2015年, 第35卷, 第8期　
刊出日期：2015-08-25

  

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综述专论
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  核酸适配子在小分子检测中的应用

  张艳芬¹, 解瑶², 王南南², 赵丽建², 刘利鹏², 刘中成²

  药物分析杂志. 2015, 35(8): 1317-1322.

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  核酸适配子是利用配体指数级富集系统进化技术从单链寡核苷酸文库中筛选出的与靶物质有高亲和力和特异性的寡核苷酸, 它已成为小分子化合物研究的有效工具, 在分析化学领域逐渐成为人们研究的热点。当前已筛选了许多小分子物质特异性适配子, 并基于适配子开发了一系列小分子物质检测系统。本文主要对SELEX 筛选流程、小分子物质核酸适配子筛选特征与方法以及以核酸适配子为基础开发的电化学法、荧光法、胶体金比色法、酶联适配子免疫法等在小分子物质检测中的应用进行了综述。
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  不同物理化学性质纳米颗粒的血脑屏障通透机制及毒性影响研究进展

  淡墨, 刘丽, 李佐刚

  药物分析杂志. 2015, 35(8): 1323-1328.

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  如何透过血脑屏障一直是纳米颗粒药物研究的热点和难点。本文查阅了1996年到2015年发表的48篇与纳米颗粒透过血脑屏障相关的重要SCI文献。总结了纳米颗粒透过血脑屏障的不同机制,包括被动扩散、透过细胞间隙和细胞转胞吞等。根据纳米颗粒独特的物理化学性质,详细综述了颗粒大小、表面带电、表面修饰等不同物理化学性质对纳米颗粒透过血脑屏障的影响,以及纳米颗粒对血脑屏障的潜在毒性风险。本文阐释了不同物理化学性质的纳米颗粒如何与血脑屏障相互作用进入大脑,为未来合理设计纳米颗粒,预测其在大脑的分布、生物相互作用和毒性风险提供理论支持。
活性分析·生物检定
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  炮制前后淫羊藿不同提取物对ACE、α-葡萄糖苷酶的抑制活性及对亚硝酸根的清除活性研究

  赵岩¹, 侯莹莹¹, 唐国胜¹, 徐殿文², 张雪伦¹, 妙志岩¹, 张连学¹

  药物分析杂志. 2015, 35(8): 1329-1334.

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  目的: 考察淫羊藿炮制前后的不同提取物对血管紧张素转化酶(ACE)、α-葡萄糖苷酶抑制活性及亚硝酸根清除活性的变化。方法: 采用高效液相色谱法比较淫羊藿炮制前后的不同提取物对ACE的抑制作用,采用分光光度法测定其对亚硝酸盐的清除率以及对α-糖苷酶的抑制活性。结果: 对ACE的抑制活性,只有石油醚提取物表现出了活性,并且未经炮制的淫羊藿明显强于炮制后的。对α-糖苷酶的抑制活性,未经炮制的淫羊藿二氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇、水提取物及其水煎液均有活性;炮制后淫羊藿的二氯甲烷提取物则无活性,且其他3个提取物和水煎液的活性降低,但不明显。对亚硝酸根的清除活性,炮制后的淫羊藿石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯提取物和水煎液均表现一定的活性,未经炮制的淫羊藿的活性主要体现在二氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇提取物和水煎液,其中水煎液比任何一个提取物的活性都好。本文也对炮制前后淫羊藿不同提取物、水煎液中淫羊藿苷的含量做了对比,结果显示淫羊藿苷可以在乙酸乙酯、甲醇、水提取物和水煎液中被检测到,炮制后淫羊藿的各个提取物的淫羊藿苷的含量均低于未炮制的。结论: 淫羊藿经炮制后,其有效成分淫羊藿苷含量有所降低,且其对ACE、α-葡萄糖苷酶及亚硝酸根的抑制活性均有所降低。
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  HPLC法测定CYP450不同亚型探针药物浓度

  杨希, 汪云, 李芹, 焦建杰, 娄建石

  药物分析杂志. 2015, 35(8): 1335-1341.

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  目的: 建立同时测定细胞色素P450(cytochrome P450,CYP450)亚型CYP1A2、2D6、2E1、2C19、2C9和3A4活性的Cocktail探针药物溶液的高效液相色谱(HPLC)检测方法。方法: 分别选择咖啡因、美托洛尔、氯唑沙宗、奥美拉唑、甲苯磺丁脲和咪达唑仑作为CYP1A2、2D6、2E1、2C19、2C9和3A4的特异性探针药物,根据其各自理化特点配制成Cocktail组合探针溶液。使用HPLC-UV梯度洗脱法同时测定该6种探针药物的血药浓度,并对其进行专属性、精密度、准确度、稳定性的验证。结果: 本研究建立的HPLC检测方法,可以同时测定大鼠血浆中6种探针药物的浓度,各探针药物的吸收峰分离完全,无杂质峰干扰。线性关系良好,线性范围为0.2~50 μg·mL^-1,最低检测限为0.2 μg·mL^-1。日内、日间精密度均小于9%,绝对回收率均大于75%,相对回收率在91%~107%之间,稳定性高,冷冻30 d内的RSD小于10%,室温条件下稳定性RSD小于9%,反复冻融条件下稳定性RSD小于10%。将此方法应用于同时研究大鼠体内该6种酶的活性,证明其具有较好的灵敏度。结论: 经方法学验证,本法可以同时测定6种探针药物咖啡因、美托洛尔、氯唑沙宗、奥美拉唑、甲苯磺丁脲和咪达唑仑的血浆浓度。
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  红景天对斑马鱼游泳和耐低氧能力的影响的初步研究

  范能全¹, 彭兰², 杨武³, 张璞¹, 江静子¹

  药物分析杂志. 2015, 35(8): 1342-1345.

