示斑马鱼幼鱼在给药后出现不同程度的畸形表型；病理学显示肝脏细胞核结构异常，细胞质出现大量脂肪空泡；油红O染色显示肝细胞有脂肪堆积；RT-PCR的结果表明硫代乙酰胺能够上调脂肪肝和肝纤维化相关基因；能够促进凋亡基因Bid和Bax-2表达，并抑制促存活基因Mcl-1b和Bcl-2的表达。结论：硫代乙酰胺对斑马鱼幼鱼肝脏产生的毒性作用与对哺乳动物肝脏的损伤相似。斑马鱼可以作为快速评价、筛选和研究药物肝脏毒性的模式动物。
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  日本血吸虫感染经吡喹酮治疗后血清中抗体及细胞因子水平的变化

  刘向芹¹, 张影², 张瑾², 王国柱², 薄淑英², 田喜凤¹, 辛晓芳²

  药物分析杂志. 2014, 34(5): 790-794.

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  目的：观察人感染日本血吸虫经吡喹酮治疗后血清中可溶性虫卵抗原（SEA）特异性抗体IgG、IgM及IL-4、IFN-γ水平的变化，并观察治疗后外周血中SEA特异性分泌IFN-γ的淋巴细胞数量的变化。方法：阳性组血清采自湖北省江陵市荆州县粪检血吸虫虫卵阳性患者15例，治疗组血清采自当地吡喹酮治疗8个月后3次粪检虫卵阴性者15例，阴性组血清采自当地的健康人群15例。通过ELISA的方法检测血清中SEA特异性IgG、IgM抗体及IL-4、IFN-γ的水平。取各组样本中3例进行ELISPOT实验，检测外周血中SEA特异性IFN-γ淋巴细胞数量。结果：ELISA结果表明，血清中SEA特异性IgG、IgM治疗组与阳性组相比显著性降低，且治疗组、阳性组均显著高于阴性组（P<0.05）；血清中IL-4、IFN-γ水平治疗组比阳性组显著性降低（P<0.05）。ELISPOT实验结果显示外周血中SEA特异性分泌IFN-γ淋巴细胞数量阳性组显著高于治疗组及阴性组（P<0.05），而治疗组与阴性组之间的差异不具显著性（P>0.05）。结论：血清中IL-4、IFN-γ水平及外周血中IFN-γ淋巴细胞数量的检测可以用于吡喹酮治疗血吸虫感染疗效的考核，而血清中IgG、IgM水平变化对于吡喹酮疗效的考核也具有一定的辅助作用。
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  吸入水雾剂的过敏性试验方法研究

  翁琳琳^1,2, 宁炼², 盛云华², 谷舒怡², 唐黎明², 陈桂良²

  药物分析杂志. 2014, 34(5): 795-799.

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  目的：建立与吸入水雾剂临床给药方式相似，可用于评价吸入水雾剂过敏性的实验方法。方法：Hartley豚鼠24只，雌雄各半，随机分为阴性对照组及3个给药组。给药组于1、3、5 d按每只2 mL吸入浓度为1%的雾化卵白蛋白（ovalbumin，OVA）致敏，阴性对照组以氯化钠注射液（NS）同法处理。于首次致敏后14 d将给药组分别以0.5%、1%或2%OVA激发，阴性对照组以NS代替OVA同法处理。激发后观察豚鼠出现的过敏症状，取血检测血液中嗜酸性粒细胞（eosnophils，EOS）比例。取肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid，BALF）检测组胺（histamine，HIS）水平。解剖豚鼠，大体观察后取鼻粘膜、气管和肺进行病理学检查。结果：给药组豚鼠出现不同程度过敏症状及相应病理学改变，过敏反应严重程度、EOS比例及HIS水平均与激发液OVA浓度相关。结论：豚鼠吸入致敏与激发的过敏性实验方法能反映典型过敏症状，方法稳定、简易，能较好地应用于吸入水雾剂的过敏性评价。
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  双滤膜过滤方法的建立及在卡波姆眼用凝胶无菌检查试验中的应用

  丁勃, 徐晓洁, 冷佳蔚, 国明, 史国生

  药物分析杂志. 2014, 34(5): 800-804.

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  目的：建立卡波姆眼用制剂的无菌检查方法，探索双滤膜过滤方法运用于药品无菌检查试验的可行性。方法：用0.1%的蛋白胨水溶液稀释供试品，在供试品溶液中加入适量的10%氯化钙溶液，使卡波姆凝胶生成沉淀。采用孔径30~50 μm和不大于0.45 μm 2种无菌滤膜过滤供试品溶液，分别截留沉淀物和微生物，对2种滤膜进行适量冲洗后，置适宜的培养基中进行培养。结果：6种验证用菌株，枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉在接种供试品的培养基中生长良好。采用双滤膜过滤的方法，可以有效削除供试品的抑菌活性，避免卡波姆凝胶堵塞滤膜，实现对容器中全部内容物进行检验，最大程度降低实验过程对此类特殊供试品中微生物的损伤或损失。结论：双滤膜过滤方法实验过程符合中国药典2010年版无菌检查法相关规定，试验结果有效，可用于卡波姆眼用制剂的无菌检查试验。
成分分析
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  高效毛细管电泳法拆分25R、25S鲁斯可皂苷元初步研究

  陈乃东^1,2, 陈琼¹, 何健¹

  药物分析杂志. 2014, 34(5): 805-812.

