定量检测Ⅲ型Sabin株脊髓灰质病毒突变的荧光MAPREC法的建立和应用
Establishment and application of fluorescent MAPREC assay for quantitative analysis of mutants in type Ⅲ Sabin poliovirus
Online published: 2024-05-31
目的:使用荧光标记代替同位素标记,建立定量检测Ⅲ型Sabin株脊髓灰质炎病毒472位U到C突变比例的MAPREC(mutant analysis by PCR and restriction enzyme cleavage)法。方法:提取病毒样品RNA,反转录合成cDNA后进行非对称PCR反应以生成单链DNA扩增产物,之后采用荧光标记引物进行扩增,合成双链产物,以突变位点敏感的限制性内切酶作用后电泳分离,并分析样品的突变比例。结果:采用建立的方法对4个国际标准品进行检测,100% DNA突变标准品、IS DNA标准品、LMVR标准品以及HMVR标准品的标示值分别为100%、0.9%、0.7%、1.1%,检测结果分别为95.59%、0.84%、0.68%、1.07%,与其标示值一致性良好,并且不同实验间RSD均小于15%。检测9个批次样品,结果突变率均小于1%,符合WHO要求。结论:初步建立了基于荧光素标记的MAPREC方法,可以代替同位素法进行病毒突变的定量检测。
徐康维, 张平, 英志芳, 何蕊, 王剑锋, 江征, 李长贵 . 定量检测Ⅲ型Sabin株脊髓灰质病毒突变的荧光MAPREC法的建立和应用[J]. 药物分析杂志, 2018 , 38(2) : 288 -292 . DOI: 10.16155/j.0254-1793.2018.02.14
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