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  目的: 研究红景天胶囊的抗疲劳、抗缺氧作用,探索斑马鱼在中药药效筛选和中药毒性评价的应用可行性。方法: 设置0.01、0.02、0.04、0.08、0.16 mg·L^-1 5个药物剂量组,将斑马鱼用药物处理5 d,测定其游泳力竭时间、低氧耐受时间、低氧窒息后体内乳酸含量和乳酸脱氢酶(LDH)活性。结果: 红景天在0.02 mg·L^-1时可明显延长斑马鱼低氧耐受时间(P<0.05);0.01~0.16 mg·L^-1的红景天处理后5 d后,斑马鱼的最大游泳速度均显著低于对照组(P<0.05);药物浓度在0.04 mg·L^-1时,斑马鱼体内乳酸含量降低(P<0.05);药物处理后,斑马鱼乳酸脱氢酶活性降低(P<0.05)。结论: 低浓度的红景天表现出抗缺氧的药性,可降低斑马鱼体内乳酸含量,表现出抗疲劳的效果;斑马鱼用于中药药物研究是可行的,需进一步探索药物处理时间和处理浓度,及其作用机理。
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  中药注射剂降压物质检查结果与类过敏反应的相关性研究

  潘卫松^1,2, 刘肃², 符路娣¹, 张讷敏², 肖瑛³, 李薇², 潘超美¹

  药物分析杂志. 2015, 35(8): 1346-1353.

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  目的: 为应用降压物质检查法控制中药注射剂的类过敏反应提供理论和实验依据。方法: 以小鼠耳廓蓝染试验筛选得到能引发类过敏反应的清开灵注射液,以降压物质检查法检查其引发家猫血压下降的能力,以豚鼠回肠体外收缩的试验检查其中组胺类物质的含量,以肥大细胞膜稳定剂色甘酸钠研究其引发类过敏反应的机理。结果: 小鼠耳廓蓝染试验阳性结果的清开灵注射液降压物质检查结果也为阳性,豚鼠回肠体外收缩的试验结果则为阴性,提示具有引发类过敏反应能力的清开灵注射液中不含组胺类物质,肥大细胞膜稳定剂色甘酸钠则可以显著抑制清开灵注射液所引发类过敏反应。结论: 中药注射剂在不含有组胺类物质的情况下也可以表现出降压物质检查阳性的结果,可能是通过直接刺激体内肥大细胞脱颗粒释放内源性组胺而导致的,该反应过程与类过敏反应的病理过程高度接近,以上结果提示降压物质检查法有望应用于中药注射剂引发类过敏反应的质量控制。
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  冬虫夏草与5种人工发酵菌丝体的DNA分子鉴别方法

  张文娟, 王晓, 张萍, 魏锋, 马双成

  药物分析杂志. 2015, 35(8): 1354-1357.

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  目的: 建立冬虫夏草与人工发酵菌丝体的鉴别方法。方法: 通过聚合酶链式反应(PCR),扩增基因组上的核糖体基因内转录间隔区(ITS),继而用限制性内切酶XhoⅠ对该聚合酶链式反应产物进行酶切,将酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳及紫外成像;通过聚合酶链式反应扩增线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)的编码基因,将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳及紫外成像。结果: 冬虫夏草ITS的PCR产物能够被XhoⅠ酶切成2个片段。而5种人工发酵菌丝体中,有4种不能够被酶切;由于来源于冬虫夏草无性型中华被毛孢,百令胶囊可被酶切且切割条带大小与冬虫夏草组一致。冬虫夏草样品全部扩增得到COⅠ基因(CO Ⅰ)片段,而5种人工发酵菌丝体均未扩增出该片段。结论: 结合聚合酶链式反应限制性内切酶片段长度多态性法以及CO Ⅰ 聚合酶链式反应扩增,可以鉴别冬虫夏草与人工发酵菌丝体。
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  BRAF基因V600E突变检测的荧光PCR方法的建立

  曲守方¹, 于婷¹, 郭李平², 李杰³, 高尚先¹, 黄杰¹

  药物分析杂志. 2015, 35(8): 1358-1362.

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  目的: 建立检测鼠类肉瘤滤过性毒菌致癌同源体B1(BRAF)基因V600E突变的荧光聚合酶链式反应(PCR)方法,为黑色素瘤的药物靶向治疗提供新的基因检测方法。方法: 根据BRAF基因序列V600E位点区域设计特异性的引物和探针,建立该检测方法。检测BRAF基因V600E突变的黑色素瘤临床样本、BRAF基因V600E突变质粒和正常临床样本,评价方法的准确性、灵敏度和特异性。结果: BRAF基因V600E突变的黑色素瘤临床样本在V600E检测体系中具有特异性的扩增;检测灵敏度约为10¹拷贝/反应;正常临床样本在V600E检测体系中没有特异性的扩增,均是V600E突变阴性。结论: 建立的方法可以用于检测黑色素瘤临床样本中的BRAF基因V600E突变。
代谢分析
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  SPE-LC-MS/MS法测定人外周血单核细胞内齐多夫定三磷酸化物

  牟玲丽¹, 李三望², 刘星菱², 谢非凡^1,2, 周瑞², 唐芳², 余鹏²

  药物分析杂志. 2015, 35(8): 1363-1368.