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  目的：对高效毛细管电泳法拆分25R、25S-鲁斯可皂苷元混合物的条件进行探讨，以建立一种快速测定鲁斯可皂苷元差向异构体比例的方法。方法：以羟丙基-β-环糊精作为手性添加剂，考察分离电压、缓冲液pH、离子浓度、环糊精浓度对25R、25S-鲁斯可皂苷元拆分的影响。结果：从湖 北麦冬制备分离的鲁斯可皂苷元，NMR、IR检测结果显示其是以25S构型为主要成分、25R和25S 2个差向异构体并存的混合物。以0.018 mol·L^-1的羟丙基-β-环糊精为手性添加剂，分离电压6.0 kV，0.075 mol·L^-1的pH=10.0磷酸氢二钠缓冲液，25R与25S-鲁斯可皂苷元可实现基线分离（分离度1.52±0.13），在此条件下，测得制备的鲁斯可皂苷元中25R、25S异构体含量比为25.4：74.6。结论：高效毛细管电泳法可用于25R与25S-鲁斯克皂苷元手性拆分。研究结果为鲁斯可皂苷元药理学研究、鲁斯可皂苷元质量控制提供新方法。
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  超高效液相色谱法同时测定丹参酮提取物中隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮Ⅱ_A

  汤瑶^1,2, 李佐刚¹, 王秀文¹, 汪巨峰¹, 李波¹

  药物分析杂志. 2014, 34(5): 813-818.

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  目的：建立超高效液相色谱法同时测定丹参酮提取物中特征性的3个脂溶性成分（隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮Ⅱ_A）含量。方法：采用Waters Acquity UPLC BEH Shield RP18色谱柱（1.7 μm，2.1 mm×100 mm），预柱为Phenomenex SecurityGuard C₁₈ Cartridges Polar-RP（4 mm×3.0 mm），以乙腈（A）-5%乙腈水溶液（含0.1%甲酸，pH 2.5）（B）为流动相，梯度洗脱（0~5 min，52%A→70%A；5~7 min，70%A→80%A；7~10 min，80%A→52%A；10~12 min，52%A），流速0.25 mL·min^-1，柱温35 ℃，进样量5 μL，检测波长269 nm。结果：隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮Ⅱ_A 3个被测成分在线性范围内均具有良好的线性关系（r>0.999）；平均回收率（n=6）分别为96.7%（RSD=1.3%），96.4%（RSD=0.94%），98.5%（RSD=1.2%）；丹参酮提取物中主峰与其他共存组分达到基线分离。结论：与常规液相色谱法比较，本方法分离效率高，重复性好，可作为实验室方法改进的参考依据，为丹参酮提取物的质量标准的提升做准备。
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  DART/Q-TOF-MS快速鉴定龙血竭中5个酚酸类成分

  秦建平^1,2, 吴建雄^1,2, 李艳静^1,2, 王雪^1,2, 李家春^1,2, 萧伟^1,2

  药物分析杂志. 2014, 34(5): 819-823.

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  目的：建立一种可以快速鉴定龙血竭中5个酚酸类成分的方法。方法：采用实时直接分析（DART）离子源结合四极杆串联飞行时间质谱（Q-TOF-MS），氦气流速为3.1 L·min^-1，气体温度为250 ℃，样品传输速度为0.2 mm·s^-1。Agilent 6538 Q-TOF毛细管电压为1 kV，RF电压为250 V，一级质谱扫描质荷比范围m/z 50~800，二级质谱扫描质荷比范围m/z 30~500，碰撞能量为25 V。结果：通过对照品与样品的一级、二级质谱图对比快速鉴定了样品中5个化学成分，分别 为龙血素A、龙血素B、7，4’-二羟基黄酮、白藜芦醇和紫檀茋。结论：本法经过方法学验证，可用于快速分析鉴定龙血竭中的酚酸类成分。
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  大菟丝子生品和盐炙品HPLC-UV特征图谱及7个有机酸含量变化研究

  瞿燕¹, 李琼², 魏文龙², 曾锐²

  药物分析杂志. 2014, 34(5): 824-829.

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  目的：建立大菟丝子生品和盐炙品的特征图谱，探讨大菟丝子炮制前后化学成分的变化规律，对其中的新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、3，4-二咖啡酰奎宁酸、3，5-二咖啡酰奎宁酸、4，5-二咖啡酰奎宁酸7个有机酸类成分进行定量分析比较。方法：采用HPLC-UV法，选用Odyssil C₁₈ 色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相为乙腈（A）-0.05%磷酸溶液（B），梯度洗脱（0~5 min，5%A→13%A；5~20 min，13%A→13%A；20~25 min，13%A→20%A；25~45 min，20%A→40%A），流速1 mL·min^-1，检测波长325 nm，柱温35 ℃；用国家药典委员会“中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A”处理分析。结果：指标性成分在测定范围内与峰面积线性关系良好（r≥0.9970）；不同来源的大菟丝子生品或盐炙品间的特征图谱相似度较高，但炮制前后指标性成分含量差异显著，呈现炮制后新绿原酸、隐绿原酸、3，4-二咖啡酰奎宁酸、4，5-二咖啡酰奎宁酸呈倍数增长，而绿原酸、咖啡酸、3，5-二咖啡酰奎宁酸呈倍数下 降的趋势。指纹图谱评价生品（S1~S8）、盐炙品（S9~S16）、药房样品（S17~S25）特征图谱相似度发现生品与盐炙品间差异相对较大，而盐炙品与药房样品的相似度最小。结论：采用特征图谱结合7个有机酸指标性成分含量测定的方法可以较好地控制大菟丝子生品、盐炙品的质量，并可用于生、盐炙品的区分。
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  HPLC-MS法同时测定防芷鼻咽颗粒中6个成分的含量

