目的:建立同时测定黄连上清片中"黄芩-黄连-黄柏"药对中黄柏碱、黄柏酮、小檗碱、巴马汀、黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、吴茱萸内酯和阿魏酸含量的HPLC分析方法。方法:采用Boston Green ODS色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液(含0.02 mol·L^-1磷酸二氢钠),梯度洗脱,柱温35℃,检测波长为210 nm。结果:本实验方法学考察结果表明各色谱峰间分离度均达到定量要求,精密度、回收率、重复性等参数均达到定量分析的要求。12批次样品的含量结果显示9个成分中有7个被检测出,黄柏酮和阿魏酸未检出。和单味中药材成分相比,推断考虑在处方工艺制备过程中存在成分损失。结论:本实验针对黄芩-黄连-黄柏药对,建立了同时测定黄连上清片中10个指标性成分的含量分析方法,简便可靠,可用于黄连上清片的质量控制。