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  目的: 建立人外周血单核细胞(hPBMCs)内齐多夫定三磷酸化物(ZDV-TP)的固相萃取-液相色谱-串联质谱(SPE-LC-MS/MS)测定方法,并将其应用于临床试验中ZDV-TP在hPBMCs内浓度的测定。方法: hPBMCs样本采用强阴离子交换固相萃取小柱实现ZDV-TP与齐多夫定(ZDV)、齐多夫定一磷酸化物(ZDV-MP)和齐多夫定二磷酸化物(ZDV-DP)的分离后,加入酸性磷酸酶将其去磷酸化为等物质的量的齐多夫定原药。去磷酸化后的样本经HLB固相萃取小柱脱盐处理后,采用Agilent XDB-C₁₈色谱柱,以0.2%甲酸水溶液-甲醇为流动相进行等度洗脱。采用ESI正离子模式检测,离子监测方式为MRM,用于定量分析的离子反应分别为m/z 267.9→m/z 126.8(ZDV)和m/z 247.9→m/z 120.8(替硝唑,内标)。结果: ZDV-TP在0.112 5~82.05 ng·mL^-1(每10⁶个细胞含ZDV-TP 0.06~43 pmol),范围内线性良好(r=0.997 1),定量下限为0.112 5 ng·mL^-1。日内及日间精密度(RSD)均小于9.0%,回收率和基质效应均符合生物样本的测定要求。结论: 本文所建立的方法灵敏度高,专属性强,且成功应用于临床试验中ZDV在hPBMCs内的ZDV-TP的测定。
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  天麻素药代动力学和组织分布特征研究

  刘娜¹, 张振兴², 马金刚¹, 张尊建^3,4, 田媛^3,4

  药物分析杂志. 2015, 35(8): 1369-1376.

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  目的: 建立HPLC-UV测定大鼠血浆和组织中天麻素的方法,研究不同给药方式下天麻素在大鼠体内药代动力学和组 织分布特征。方法: 采用沉淀蛋白法预处理血浆和组织样品,采用岛津Shim-pack VP-ODS柱分离,以甲醇-水(15:85)为流动相,流速1.0 mL·min^-1,检测波长195 nm,柱温40℃。结果: 天麻素大鼠血浆质量浓度在0.1~100 μg·mL^-1范围,组织质量浓度在0.2~200 μg·mL^-1范围色谱响应线性关系良好。大鼠灌服天麻素符合一房室模型,t_max=0.38 h,C_max=10.78 μg·mL^-1,t_1/2=1.43 h,AUC_0-∞=9.45 μg·h·mL^-1。静脉注射符合二房室模型,t_1/2=1.30 h,AUC_0-∞=28.06 μg·h·mL^-1,绝对生物利用度为(33.94±3.67)%;天麻素可以透过血脑屏障,但在脑组织中浓度较低。结论: 建立了大鼠血浆及组织中天麻素的HPLC-UV测定方法并进行了方法学验证,此方法简便、快速,结果准确、可靠;首次阐明了不同给药方式下天麻素在大鼠体内药代动力学和组织分布特征。
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  LC-MS/MS法测定微透析样品中酮康唑的浓度

  苏碧雅, 张黎明

  药物分析杂志. 2015, 35(8): 1377-1384.

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  目的: 建立微透析样品中酮康唑的LC-MS/MS检测方法,并将其应用于酮康唑经皮肤给药后大鼠体内药动学研究。方法: 选用Agilent ZORBAX-C₁₈(4.6 mm×50 mm,1.8 μm)色谱柱,流动相为乙腈-0.1%甲酸水(70:30),流速0.3 mL·min^-1,柱温30℃,进样量10 μL;质谱条件采用ESI源正离子扫描,多级反应检测模式(MRM)。载气为氮气,载气压力为206.85 kPa;脱溶剂气体(载气)温度350℃,脱溶剂气流速11 L·min^-1;酮康唑裂解电压205 V,碰撞能量46 eV;地西泮裂解电压140 V,碰撞能量30 eV;酮康唑和内标地西泮的扫描离子片段分别为m/z 531.2→82.1、m/z 284.5→193.2。结果: 该方法专属性良好,空白基质对测定无干扰,酮康唑在1~5 000 ng·mL^-1范围内线性良好(r=0.997 8),最低定量限为1 ng·mL^-1,日内和日间精密度试验的RSD均<3.62%,基质效应范围在90%~110%之间。测得大鼠颈静脉微透析样品中酮康唑浓度范围为18.61~211.88 ng·mL^-1,大鼠腹部皮下微透析样品中酮康唑浓度范围为438.57~3 004.27 ng·mL^-1,所建立的方法能满足样品检测要求。结论: 本文所建立的方法准确快速,灵敏度高,专属性强,可用于微透析实验样品中酮康唑浓度的测定及酮康唑经透皮吸收药动学研究。
成分分析
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  快速溶剂萃取-液质联用法同时测定6种白芷呋喃香豆素

  魏宁^1,2, 原梅², 阳海鹰², 庄笑梅², 孙璐¹, 李桦²

  药物分析杂志. 2015, 35(8): 1385-1392.