  刘灵改¹, 支旭然², 郭进¹, 王捧英³, 胡玉录¹, 任非¹, 张兰桐², 孟岩²

  药物分析杂志. 2014, 34(5): 830-835.

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  目的：采用HPLC-MS法同时测定防芷鼻咽颗粒中升麻素苷、丹皮酚、木兰脂素、欧前胡素、异欧前胡素和黄芪甲苷的含量。方法：采用Dikma Diamonsil C₁₈色谱柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），柱温为室温，以甲醇-0.05%甲酸水溶液（v/v）为流动相进行梯度洗脱（0~6 min，25%A→75%A；6~10 min，75%A→95%A；10~15 min，95%A），流速0.8 mL·min^-1，进样量20 μL；采用电喷雾离子源进行正离子模式监测，多反应监测模式（MRM）用于定量分析。结果：在15 min内，防芷鼻咽颗粒中6个成分（升麻素苷、丹皮酚、木兰脂素、欧前胡素、异欧前胡素和黄芪甲苷）完全分离；峰面积与浓度有良好的线性关系；平均加样回收率为98.9%~100.7%，精密度RSD为0.88%~1.2%。结论：该方法经方法学验证可用于防芷鼻咽颗粒中多种成分的含量测定和质量控制。
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  柴胡饮片皂苷类成分变化及质量控制研究

  闵宇航^1,2, 王京辉², 范妙璇², 陈有根², 傅欣彤², 郭洪祝^1,2

  药物分析杂志. 2014, 34(5): 836-843.

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  目的：建立不同来源柴胡饮片及醋柴胡饮片的皂苷类成分高效液相色谱指纹图谱，为柴胡饮片及醋柴胡饮片质量标准的提高提供依据。方法：采用高效液相色谱串联电喷雾高分辨质谱仪（HPLC-ESI-MS/MS）对特征峰进行指认，测定柴胡饮片及醋柴胡饮片中柴胡皂苷c、a、b₂、d的含量，并对柴胡饮片及醋柴胡饮片的含5%氨水的80%甲醇提取液、5%氨水水煎液和纯水水煎液中的柴胡皂苷含量的变化进行了研究。选用Phenomenex Gemini 5 μ C₁₈（110A，250 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱，以乙腈（A）-水（B）为流动相，梯度洗脱（0~5 min，20%A；5~10 min，20%A→30%A；10~22 min，30%A→30%A；22~46 min，30%A→45%A；46~60 min，45%A→48%A），流速1 mL·min^-1，检测波长210 nm，柱温25 ℃。质谱采用高分辨离子阱负离子模式，鉴定皂苷类成分的结构。结果：建立了柴胡饮片及醋柴胡饮片指纹图谱检测方法和柴胡皂苷c、a、b₂、d 4个成分的含量测定法；对柴胡饮片及醋柴胡饮片含5%氨水的80%甲醇提取液、水煎液和碱水煎液中的柴胡皂苷含量的变化进行了测定研究。结论：所建立的方法可以用于柴胡饮片及醋柴胡饮片的质量控制与评价，对皂苷类成分变化规律的研究表明，柴胡饮片在炮制前后，以不同的溶剂提取，其皂苷成分的类型和含量差异较大，因此在柴胡的质量控制中，仅仅控制原生皂苷柴胡皂苷a和d尚不足，应考虑柴胡皂苷c和b₂的检测。
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  离子液体超声辅助萃取HPLC法测定天山雪莲中的4个有效成分

  秦红英, 周光明, 彭贵龙, 李俊平

  药物分析杂志. 2014, 34(5): 844-847.

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  目的：建立以离子液体1-丁基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐（PF₆）为萃取剂超声辅助萃取，高效液相色谱法分离测定天山雪莲中紫丁香苷、芦丁、绿原酸和咖啡酸4个有效成分的方法。方法：采用Phenomenex C₁₈色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为甲醇-0.1%醋酸水溶液，梯度洗脱（0~5 min，30%B→40%B；5~10 min，40%B→60%B；10~15 min，60%B→70%B），流速0.8 mL·min^-1，紫外检测波长270 nm，柱温35 ℃。结果：该方法对紫丁香苷、芦丁、绿原酸和咖啡酸浓度分别在0.0011~108.0 μg·mL^-1（r=0.9999）、0.0011~106.0 μg·mL^-1（r=0.9999）、0.0021~208.0 μg·mL^-1（r=0.9999）、0.0015~154.0 μg·mL^-1（r=0.9999）范围内线性关系良好，定性检测限（S/N=3）依次为0.0374、0.0094、0.1018、0.0549 ng·mL^-1；样品回收率为96.12%~101.1%。结论：本法灵敏度高、定量准确、操作简便、成本低，且具有环保优点，可作为天山雪莲中紫丁香苷、芦丁、绿原酸和咖啡酸的分离测定的有效方法。
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  一测多评法同时测定川芎、当归饮片中多种化学成分的含量

  田璐^1,2, 闫海霞², 傅欣彤², 王京辉², 郭洪祝², 陈有根^1,2

  药物分析杂志. 2014, 34(5): 848-854.