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  目的: 通过利用液质联用方法同时测定川白芷提取液中6种主要呋喃香豆素成分含量并比较3种不同提取方法的提取量,建立一种更高效可靠的中药材质量控制方法。方法: 建立液相色谱-质谱联用法(LC-MS/MS)定量测定白芷药材中的6种呋喃香豆素成分(欧前胡素、异欧前胡素、水合氧化前胡素、氧化前胡素、佛手柑内酯和花椒毒酚),采用CAPCELL PAK MGⅡC₁₈色谱柱(2.0 mm×100 mm,3.0 μm),流动相为含0.1%甲酸乙腈-含0.1%甲酸、5 mmol·L^-1甲酸铵水,梯度洗脱,运行4.0 min,流速0.3 mL·min^-1,柱温25℃,以ESI为离子源,在阳离子扫描多反应监测(MRM)模式下,对6种呋喃香豆素成分的离子对进行扫描检测,其中6种成分的定量离子对为欧前胡素m/z 271.1/147.0、异欧前胡素m/z 271.1/147.0、水合氧化前胡素m/z 305.0/203.0、氧化前胡素m/z 287.0/203.0、佛手柑内酯m/z 217.1/174.0、花椒毒酚m/z 203.0/147.0;运用正交设计试验优化快速溶剂萃取法(ASE)的提取工艺,并比较了ASE法、回流提取法和超声辅助提取法的萃取量。结果: 欧前胡素、异欧前胡素、水合氧化前胡素、氧化前胡素、佛手柑内酯和花椒毒酚6种被测成分的质量浓度在0.05~1.6、0.05~1.6、0.02~0.64、0.02~0.64、0.02~0.64、0.02~0.64 μg·mL^-1范围内线性关系良好(相关系数>0.997);回收率在95.3%~102.4%之间,RSD均小于3.6%。正交试验设计优化ASE法,优化得到的萃取条件为萃取温度90℃,静态萃取时间6 min,保持循环次数为2次,萃取溶剂为95%乙醇溶液;其他参数设定为系统默认值。经条件优化后ASE萃取得到的白芷6种呋喃香豆素含量显著高于回流法和超声法,ASE萃取得到的主要成分(欧前胡素、异欧前胡素)的含量比其他2种提取方法高10%~20%,其他4种含量相对较低的成分萃取量提高显著,含量相比增加了1.4~2.2倍。结论: ASE法可快速高效萃取白芷香豆素成分,与液相色谱或液质联用法联合后,可用于中药材香豆素成分的质量控制和定量分析。
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  中药女贞子饮片中8个成分的含量比较研究

  任爽^1,2, 李铮¹, 王京辉¹, 范妙璇¹, 陈有根¹, 傅欣彤¹, 郭洪祝¹

  药物分析杂志. 2015, 35(8): 1393-1402.

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  目的: 针对不同来源女贞子和酒女贞子饮片中8个成分(红景天苷、酪醇、特女贞苷、木犀草苷、木犀草素、芹菜素、齐墩果酸、熊果酸)建立高效液相色谱含量测定方法,并对女贞子、酒女贞子饮片及水煎煮前后所测成分的含量进行比较,为其质量标准提高和临床应用提供依据。方法: 采用液相色谱法,使用Agilent Prep-C₁₈(4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱,以乙腈(A)-0.02%磷酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱(0~5 min,5%A→10%A;5~15 min,10%A;15~60 min,10%A→33%A;60~65 min,33%A→90%A;65~75 min,90%A;75~80 min,100%A),流速1 mL·min^-1,检测波长224 nm(测定红景天苷、酪醇、特女贞苷)、349 nm(测定木犀草苷、木犀草素、芹菜素)、206 nm(测定齐墩果酸、熊果酸),柱温25℃。结果: 建立的8个成分含量测定方法简便、可行;女贞子、酒女贞子饮片中红景天苷、酪醇、木犀草素和芹菜素的含量存在显著性差异;2种饮片的水煎液中红景天苷、酪醇、特女贞苷、木犀草苷可检出,且变化明显。结论: 木犀草素和芹菜素可以用于饮片的鉴别,红景天苷、酪醇、特女贞苷、木犀草苷具有特征性,可用于女贞子、酒女贞子饮片的质量评价。
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  HPLC法测定不同产地元胡药材中5种生物碱含量

  徐皓

  药物分析杂志. 2015, 35(8): 1403-1407.

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  目的: 建立同时测定元胡药材中延胡索乙素、紫堇碱、原阿片碱、四氢小檗碱和脱氢海罂粟碱5种生物碱含量的高效液相色谱法,并对不同产地元胡药材进行测定。方法: 采用超声辅助法提取样品,外标法定量,结合3D指纹图谱进行定性鉴别。色谱条件:采用Poroshell 120 EC-C₁₈(4.6 mm×150 mm,2.7 μm)色谱柱,以0.1%乙酸(A)-乙腈(B)为流动相,梯度洗脱(0~20 min,20%A→25%A;20~55 min,25%A→45%A;55~65 min,45%A→55%A),流速1 mL·min^-1,柱温30℃,检测波长280 nm。结果: 原阿片碱、延胡索乙素和紫堇碱质量浓度在5~50 μg·μL^-1之间,四氢小檗碱和脱氢还罂粟碱质量浓度在1.08~10.8 μg·μL^-1之间线性关系良好(r>0.999)。浙江仙居、浙江东阳、浙江磐安、汉中城固、河南辉县、广西河池、山东泰安、黑龙江绥化、吉林通化、辽宁清原、湖北郧西、湖南新化、安徽亳州13个产地元胡药材样品中延胡索乙素、紫堇碱、原阿片碱、四氢小檗碱和脱氢海罂粟碱5种生物碱含量有一定差异,但生物碱比例却有一定相似性,原阿片碱含量均在11%~19%,延胡索乙素含量均在22%~37%,紫堇碱含量均在27%~37%,四氢小檗碱含量均在15%~29%,脱氢还罂粟碱含量均在1.2%~2.0%。浙江仙居道地药材中5种生物碱的含量均居首位,有着天然的含量优势;汉中城固元胡中5种生物碱含量与浙江3个产地含量均值接近甚至超过,与汉中元胡由浙江引种而来的事实也是相符的。结论: 本法经方法学验证可以作为元胡药材质量评价的方法。不同来源样品检测结果说明,延胡索乙素、紫堇碱、原阿片碱、四氢小檗碱和脱氢海罂粟碱5种成分含量及指纹图谱的差异与药材品种及产地有相关性,可为道地药材元胡的产地溯源系统的建立提供参考。
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  高效液相色谱-离子阱-行时间质谱鉴定决明子化学成分

  骆宜¹, 张乐¹, 王卫华², 刘斌¹

  药物分析杂志. 2015, 35(8): 1408-1416.

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  目的: 建立高效、准确鉴定决明子中化学成分的液质联用方法。方法: 采用高效液相色谱-离子阱- 飞行时间质谱(HPLC-IT-TOF MS)联用技术,在电喷雾离子源的正、负离子模式下,以甲醇-乙腈(2:1)混合溶液(A)-水(B)梯度洗脱,流速为1.0 mL·min^-1,柱温为35℃。根据决明子的一级和二级质谱图,对比对照品保留时间并结合文献,推测化合物可能的裂解途径和结构。结果: 通过分析各组分质谱数据,共鉴别了17个化合物,包括7个萘并吡喃酮类化合物、7个蒽醌类化合物和3个萘酚类化合物,其中有决明子内酯龙胆二糖苷为首次从该植物中发现。结论: 采用IT-TOF MS技术有利于新化合物的发现和鉴别,为中药化学成分、质量控制研究提供了新内容。
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  LC-MS快速分析紫苏水煎液中的主要化学成分

  史月姣¹, 王瑛¹, 朱惠照², 郑化先², 朱卫东³, 徐靖¹, 李明焱^1,2,3

  药物分析杂志. 2015, 35(8): 1417-1423.

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  目的: 采用液相色谱,结合四极杆飞行时间串联质谱(QTOF/MS)和离子阱质谱(IT/MS)2种质谱检测器,分析鉴定中药紫苏水煎液中的主要化学成分。方法: 色谱柱为ZorbaxSB-C₁₈RRHD柱(4.6 mm×50 mm,1.8 μm),以0.05%甲酸水溶液- 乙腈为流动相,梯度洗脱,流速为0.5 mL·min^-1,柱温30℃,进样体积10 μL;采用QTOF获取化合物的分子式,并用数据依赖扫描辨别质核比接近的离子碎片;结合IT/MS的多级质谱分析推断可能的结构并验证鉴定结果。结果: 通过联合使用2种不同原理的质谱仪并参照数据库和文献资料从紫苏水煎液中鉴定了27个化合物,包括9个黄酮及其苷类成分,10个有机酸类成分,5个氨基酸、2个缩氨酸和1个核苷,其中4个成分经由对照品比对确证。结论: 该方法通过联合使用QTOF/MS和IT/MS,为化合物的快速解析提供了更多数据,提高了分析的速度和准确性,为中药复杂组分的分析提供了一种可行的方法。
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  基于UPLC-Q-TOF-MS内标物标准指纹图谱的土茯苓质量评价

  何席呈^1,2, 杜洪志¹, 陈虎彪², 董立莎¹, 农亨¹

  药物分析杂志. 2015, 35(8): 1424-1429.

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  目的: 运用超高效液相色谱与飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS),研究贵州产土茯苓的质谱指纹图谱,建立标准指纹图谱。方法: 采用Acquity超高效液相系统,在电喷雾(ESI)负离子模式下记录质谱数据。通过软件提取原始数据表单,以线性插值的方式计算获得标准相对时间下的全局校正图谱,均值法生成标准指纹图谱,并进行基于图谱全局的相似度评价。结果: 建立了土茯苓基于内标校正的质谱指纹图谱共有模式;基于图谱全局的相似度分析,在2个相似度参数上得到了一致性的结果。结论: 基于内标校正的质谱共有模式准确可靠,可用性极大提高,更好地反映贵州产地域性药材土茯苓的内在质量。
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  藏药二十一味寒水石丸的HPLC指纹图谱研究

  朱林燕, 谢建峰, 孔子铭, 韩泳平

  药物分析杂志. 2015, 35(8): 1430-1435.

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  目的: 建立藏药二十一味寒水石丸的HPLC指纹图谱,为评价其质量提供依据。方法: 采用高效液相色谱法,色谱柱为迪马Diamonsil-2 C₁₈(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱,流速1.0 mL·min^-1,柱温25℃,检测波长208 nm,进样量10 μL。采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件(2004A版)对10批样品进行共有峰确认及相似度评价。结果: 10批二十一味寒水石丸共检出16个共有峰,并指认出没食子酸、芦丁、槲皮素、木香烃内酯、去氢木香内酯、土木香内酯和异土木香内酯7个化学成分。10批样品指纹图谱的相似度均>0.91。并通过主成分聚类分析,将不同年份的10批样品分为2类。结论: 该研究为藏药二十一味寒水石丸的全面质量评价奠定了基础。
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  胡黄连苷-Ⅱ原料药特征图谱研究及有关物质测定

  李鹏, 薛明, 汪斌, 陈炜伟, 郑璐, 姚仲青

  药物分析杂志. 2015, 35(8): 1436-1440.