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  目的：通过建立川芎、当归中阿魏酸、洋川芎内酯Ⅰ、洋川芎内酯A、藁本内酯的一测多评含量测定方法，同时实现川芎、当归饮片的多指标控制。方法：采用Agilent ZORBAX SB-C₁₈（4.6 mm×150 mm，3.5 μm）色谱柱，以乙腈-1%甲酸水溶液为流动相，梯度洗脱（0~10 min，10%A→28%A；10~17 min，28%A→45%A；17~25 min，45%A→65%A；25~30 min，65%A→100%A；30~35 min，100%A；35~37 min，100%A→10%A；37~45 min，10%A），流速0.8 mL·min^-1，检测波长280 nm，柱温25 ℃，以阿魏酸为内标，建立洋川芎内酯Ⅰ、洋川芎内酯A、藁本内酯的相对校正因子，利用相对校正因子计算4个成分的含量，实现一测多评；同时采用外标法测定这4个成分的含量，将2种方法进行分析比较。结果：2种方法测定结果没有明显差异。结论：同时建立了川芎饮片、当归饮片中阿魏酸、洋川芎内酯Ⅰ、洋川芎内酯A、藁本内酯4个成分一测多评法，经方法学验证，该法可用于川芎、当归的质量控制。
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  GC-MS法同时测定复方麝香注射液中麝香酮、β-细辛醚、百秋李醇、龙脑、薄荷脑

  彭敏, 邓楠, 刘文, 戴迎春

  药物分析杂志. 2014, 34(5): 855-858.

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  目的：建立一种同时测定复方麝香注射液中麝香酮、β-细辛醚、百秋李醇、龙脑、薄荷脑5个成分的分析方法，为建立复方麝香注射液的质量控制方法的提供依据。方法：采用气质联用法进行测定。色谱条件：Agilent HP-5MS毛细管柱（30 m×0.25 μm×0.25 mm），进样口温度280 ℃，柱温采取程序升温（初始温度100 ℃，保持2 min，以5 ℃·min^-1速率升温至190 ℃，保持1.5 min，以40 ℃·min^-1速率升温至250 ℃），载气为高纯氦气，流速为1 mL·min^-1，进样量为1 μL，分流比5：1；质谱条件：EI源，轰击电压70 eV，离子源温度230 ℃，四极杆温度150 ℃，辅助接口温度280 ℃，采用全扫描模式获得混合对照品溶液的总离子流色谱图，确定各目标化合物的保留时间和特征离子，再进行选择离子检测（SIM）定量，选择m/z 238、208、222、138、154分别为麝香酮、β-细辛醚、百秋李醇、龙脑和薄荷脑的检测离子。通过外标法同时对复方麝香注射液中5个主要有效成分进行定量分析。结果：复方麝香注射液中麝香酮，β-细辛醚，百秋李醇，龙脑，薄荷脑在23 min内全部检出，且分离效果较好；在各自的浓度范围内均有良好的线性关系（r均为0.99以上）；平均回收率在98.8%~102.0%范围内。结论：该方法经过方法学验证，可有效地对复方麝香注射液的质量进行控制。
安全监测
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  瘦肉精克伦特罗残留检测免疫芯片技术的研究

  孙来玉¹, 尹莉¹, 姚婷², 杨金田¹, 邵朝纲¹, 钱坤¹

  药物分析杂志. 2014, 34(5): 859-864.

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  目的：建立克伦特罗残留检测免疫芯片方法。方法：通过微阵列技术，将克伦特罗抗体与硝酸纤维素膜结合，用牛血清白蛋白封闭硝酸纤维素膜，加待测品和标样，标样中辣根过氧化酶标记的克伦特罗和待测品中的克伦特罗竞争性与克伦特罗抗体结合，借助辣根过氧化酶催化Luminol-H₂O₂化学发光反应，测定发光强度与待测品中克伦特罗浓度的相关性，并考察芯片的检测限、线性范围、回收率、信号精密度、特异性、储存稳定性。结果：本法对盐酸克伦特罗残留检测限为0.10 ng·mL^-1、定量限为0.30 ng·mL^-1，盐酸克伦特罗的质量浓度与光子信号关系成负相关性，线性范围在0.5~16.0 ng·mL^-1，其拟合方程为Y=-0.3915X³+12.5X²-140.68X+867.54，R²=0.9994，回收率为93.6%~103.3%，芯片批内与批间RSD均小于5.0%。未发现与沙丁胺醇、特布他林、莱克多巴胺、塞曼特罗、酚间羟异丙肾上腺素、异丙肾上腺素等构效关系类似物发生交叉反应。芯片贮存于2~8 ℃冰箱中，信号在12个月内基本稳定。结论：免疫芯片法检测克伦特罗残留快速、简单、准确。
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  盐酸消旋山莨菪碱注射液有关物质的研究

  陈青, 李军, 谭会洁, 徐晓丹

  药物分析杂志. 2014, 34(5): 865-868.