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  目的: 采用高效液相色谱法建立胡黄连苷-Ⅱ原料药特征图谱并测定有关物质。方法: 采用Kromasil 100-5 C₁₈色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈-0.2%乙酸溶液(15.5:84.5),流速1 mL·min^-1,检测波长264 nm,柱温30℃,进样量10 μL。结果: 建立了胡黄连苷-Ⅱ原料药的特征图谱,样品特征图谱有5个特征峰,仅有3个有关物质的面积百分比在0.1%以上,主成分与有关物质分别在本文色谱条件下分离良好。胡黄连苷-Ⅱ 的线性范围为117.92~1 887 μg·mL^-1(r=0.999 9,n=5);平均回收率(n=6)为98.58%。结论: 本方法准确,重复性好,可作为胡黄连苷-Ⅱ原料药质量控制时测定有关物质的方法。
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  HPLC法同时测定复方双金感冒颗粒中3种活性成分的含量

  刘桂花, 何承辉, 邢建国, 于宁, 刘宣麟, 古丽斯坦·阿吾提

  药物分析杂志. 2015, 35(8): 1441-1446.

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  目的: 建立高效液相色谱法同时测定复方双金感冒颗粒(金银花、金莲花、板蓝根、一枝蒿、桑叶等)中荭草苷、牡荆苷、一枝蒿酮酸3种活性成分的含量。方法: 采用Shim-pack VP-ODS色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),以乙腈(A)-0.4%磷酸(B)为流动相,梯度洗脱[0~38 min,A-B(14:86),38~60 min,A-B(40:60),60~70 min,A-B(14:86)],流速1 mL·min^-1,柱温30℃,检测波长340 nm(检测荭草苷和牡荆苷)、242 nm(检测一枝蒿酮酸)。结果: 荭草苷、牡荆苷、一枝蒿酮酸质量浓度分别在16.23~97.39、5.154~68.72、9.240~55.44 μg·mL^-1范围内均呈良好线性关系,相关系数分别为0.999 9、0.999 8、0.999 8;平均回收率(n=9)分别为99.45%、100.6%、99.89%,供试品溶液在24 h内稳定。样品中荭草苷、牡荆苷、一枝蒿酮酸含量分别为2.703~2.712、0.338~0.344、0.736~0.742 mg·g^-1。结论: 该方法简便、稳定、可靠可用于同时测定复方双金感冒颗粒中荭草苷、牡荆苷和一枝蒿酮酸的含量,为其质量控制提供保证。
安全监测
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  Q-Orbitrap高分辨质谱用于降血脂类中成药和保健食品中非法添加物的快速筛查、鉴定和定量

  姜树银¹, 郭常川¹, 石峰¹, 巩丽萍¹, 曾苏²

  药物分析杂志. 2015, 35(8): 1447-1452.

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  目的: 建立Q-Orbitrap高分辨质谱(HRMS)法用于降血脂类中成药和保健食品中非法添加烟酸、洛伐他汀和辛伐他汀的快速筛查、确证和定量。方法: 采 用Hypersil GOLD aQ C₁₈色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.9 μm),线性梯度洗脱,流动相A为10 mmol·L^-1的乙酸铵溶液,流动相B为甲醇,流速300 μL·min^-1。采用正离子检测,全扫描/数据依赖的二级扫描(Full MS/dd-MS²)扫描模式,在1个分析周期(10 min)内完成对样品中分析物的分离和高精度一级、二级质谱扫描,得到准确质量数(accurate mass,AM)和准确碎片离子信息。通过比较样品与对照品的色谱保留时间、一级质谱、二级质谱,确定样品中是否掺杂了降血脂化学药物,并对阳性样品进行定量分析。结果: 建立的Q-OrbitrapHRMS法简便快速、定性能力强,检测限为0.1 ng·mL^-1,线性、准确度、精密度皆符合要求,非常适合高通量非法添加筛查。在38批降血脂类中成药和保健食品中检出2批阳性样品,不符合率为5.26%;检出的非法添加物含量均>10 mg·g^-1。结论: Q-OrbitrapHRMS用于降血脂类中成药和保健食品中非法添加化学药物的快速筛查、确证和定量,具有快速、准确、高选择性的特点,为打击日益猖獗的非法添加行为提供了新工具、新技术。
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  UPLC-MS/MS法同时检测跌打丸中的6种非法染色物

  陈安珍¹, 李新荣¹, 孙磊², 袁航¹, 张春辉¹, 吴爱英¹, 楚敏¹

  药物分析杂志. 2015, 35(8): 1453-1457.

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  目的: 建立跌打丸中6种非法染色物的超高效液相色谱-串联质谱检测方法。方法: 样品采用乙醇超声提取,经液相色谱分离,串联四极杆质谱ESI正离子检测,多反应监测(MRM)模式,外标法定量。结果: 6种染色物线性范围为0.01~2.0 μg·mL^-1, 线性相关系数均大于0.996,检测限在0.33~19.50 μg·kg^-1之间,3个浓度水平加标回收率为92.3%~101.6%,RSD为1.6%~3.5%。158批次样品2批次检出苏丹Ⅰ和Ⅳ,2批次检出808猩红。结论: 该方法选择性强,灵敏度和准确度高,可以快速、有效地检测跌打丸中6种非法染色物。
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  HPLC-DAD-MS/MS法用于止咳平喘类中成药中添加14种肾上腺皮质激素的筛查和定量研究

  高辉, 李冰, 王杰

  药物分析杂志. 2015, 35(8): 1458-1465.