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  目的：采用液质联用和核磁共振技术确定盐酸消旋山莨菪碱注射液中未知杂质的结构，并采用高效液相色谱法对该杂质进行控制。方法：采用Agilent 1200-6320 IontrapXCT液相色谱/质谱联用仪及核磁共振仪对未知杂质分析，确定结构后，采用外标法进行该杂质的测定。使用C₁₈色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），以0.01 mol·L^-1磷酸二氢钾（含0.15%三乙胺溶液，用磷酸调pH 6.5）-甲醇（70：30）为流动相；流速1.0 m·L min^-1，检测波长为220 nm。结果：液质联用和核磁共振的结果显示，未知杂质为盐酸消旋山莨菪碱降解产物托品酸。外标法测定过程中，HPLC各杂质峰与主峰均分离良好，方法的精密度良好，杂质托品酸在3.77~11.31 μg·mL^-1范围内与峰面积呈良好的线性关系，回归方程为Y=28.68X-2.632， r=0.9999，定量限为0.0377 μg·mL^-1。结论：研究确定了杂质托品酸的结构，并建立了HPLC检测方法，经方法学验证，该法适用于有关物质的测定。
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  石墨炉原子吸收法直接测定龙骨水煎液中Cr（Ⅵ）的方法研究

  王亚丽, 金波, 马辰

  药物分析杂志. 2014, 34(5): 869-873.

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  目的：建立石墨炉原子吸收法直接测定六价铬Cr（Ⅵ）的含量。方法：将三氟乙酰丙酮（TFA）和环己烷混匀，再加入pH 5.7醋酸-醋酸钠缓冲溶液，三者体积比为1：2：2，制得TFA缓冲溶液，采用TFA作为螯合剂与Cr（Ⅲ）在70 ℃水浴中反应形成可挥发性螯合物Cr^Ⅲ（TFA）₃，通过石墨炉升温程序使螯合物完全挥发，将Cr（Ⅲ）和Cr（Ⅵ）分离，测定Cr（Ⅵ）的含量。结果：线性范围为0~100 ng·mL^-1，回归方程为Y=5.593×10^-3X+7.524×10^-3，r=0.9999，样品低、中、高浓度平均回收率分别为98.0%、100.9%、104.5%，精密度试验的RSD为0.58%。结论：本法操作简便，分析速度较快，满足分析测试要求，适于龙骨水煎液中Cr（Ⅵ）含量的测定。
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  HPLC法测定注射用多西他赛纳米粒中溶血磷脂酰胆碱含量

  谢玲玲¹, 罗卓雅², 洪建文², 胡音², 黄丽萍¹, 张弛¹

  药物分析杂志. 2014, 34(5): 874-878.

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  目的：建立高效液相色谱法测定注射用多西他赛纳米粒中溶血磷脂酰胆碱含量。方法：采用Xtimate C₁₈（4.6 mm×250 mm，5 μm）色谱柱，以0.08 mol·L^-1磷酸二氢钾水溶液（A）-乙腈（B）为流动相进行梯度洗脱（0~20 min，50%B；20~22 min，50%B→70%B；22~32 min，70%B；32~34 min，70%B→50%B；34~50 min，50%B），流速1.2 mL·min^-1，柱温35 ℃，紫外检测波长210 nm。结果：在选定条件下，溶血磷脂酰胆碱与样品其他组分分离良好，溶血磷脂酰胆碱峰面积与浓度在0.03~0.25 mg·L^-1 范围内具有良好线性关系，r=0.9997；检测限0.2 μg，定量限0.4 μg；平均回收率在99%~105%，RSD<6%。结论：经方法学验证表明，该方法可用于注射用多西他赛纳米粒中溶血磷脂酰胆碱含量测定。
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  UPLC-Q-TOF-MS法快速检测补肾壮阳类中成药中11个PDE5型抑制剂类药物

  李锐, 陈国彪

  药物分析杂志. 2014, 34(5): 879-884.

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  目的：建立补肾壮阳类中药中11个磷酸二酯酶5型（PDE5型）抑制剂类药物的超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱（UPLC-Q-TOF-MS）快速检测方法。方法：样品经乙腈超声提取后，应用Agilent Extend-C₁₈（1.8 μm，2.1 mm×50 mm）色谱柱，以乙腈（A）-含0.1%醋酸的5 mmol·L^-1醋酸铵水溶液（B）为流动相，梯度洗脱（0~3.5 min，27%A；3.5~12 min，27%A→69%A；12~14 min，69%A；14~20 min，27%A），流速0.20 mL·min^-1，采用四极杆飞行时间质谱（Q-TOF-MS）检测器，电喷雾离子源（ESI），毛细管电压（capillary voltage）为4.0 kV，碎裂电压（Fragmentor）为180 V，正离子全扫描检测，扫描范围为m/z 100~1500。结果：那红地那非、红地那非、伐地那非、羟基豪莫西地那非、西地那非、豪莫西地那非、氨基他达拉非、他达拉非、硫代艾地那非、伪伐地那非、那莫西地那非11个化合物14 min内即可完成检测，在50~10000 μg·L^-1范围内线性相关系数均大于0.999；10倍定量限（LOQ）添加水平的加样回收率在93.8%~102.1%之间，RSD在2.6%~4.8%之间。结论：该方法操作简便、快速，经方法学验证可用于中成药中非法添加PDE5型抑制剂的快速检测。
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  高效液相色谱法分离和测定左奥硝唑中右旋异构体