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  目的: 建立HPLC-DAD-MS/MS法用于止咳平喘类中成药中非法添加14种肾上腺皮质激素的筛查和测定。方法: 采用Venusil MP C₁₈(4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱,以乙腈-甲醇(1:1)及0.3%甲酸铵溶液系统为流动相,梯度洗脱,二极管阵列检测器,检测波长240 nm,参比波长360 nm,波长扫描范围190~400 nm,柱温30℃;质谱装配电喷雾电离源,扫描方式为正、负离子同时进行一级质谱、二级质谱全扫描,扫描范围m/z 50~600。干燥气温度325℃,干燥气流速5 L·min^-1;雾化压力0.1 MPa。结果: 曲安西龙、地塞米松磷酸钠、泼尼松、氢化可的松、地塞米松、曲安奈德、醋酸泼尼松龙、醋酸氢化可的松、醋酸泼尼松、醋酸可的松、丁酸氢化可的松、醋酸氟轻松、丙酸氯倍他索、丙酸倍氯米松14种肾上腺皮质激素质谱检测限小于1.3 μg·mL^-1。14种肾上腺皮质激素加样回收率86.5%~119.1%;在0.42~39.2 μg·mL^-1范围内,线性关系良好(相关系数大于0.999);4批中成药中检出含醋酸泼尼松。结论: 本法经方法学验证,可用于14种肾上腺皮质激素的筛选及确证。
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  纸基-表面增强拉曼光谱法检测染色掺伪的红花药材

  李丹^1,2, 吕狄亚¹, 陈辉^1,2, 陆峰^1,2, 陈强², 褚克丹²

  药物分析杂志. 2015, 35(8): 1466-1470.

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  目的: 建立一种纸基-表面增强拉曼光谱方法对染色掺伪的红花进行检测。方法: 用浸泡法制备的银胶纸作为拭子擦拭经乙醇溶液润湿的红花,对拭子的擦拭区进行SERS检测。先后对拭子的浸泡时间、干燥条件和乙醇溶液的浓度等因素进行优化。结果: 成功检测经甲基红、碱性品红、金胺O和对氨基偶氮苯4种常见染料染色的红花药材。结论: 纸基-表面增强拉曼光谱法可实现对染色红花的快速、简单、灵敏和无损的检测,并满足现场快检的需求。
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  高效液相色谱法测定安立生坦中对映异构体

  陈立云¹, 张晓峰¹, 曾玉玲¹, 田丽娜¹, 薛凯宇²

  药物分析杂志. 2015, 35(8): 1471-1473.

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  目的: 建立手性高效液相色谱方法,用于测定安立生坦中对映异构体。方法: 采用对照品法进行定性定量,使用Chiralpak AD-H(4.6mm×250 mm,5 μm)色谱柱,流动相为正己烷-乙醇(95:5),流速1.0 mL·min^-1,检测波长263 nm。结果: 安立生坦与其对映异构体之间有效分离,分离度大于8.0;质量浓度在1.04~5.18 μg·mL^-1范围内线性关系良好;低、中、高浓度平均加样回收率(n=3)分别为106.6%、103.4%、103.7%,RSD分别为3.0%、1.4%、2.2%;样品溶液在24 h内基本稳定。经检测,6批安立生坦中对映异构体含量分别为0.15%、0.13%、0.09%、未检出、0.12%和0.16%。结论: 本方法经方法学验证,可用于安立生坦中对映异构体的测定。
过程控制
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  不同加工方法中何首乌核苷类成分的含量测定及主成分分析

  罗益远¹, 刘娟秀¹, 刘训红¹, 兰才武², 侯娅¹, 马阳¹, 徐力³

  药物分析杂志. 2015, 35(8): 1474-1482.

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  目的: 建立QTRAP UPLC-MS/MS同时测定何首乌中10种核苷类成分(核苷及碱基)含量的方法,分析不同加工方法对何首乌核苷类成分含量的影响。方法: 样品用超纯水室温下超声提取,提取液经高速离心处理,取上清液,经Waters Atlantis T₃色谱柱(2.1 mm×150 mm,3 μm),以甲醇-5 mmol·L^-1醋酸铵(含0.1%冰醋酸)为流动相,0.4 mL·min^-1梯度洗脱,质谱采用正离子多反应监测(MRM)模式测定不同加工何首乌药材中10种核苷类成分的含量,用主成分分析对核苷类成分进行综合评价。结果: 10种核苷类成分具有良好的线性关系,相关系数均大于0.99,且线性范围满足实验要求;平均加样回收率为98.80%~102.54%, RSD在1.78%~3.02%之间。何首乌核苷类成分中以尿苷、腺嘌呤、鸟苷、胞苷含量较高;不同加工方法对何首乌核苷类成分含量具有一定影响,何首乌厚片80℃烘干样品中核苷类成分综合质量较好。结论: 本文为揭示加工方法对何首乌化学成分的影响及优选何首乌适宜产地和加工方法提供基础资料。
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  不同干燥方法对藤茶主要活性成分二氢杨梅素的影响研究

  奉艳花, 覃洁萍, 王淼, 洪江, 黄志飘, 刘鹏飞

  药物分析杂志. 2015, 35(8): 1483-1487.

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  目的: 探讨不同干燥加工方法对藤茶主要活性成分二氢杨梅素含量的影响,为藤茶的加工及研究开发提供科学依据。方法: 分别采用不同温度烘箱烘干及自然晾干方法加工处理藤茶,采用反相高效液相色谱法测定藤茶中主要功效成分二氢杨梅素的含量。以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相,以乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱,检测波长为291 nm。结果: 采用烘箱烘干方式得到的藤茶中二氢杨梅素含量明显高于自然晾干的藤茶,经60、80、100℃不同温度烘制得到的藤茶中二氢杨梅素含量稍有不同,但差异不大;而不同时期采集的藤茶,以5月份采集的藤茶中二氢杨梅素的含量最高。结论: 采用烘箱烘干方式可有效提高藤茶中二氢杨梅素的含量,但不同温度对藤茶中主要活性成分的影响较小;藤茶的最佳采收期为每年的5月份。
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  加校正因子的主成分自身对照法测定复方片剂中瑞格列奈有关物质

  李建伟¹, 宋素丽², 申爱卓²

  药物分析杂志. 2015, 35(8): 1488-1494.

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  目的: 建立加校正因子的主成分自身对照法测定瑞格列奈盐酸二甲双胍片中瑞格列奈有关物质的含量。方法: 采用J&K WpH C₁₈色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),以30 mmol·L^-1磷酸二氢钾溶液(用磷酸调节pH至3.2)-乙腈为流动相,梯度洗脱,流速1.5 mL·min^-1,检测波长240 nm,柱温40℃,进样量20 μL。测定瑞格列奈和杂质A、B、C的线性方程,以斜率计算杂质相对于瑞格列奈的校正因子,用相对保留时间确定各杂质位置。并进行了方法学验证。用相对校正因子计算复方片剂中瑞格列奈杂质A、B、C的含量,并与杂质对照品法测得的结果进行比较。结果: 瑞格列奈杂质A、B、C的相对保留时间分别为0.10、0.35、0.48,校正因子分别为0.65、0.76、3.06。检出限分别为0.27、0.12、4.21 ng,定量限分别为0.8、0.4、12.2 ng。采用校正因子的主成分自身对照法和外标法测得的结果无显著性差异。结论: 本方法经方法验证,可准确测定复方片剂中瑞格列奈3种杂质的含量。
标准研讨
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  四极杆飞行时间串联质谱辅助薄层色谱鉴别重楼中多种重楼皂苷

  于新兰¹, 范可青², 孙磊^1,3, 李革¹, 马双成³

  药物分析杂志. 2015, 35(8): 1495-1499.

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  目的: 建立重楼中皂苷类成分的薄层色谱-质谱联用分析法。方法: 样品经乙醇回流提取,点样于硅胶G预制板上,以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(17:40:21:10)10℃以下放置的下层溶液为展开剂展开,喷以10%硫酸乙醇溶液,于105℃加热至条斑清晰,置紫外光灯(365 nm)下检视并成像。使用重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅵ和重楼皂苷Ⅶ对照品以及四极杆飞行时间串联质谱(QTofMS)进行成分识别。结果: 紫外光灯(365 nm)下,重楼色谱可见23个荧光条斑,其中以薯蓣皂苷元为母核的皂苷显棕色,以偏诺皂苷元为母核的皂苷显淡蓝色,使用对照品和质谱仪共鉴别8个条斑,对应成分为重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅲ、重楼皂苷Ⅴ、重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅶ、重楼皂苷D和纤细薯蓣皂苷。结论: 该法简便、专属,适用于重楼的快速鉴别并可为重楼药材整体质量评价提供参考。
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  卡马西平片溶出度方法的改进研究及溶出行为的评价

  郑金琪¹, 付莉娜², 陶巧凤^1,3

  药物分析杂志. 2015, 35(8): 1500-1504.

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  目的: 改进卡马西平片溶出度检测方法并对不同样品进行溶出曲线评价。方法: 采用HPLC法,使用Kromasil 100-5C₁₈ Dimensions(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱,以0.051 8 mol·L^-1醋酸铵(冰醋酸调节pH至4.0)-甲醇(65:35)为流动相,流速1.0 mL·min^-1,检测波长为285 nm;溶出度试验采用桨法,以含0.2%十二烷基硫酸钠的pH 6.8磷酸缓冲液为溶出介质,转速为75 r·min^-1。结果: 在本文色谱条件下,卡马西平质量浓度在5.540~221.6 μg·mL^-1(r=1.000)检测范围内线性关系良好;低、中、高3种浓度的平均回收率分别为98.7%、100.0%和99.1%,RSD分别为0.78%、0.20%和0.94%,该色谱方法较好地对卡马西平溶出量进行了测定;溶出度方法较好地反映了不同厂家不同批次间卡马西平片溶出行为的差异。 结论: 所建立的色谱条件简单方便,提高了溶出量检测专属性和准确性,改善后的溶出方法较好地体现了片剂间的差异。
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  HPLC测定三白草不同药用部位三白草酮的含量

  王晓燕¹, 黄霞², 王海波¹, 李振国¹

  药物分析杂志. 2015, 35(8): 1505-1508.

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  目的: 对三白草药材不同药用部位中的三白草酮含量进行分析比较。方法: 采用Welch ultimate LP-C₁₈色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相为乙腈-水(60:40),流速1.0 mL·min^-1,检测波长240 nm,柱温35℃。结果: 三白草酮进样质量浓度在4.124~123.72 μg·mL^-1(r=0.999 8)质量浓度范围内线性关系良好,平均加样回收率(n=6)为100.4%,RSD为2.8%。10个不同产地样品中均为地上部分三白草酮的含量最高,根茎中的含量最低。结论: 三白草不同药用部位中三白草酮的含量存在明显差异,确定药用部位对临床疗效及药材质量的稳定性具有重要意义。