  尹燕杰, 何志一, 孙超

  药物分析杂志. 2014, 34(5): 885-888.

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  目的：建立手性高效液相色谱方法，用于测定左奥硝唑原料和制剂中的右旋异构体。方法：采用CHIRALPAK IC（250 mm×4.6 mm，5 μm）手性柱，以正己烷-无水乙醇（90：10）为流动相，流速1.0 mL·min^-1，检测波长308 nm。结果：奥硝唑对映体之间的分离度为3.9，奥硝唑右旋异构体的检测限为0.52 ng；线性范围为1.05~21.0 μg·mL^-1；低、中、高浓度的回收率（n=3）分别为101.3%、100.2%、100.5%，RSD分别为1.3%、0.9%、1.5%；供试溶液在12 h内基本稳定；温度和流速的影响试验表明该方法有良好的耐用性。结论：所建立的方法经方法验证可用于分离和测定左奥硝唑原料和制剂中的右旋异构体杂质。
标准研讨·质量分析
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  苦瓜皂苷的HPLC-ELSD指纹图谱研究

  李清艳^1,2, 王京丽³, 王邠¹, 陈虎彪⁴, 张庆英¹, 梁鸿¹, 赵玉英¹

  药物分析杂志. 2014, 34(5): 889-895.

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  目的：建立苦瓜皂苷类成分的高效液相色谱-蒸发光散射（HPLC-ELSD）指纹图谱。方法：新鲜苦瓜果肉匀浆，冷冻干燥后经50%甲醇超声提取，HP-20大孔树脂固相萃取纯化得到苦瓜总皂苷。采用HPLC-ELSD法对14批次不同品种的苦瓜总皂苷进行检测，色谱柱为YMC-Pack ODS-A（5 μm，250 mm×4.6 mm）；以乙腈-水梯度洗脱（0 min，25%乙腈；40 min，35%乙腈；80 min，50%乙腈），流速1.0 mL·min^-1；漂移管温度：108.0℃；气体：空气；气流速度：3.0 L·min^-1。所得指纹图谱采用中药色谱指纹图谱相似度评价软件进行分析。结果：确定了12个共有峰作为苦瓜皂苷的特征指纹峰，并指认了其中4个色谱峰的化合物结构；14批次不同品种苦瓜皂苷指纹图谱与对照指纹图谱的相似度介于0.493~0.880之间。结论：本法经方法学验证，可为苦瓜的品种鉴定、品质评价和质量控制提供参考依据。
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  毛橘红与光橘红的HPLC药效指纹图谱比较研究

  王铁杰^1,2,3,4, 宋茜¹, 江坤^2,3,4,5, 王平^2,4, 殷果^2,3,4, 谢天柱², 吴熙^2,3, 谢普¹, 李璐¹, 叶文才^3,5, 王磊^3,5

  药物分析杂志. 2014, 34(5): 896-902.

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  目的：建立能代表毛橘红与光橘红止咳、祛痰、抗炎药效的HPLC指纹图谱，并比较两者的差异。方法：采用小鼠氨水引咳法、酚红排泄法和二甲苯致耳肿胀法对毛橘红和光橘红进行止咳、祛痰和抗炎作用研究。采用HPLC法建立指纹图谱。色谱柱为Shiseido Capcell Pak C₁₈色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相为甲醇（A）-0.5%醋酸水溶液（B），二元梯度洗脱（0 min，10%A→20%A；10 min，20%A→40%A；30 min，40%A→49%A；85 min，49%A→90%A）；检测波长为320 nm；柱温为30 ℃；流速为1.0 mL·min^-1。分别采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012.1版本）”和SPSS 17.0对谱图进行相似度分析和聚类分析。结果：毛橘红与光橘红70%乙醇提取物均具有止咳、祛痰和抗炎作用，毛橘红优于光橘红。毛橘红与光橘红的指纹图谱分别有18和17个共有峰，从对照指纹图谱和聚类分析结果看，两者存在明显差异。结论：建立了基于药效的毛橘红与光橘红70%乙醇提取物的HPLC指纹图谱，该分析方法专属、灵敏、准确，为毛橘红与光橘红的鉴别及该药品有效性质量控制提供参考。毛橘红与光橘红药效成分指纹图谱差异显著，质量标准中可以分别建立毛橘红和光橘红的指纹图谱的检测。
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  RP-HPLC法同时测定旱柳叶药材中3个主要黄酮苷成分的含量

  左飞鸿^1,2, 吴国江², 李进进¹, 周国平², 付辉政², 郭文²

  药物分析杂志. 2014, 34(5): 903-906.

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  目的：建立同时测定旱柳叶药材中木犀草苷、芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷和木犀草素-3’-甲醚-7-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷含量的高效液相色谱法。方法：采用YMC-Pack ODS-A（150 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱，以乙腈-0.2%磷酸溶液（15：85）为流动相，流速1.0 mL·min^-1，检测波长344 nm。结果：木犀草苷，芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷和木犀草素-3’-甲醚-7-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷进样量分别在0.26~2.08 μg（r=0.9999）、0.30~2.40 μg（r=0.9999）和0.62~4.96 μg（r=0.9999）范围内与峰面积呈良好线性关系；平均回收率（n=6）分别为97.5%、98.8%和101.5%，RSD分别为1.7%、1.7%和1.6%。结论：经方法学验证，本法可用于旱柳叶药材的质量控制。
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  复方定志小丸正丁醇提部位的HPLC-ELSD指纹图谱研究

  周安^1,2, 纪娟¹, 陈苏菲¹, 吴雷¹, 吴虹¹, 王斌¹, 刘晓闯³, 吴鸿飞¹

  药物分析杂志. 2014, 34(5): 907-911.

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  目的：建立复方定志小丸正丁醇提部位的高效液相色谱-蒸发光散射检测（HPLC-ELSD）指纹图谱，为评价该制剂质量提供可靠方法。方法：采用Agilent Zorbax SB-C₁₈色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），以0.05%醋酸水溶液为流动相A，乙腈（含0.05%冰醋酸）为流动相B，梯度洗脱（0~25 min，20%A→20%A；25~40 min，20%A→50%A；40~50 min；50%A→90%A），柱温35 ℃，进样量10 μL，蒸发光散射检测器采集数据；色谱图经“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”（2004 A 版）进行评价，建立共有模式图，评价相似性。结果：建立了定志小丸正丁醇提部位HPLC-ELSD的共有模式，确定17个共有峰，以共有模式对10批复方定志小丸进行评价，相似度均在0.95以上。结论：建立的指纹图谱具有较好的针对性，为定志小丸的质量控制提供依据。
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  桃儿七根茎HPLC指纹图谱研究

  邹妍琳¹, 王佩龙¹, 刘爽¹, 令狐浪¹, 兰小中², 廖志华³, 陈敏¹

  药物分析杂志. 2014, 34(5): 912-917.

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  目的：采用HPLC法建立桃儿七根茎药材的指纹图谱，并测定不同产地11批药材中鬼臼毒素的含量。方法：采用Wondasil C₁₈（4.6 mm×150 mm，5 μm），以0.1%甲酸水溶液（pH 3.2）为流动相A，甲醇为流动相B，梯度洗脱（0.01 min，35%B；25 min，47%B；85 min，55%B；95 min，60%B；97 min，35%B；100 min，35%B；100.01 min，STOP），流速0.8 mL·min^-1，检测波长290 nm，柱温25 ℃，进样量10 μL。结果：以鬼臼毒素为参照峰确立了36个共有峰，建立了桃儿七HPLC指纹图谱，共有峰面积达到总峰面积90%以上，11批次药材相似度均在0.9以上；各批次药材中鬼臼毒素含量在13.5~36.9 mg·g^-1间。结论：建立的HPLC指纹图谱方法可同时用于含量测定，该方法操作简单，重复性及稳定性良好，可反映桃儿七药材质量。
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  毛两面针药材HPLC指纹图谱及模式识别研究

  黄琪^1,2, 雷鹏^1,2, 李新中^1,2, 刘海涛^1,2, 朱露^1,2, 谭润雅^1,2, 刘琼³

  药物分析杂志. 2014, 34(5): 918-923.

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  目的：通过HPLC法建立毛两面针药材指纹图谱评价体系，为控制其质量提供有效、可靠的实验依据。方法：采用Promosil C₁₈（4.6 mm×250 mm，5 μm）色谱柱，以乙腈（A）-0.2%磷酸加0.2%三乙胺水溶液（B）为流动相，梯度洗脱（0~10 min，12%A；10~18 min，12%A→23%A；18~30 min，23%A→28%A；30~42 min，28%A→45%A；42~70 min，45%A→85%A），流速1.0 mL·min^-1，检测波长283 nm，柱温20 ℃。采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2004A版）对其进行了相似度计算。结果：建立了毛两面针药材的指纹图谱，并使用聚类分析和主成分分析对指纹图谱进行了模式识别研究。结论：将指纹图谱和模式识别结合起来进行中药材质量控制是一种行之有效的方法，有利于全面、准确的控制药材质量，本研究为评价毛两面针药材质量提供了一定的实验依据。
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  UPLC法同时测定三七伤药片中4个成分含量

  杨美丽^1,2, 戴忠², 胡晓茹², 鲁静², 马双成²

  药物分析杂志. 2014, 34(5): 924-928.

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  目的：建立超高效液相色谱法同时测定三七伤药片中芍药苷、柚皮苷、人参皂苷Rg₁及人参皂苷Rb₁ 4个成分的含量。方法：采用BEH C₁₈色谱柱（50 mm×2.1 mm，1.7 μm），以乙腈-水为流动相，梯度洗脱，流速0.4 mL·min^-1，检测波长230 nm（0~5 min，芍药苷）、283 nm（5~10 min，柚皮苷）、203 nm（10~30 min，人参皂苷Rg₁及人参皂苷Rb₁），柱温40 ℃，进样量1 μL。结果：芍药苷、柚皮苷、人参皂苷Rg₁、人参皂苷Rb₁浓度在相应范围内与峰面积呈现良好的线性关系。不同厂家的三七伤药片4个成分的含量参差不齐，君药三七中人参皂苷Rg₁及人参皂苷Rb₁的含量差距尤为显著。结论：该法可同时测定三七伤药片中4个成分的含量，分析速度快，溶剂用量少，重复性好，为三七伤药片的质量评价提供参考。
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  藏药小米辣的定性定量方法研究

  张幸福, 骆桂法, 刘海青

  药物分析杂志. 2014, 34(5): 929-933.

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  目的：建立小米辣药材的定性定量方法。方法：采用粉末显微鉴别和薄层色谱法对小米辣药材进行定性鉴别；采用高效液相色谱法测定辣椒素、二氢辣椒素的含量。高效液相色谱条件：Phenomenex-C₁₈色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），乙腈-0.2%磷酸溶液（48：52）为流动相，柱温40 ℃，流速1.0 mL·min^-1，检测波长为280 nm。参照中国药典2010年版一部测定水分、总灰分和浸出物。结果：小米辣显微特征明显；薄层色谱中辣椒素斑点分离效果良好；辣椒素、二氢辣椒素浓度分别在4.98~99.54 μg·mL^-1（r=1.0000）、1.97~39.44 μg·mL^-1（r=0.9999）的范围内线性关系良好；平均加样回收率（n=6）为103.0%和101.8%。结论：所建立的方法经过方法学验证，可用于小米辣药材的质量控制。
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  对照品替代法用于缓解视疲劳片叶黄素含量测定的研究

  林宏琳¹, 钟碧萍², 林国斌^1,2

  药物分析杂志. 2014, 34(5): 934-938.

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  目的：建立对照品替代法测定缓解视疲劳片中叶黄素的含量。方法：采用HPLC法，在不同条件下测定替代对照品苏丹Ⅰ对叶黄素对照品的校正因子，利用相对校正因子f和替代对照品进行叶黄素的含量测定。色谱条件：采用Shim-pack CLC-ODS色谱柱（6.0 mm×150 mm，5 μm），以甲醇-水（95：5）为流动相，流速1.0 mL·min^-1，检测波长473 nm，柱温30 ℃。结果：叶黄素和苏丹Ⅰ浓度均在0.001~0.05 mg·mL^-1范围内线性关系良好，相关系数分别为0.9999和0.9996；相对校正因子f=0.46；波长、流动相及不同色谱柱对f值没有显著影响；用对照品外标法和替代对照品法2种方法测定的结果无显著性差异，测得平均回收率均在95.6%~103.6%，RSD≤4.0%。结论：采用苏丹Ⅰ代替叶黄素作为对照品，用HPLC法测定叶黄素含量，进行产品质量控制，是经济、可行、实用的。
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  HPLC法测定5-氟尿嘧啶纳米粒的药物包封率

  赵暖暖¹, 仵文英², 张抗怀², 王娜²

  药物分析杂志. 2014, 34(5): 939-942.

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  目的：制备5-氟尿嘧啶（5-FU）纳米粒，并采用高效液相色谱法测定纳米粒中5-FU的包封率。方法：采用凝胶柱过滤分离5-FU纳米粒中的游离药物，以HPLC为分析方法对纳米粒包封率进行测定。色谱条件：采用Agilent C₁₈柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），以甲醇-水（10：90）为流动相，流速1.0 mL·min^-1，检测波长266 nm，柱温30 ℃，进样量为20 μL。结果：5-FU峰与溶剂峰分离良好，5-FU浓度在2~14 μg·mL^-1范围内线性关系良好（r=0.9998）；平均回收率在96.5%~97.8%之间。结论：该方法经方法学验证，可适用于5-FU纳米粒中药物包封率的测定。
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  拉曼光谱快速检测对乙酰氨基酚注射液

  阮健, 于海洲

  药物分析杂志. 2014, 34(5): 943-946.

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  目的：建立一种用拉曼光谱技术快速鉴别和测定对乙酰氨基酚注射液的方法。方法：以对乙酰氨基酚注射液为研究对象，运用拉曼光谱技术对对乙酰氨基酚注射液进行快速鉴别和含量测定。测定条件：显微拉曼光谱仪，激发光波长785 nm，物镜50X，激光功率3 mW，信号采集时间60 s。结果：研究表明，拉曼光谱法可以鉴别对乙酰氨基酚注射液，并能测定此类注射液中对乙酰氨基酚含量，结果分别为99.49%、97.56%、100.2%（规格为2 mL：0.25 g）和97.75%、94.58%、96.25%（规格为1 mL：75 mg），测定结果与HPLC法测定的结果经t检验证明无显著性差异。结论：本方法经方法验证可作为对乙酰氨基酚注射液快速检测的分析方法。